馬 群，薛永飛，齊占濤，郭 妙

(1.大同市城墻帶狀公園管理中心，山西 大同 037004；2.大同市智家堡公園，山西 大同 037004；3.大同市兒童公園，山西 大同 037004)

1 引言

長壽花(Kalanchoebolssfeldiana)屬景天科伽藍屬多年生肉質(zhì)草本植物，又名矮生伽藍菜、圣誕伽藍菜、壽星花，原產(chǎn)非洲馬達加斯加島。19世紀末已開始商品生產(chǎn)，現(xiàn)已成為優(yōu)良冬春季室內(nèi)盆花[1]。長壽花喜溫暖濕潤和陽光充足環(huán)境，不耐寒，耐干旱，夏季怕高溫，宜良爽氣候，冬季溫度不低于5 ℃；對土壤要求不嚴，以肥沃沙壤土為好。盆栽后，在稍濕潤環(huán)境下生長旺盛；過于干旱或溫度偏低，生長緩慢，葉片發(fā)紅，花期推遲[3]。當前，提高品質(zhì)是國內(nèi)長壽花生產(chǎn)者面對的主要難題[2]。由于長壽花繁殖系數(shù)低，不能滿足生產(chǎn)的需要，為了提高繁殖系數(shù)，對長壽花進行了離體快繁技術的初步研究。

2 長壽花的概述

2.1 形態(tài)特征及品種

莖直立，株高10～30 cm，株幅15～30 cm；全株光滑無毛，葉肉質(zhì)，交互對生；橢圓狀長圓形，葉片上半部具圓齒或成波狀，下半部全緣，深綠色，有光澤，邊略帶紅色，花朵細密擁簇成團，整體觀賞效果甚佳。圓錐狀聚傘花序，花多數(shù)，花色有緋紅、桃紅、橙紅、黃、橙黃、紫紅、白，花期2～5月[2]。目前長壽花銷售可大致分為5個系列[3]。

豐花長壽是品種花色最多的系列。觀賞效果出色，適合窗臺、茶幾、餐桌等處擺放[3,4]。迷你系列株形小巧，生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高[4]。光照充足即可，對生長環(huán)境要求不高，適合新手養(yǎng)殖盆栽。垂吊系列花色較少，常見的有下垂風鈴狀花、四角星狀花[4]。特殊品種系列有黃、橙黃、橘黃、白色，特點是葉片鹿角狀，很受追求獨特的消費者喜愛[3]。重瓣系列總體花期更長、花色更豐，常見品種主要有：卡羅林(Caroline)、西莫內(nèi)(Simone)、內(nèi)撒利(Nathalie)、阿朱諾(Arjuno)、米蘭達(Miranda)、塊金(Nugget)系列、四倍體的武爾肯(Vulcan)、肯尼亞山(MountKenya)、薩姆巴(Sumba)、知覺(Sensation)和科羅納多(Coronado)[3,4]。目前這五個系列市場銷路都不錯，尤其重瓣系列已成為花卉市場的主要利潤增長點[1]。

2.2 栽培技術

扦插苗上盆時，腐葉土2份與1份砂或煤渣混合。生長期盛夏遮蔭時，保持60%的透光率，春、秋、冬季注意充足光照[1]。天氣干燥，需在植株上及周圍噴水，以增加空氣濕度。旺盛生長期，施肥2～3次/月[3,4]。冬季室內(nèi)10 ℃以上，仍然可以有很好的長勢并保持開花，室內(nèi)不低于0 ℃可以安全越冬[3,4]。病蟲害應及時發(fā)現(xiàn)、及時防治，保持植株健康生長。

2.3 目前市場狀況

多年來，長壽花一直是普通老百姓喜愛的花卉之一，能常年保持較好的市場份額，價格相對穩(wěn)定，且品種更新?lián)Q代快、緊跟國外育種公司的腳步[1，2]。多肉植物未來5年市場銷售仍將處于上升期，利潤十分可觀，除去成本和運輸、人工等費用，一盆普通多肉植物利潤為零售價的50%以上[2]。目前，國內(nèi)銷售的高品質(zhì)長壽花大多依賴荷蘭進口，把品質(zhì)提高是國內(nèi)長壽花生產(chǎn)者所面對的主要難題[3]。

2.4 組織培養(yǎng)研究目的

目前，長壽花在園林中應用日益增多，為了提高繁殖系數(shù)，以長壽花的幼葉和幼莖為外植體，接種在加入不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中，誘導愈傷組織及叢生芽，對其進行組織培養(yǎng)的初步研究。

3 材料與方法

3.1 材料

長壽花供試材料均來自四川農(nóng)業(yè)大學林木遺傳育種的實驗苗圃。以幼莖和幼葉為材料，取生長健康的當年生枝條若干，除去附著在外植體表面的污物，用濃洗衣粉液浸泡10 min，再用自來水沖洗2 h[4]。在無菌條件下，用75%的酒精處理15 s，接著用0.1%升汞溶液分別處理5min和7 min；再用升汞浸泡殺菌、無菌水漂洗過程中，間隔1～2 min輕輕攪動,達到更好的殺菌和減少升汞殘留的目的[4]。將處理好的外植體放在培養(yǎng)皿的無菌紗布上，吸取表面水分，然后將外植體剪成約0.5 cm長的小段，接種在配制好的培養(yǎng)基上。

