王漢青

（南京市溧水區(qū)疾病預(yù)防控制中心 江蘇 南京 211200）

甜蜜素是一種食品添加劑，國家對(duì)它制定了嚴(yán)格的限量使用標(biāo)準(zhǔn)[1]，超量使用會(huì)對(duì)人體肝臟，腎臟造成傷害[2]，尤其是老年人和兒童比較敏感。奶茶是現(xiàn)在都市比較風(fēng)糜的飲料，尤其受到年輕人的喜愛，市面上品牌眾多，同一品牌也有各種不同風(fēng)味。有些不法商家為改善產(chǎn)品口味，降低產(chǎn)品成本，違規(guī)大量添加，損害了消費(fèi)者的利益。國務(wù)院食品安全委員會(huì)也對(duì)市場(chǎng)的奶茶作了監(jiān)測(cè)任務(wù)，我中心為了順利完成省里布置的任務(wù)，用氣相色譜法[3,4]建立一種快速檢測(cè)奶茶中甜蜜素的測(cè)定[5，6]方法，滿足工作中的檢測(cè)要求。

1.材料與方法

1.1 儀器

7890B氣相色譜儀[附HP-5毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25mm）、氫火焰離子化檢測(cè)器(flame ion-ization detector,FID)]：美國安捷倫科技有限公司；G4513A自動(dòng)進(jìn)樣器：美國安捷倫科技有限公司；Vortex-1渦旋混合器：上海滬析實(shí)業(yè)有限公司；UP500HE超聲波振蕩器：南京壘君達(dá)超聲電子設(shè)備有限公司；TDZ5-WS離心機(jī)：湖南赫西儀器裝備有限公司；MS105DU電子天平：梅特利-托利多；SC-230冷藏冰箱：青島澳柯瑪股份有限公司

1.2 試劑

1.2.1 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液[GBW(E)082260a,濃度為10.0mg/mL]

1.2.2 氯化鈉（分析純）

1.2.3 亞硝酸鈉（50g/L）（分析純）

1.2.4 硫酸（200g/L）（分析純）

1.2.5 正庚烷（分析純）

1.2.6 亞鐵氰化鉀（150g/L）（分析純）

1.2.7 硫酸鋅（300g/L）（分析純）

1.3 樣品及標(biāo)準(zhǔn)液系列的制備及衍生化

1.3.1 樣品制備：稱取樣品3.00～5.00g于50mL離心管中，加30mL水，超聲提取20min,加2mL亞鐵氰化鉀溶液，混勻，再加入2mL硫酸鋅溶液，混勻，離心（3000r/min）10min,過濾，用水分次洗滌殘?jiān)?，收集濾液并定容至50mL，混勻備用。

1.3.2 標(biāo)液配制：準(zhǔn)確移取1.00mg/mL環(huán)己基氨基磺酸標(biāo)準(zhǔn)液0.50mL、1.00mL、2.5mL、5.00mL、10.00mL于50mL容量瓶中，加水定容。配成標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度為：0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL。

1.3.3 衍生化：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)溶液系列點(diǎn)，制備好的樣品各10.0mL于50mL帶蓋離心管中。離心管置試管架上冰浴中5min后，準(zhǔn)確加入5.00mL正庚烷，加入2.5mL亞硝酸鈉溶液，2.5mL硫酸溶液，蓋緊離心管蓋，搖勻，在冰浴中放置30min,期間振搖3次～5次；加入2.5克氯化鈉，蓋上蓋后置旋渦混合器上振動(dòng)1min,離心（3000r/min）10min，放入1～4℃冰箱靜置20min后分層備用。

1.3色譜條件

1.3.1 柱溫升溫程序：初溫50℃保持4min，10℃/min升溫至90℃保持0.5min，20℃/min升溫至200℃保持3min。

1.3.2 進(jìn)樣口：溫度230℃；進(jìn)樣量2uL，分流比1：1。

1.3.3 檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器（FID），溫度260℃。

1.3.4 載氣：高純氮?dú)猓髁?mL/min。

1.3.5 氫氣：30mL/min；空氣300mL/min。

2.結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別吸取2μL經(jīng)衍生化處理的標(biāo)準(zhǔn)系列各濃度溶液上清液，注入氣相色譜儀中，可測(cè)得不同濃度被測(cè)物的響應(yīng)值峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，以環(huán)己醇亞硝酸酯峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回規(guī)方程為y=10813.04x+3.325 R=0.99991，見圖1。

2.2 樣品溶液測(cè)定

在完全相同的條件下進(jìn)樣2μL經(jīng)衍生化處理的試樣待測(cè)液上清液，保留時(shí)間定性，根據(jù)測(cè)得峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣液中的組分濃度。試樣上清液響應(yīng)值若超出線性范圍，應(yīng)用正庚烷稀釋后再進(jìn)。平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。

2.3 加標(biāo)實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取奶茶樣品5.00g于50mL離心管中，準(zhǔn)確添加環(huán)己基氨基磺酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.00mg/mL）各1.0mL、2.5mL，得到兩種濃度分別為0.200g/kg、0.500g/kg，各加標(biāo)濃度平行6份，同時(shí)測(cè)定樣品本底,結(jié)果表。

表 樣品加標(biāo)回收結(jié)果

2.4 回收率和精密度

由表1中可看出在樣品中加入兩個(gè)濃度水平的加標(biāo)樣，每個(gè)水平平行測(cè)定6次，計(jì)算出平均回收率96.5%～102.9%，RSD分別為1.92%和1.33%，符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制要求。

3.結(jié)論

通過多次調(diào)整改進(jìn)色譜條件，即色譜柱溫的升溫程序，進(jìn)樣量，分流比，載氣流速等，使得環(huán)己醇亞硝酸脂與相近雜峰有了很好的分離度和靈敏度，通過加標(biāo)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，得到本方法有了很好的準(zhǔn)確度和精密度，滿足了食品風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)對(duì)奶茶中甜蜜素含量測(cè)定的方法要求。