3.2 試驗方案

以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加不同的激素構成(表1)。將每個處理分為兩部分，用0.1%升汞溶液分別處理5 min和7 min，觀察不同滅菌時間對滅菌效果及外植體成活率的影響。

表1 培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及其組合

3.3 培養(yǎng)條件

對取下的莖和葉進行常規(guī)消毒。將處理好的莖段和葉片接種到快繁培養(yǎng)基(表1)上，其中瓊脂6～7 g/L，蔗糖30 g/L，pH值調(diào)至7.0左右，高壓蒸汽滅菌18 min。培養(yǎng)溫度為25 ℃，光照周期為8 h/d，弱、散射光。所有試驗均使用試管[5]。每個處理接種15支，每支1個外植體。培養(yǎng)35 d開始統(tǒng)計愈傷組織塊數(shù)和叢生芽個數(shù)。

4 結(jié)果與分析

4.1 不同處理愈傷組織誘導的差異

將剪下的葉片、莖段接種在初代培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)8～10 d，愈傷組織在切口處形成，培養(yǎng)基中不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑及其組合對長壽花葉片、莖段形成愈傷組織的時間、生長速度、愈傷組織的致密性等方面的影響較為明顯，詳見表2。通過觀察發(fā)現(xiàn)，不同處理的長壽花在初代培養(yǎng)基上誘導愈傷組織的反應不一，主要表現(xiàn)在開始產(chǎn)生愈傷的時間、愈傷組織的生長速度和生長狀態(tài)、愈傷組織產(chǎn)生。

表2 不同處理愈傷組織的誘導情況

從表2可以看出，NAA濃度較高時，誘導形成的愈傷組織疏松、透明、濕潤、生長迅速，接種后8～10 d開始有愈傷組織在切口處形成，10～15 d進入迅速生長期。2,4-D在低濃度下(不大于1.0 mg/L)，愈傷組織誘導率較低、黃綠色、致密、生長緩慢、易褐化；高濃度下(大于1.0 mg/L)愈傷組織墨綠色、黏稠、濕潤、生長慢、不褐化。6-BA濃度較高的處理在接種后10～11 d開始有愈傷組織在切口處形成，15～20 d進入迅速生長期。

2,4-D的濃度對愈傷組織誘導的影響比較明顯，NAA的濃度對愈傷組織質(zhì)量或狀態(tài)影響較大。當NAA濃度一定時，愈傷組織誘導率和增殖情況隨6-BA濃度的升高而增加，生長狀況變化不大。因此，在長壽花愈傷組織誘導和增殖中，適當提高培養(yǎng)基中的6-BA濃度和降低NAA濃度，可提高誘導率和增殖情況，并獲取較高質(zhì)量的愈傷組織。

4.2 不同處理叢生芽誘導的差異

由表3可以看出，2,4-D 的濃度對誘導芽數(shù)的影響較大，如濃度為1.0 mg/L時，誘導的叢生芽芽數(shù)多、無失綠現(xiàn)象，而濃度為1.5 mg/L時，芽數(shù)少、有部分失綠現(xiàn)象。6-BA 較高時，誘導芽數(shù)較高。NAA的濃度對誘導芽數(shù)的影響不大。

4.3 不同滅菌時間對外植體滅菌效果的影響

由表4可以看出，升汞處理時間為7 min的材料污染率較低，外植體成活率較高。從死亡材料來看，多為切割較小的材料。所以，對于長壽花外植體的表面滅菌處理時間，應按取材的老嫩程度做適當調(diào)整，升汞處理時間7 min為宜。

表3 不同處理叢生芽的誘導情況

表4 不同滅菌時間對滅菌效果及外植體成活率的影響

5 結(jié)論與討論

5.1 結(jié)論

通過對長壽花在不同濃度、不同植物生長調(diào)節(jié)劑的組合上誘導愈傷組織和增殖情況的研究，從愈傷組織的致密性、較高的誘導率和較好的增殖情況綜合得出，適合長壽花愈傷組織誘導的培養(yǎng)基為MS+2，4-D(1.0 mg/L)+6-BA(1.5 mg/L)+NAA(1.0 mg/L)+蔗糖(30 g/L)+瓊脂(6-7 g/L)。2,4-D 的濃度對誘導芽數(shù)的影響較大。長壽花升汞處理時間7 min為宜，外植體的表面滅菌處理時間，應按取材的老嫩程度做適當調(diào)整。

5.2 討論

在植物組織初代培養(yǎng)中，污染直接影響無性系建立的速度[7]。就長壽花而言，在切口處流出的大量汁液，常導致細菌性污染，可能與汁液包裹著雜菌一起附著在外植體表面，造成升汞觸殺困難有關。本試驗中用0.1%升汞溶液處理外植體7 min，除去附著在外植體表面的汁液，減少污染的效果明顯，但不能減輕褐化，且消毒時間梯度偏少，時間跨度偏小。