郝繼偉　仵鵬

摘 要：為解決當(dāng)前雙孢菇母種生產(chǎn)中存在的問題，以菌絲生長速度和菌絲長勢(shì)為試驗(yàn)指標(biāo)，以黑小麥為主要原料，并輔以一定量的馬鈴薯、腐熟麥秸、葡萄糖及蛋白胨，通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化雙孢菇母種培養(yǎng)基配方。結(jié)果表明：試驗(yàn)獲得的優(yōu)化配方為：配制1000mL培養(yǎng)基加馬鈴薯100g、黑小麥300g、腐熟麥秸100g、葡萄糖20g、蛋白胨1g、瓊脂20g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂1g。在該配方下，無論是菌絲生長速度還是菌絲長勢(shì)，均優(yōu)于PDA綜合培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：黑小麥;雙孢菇;母種培養(yǎng)基;正交設(shè)計(jì)

中圖分類號(hào) Q939.9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2020）12-0028-03

Abstract：In order to solve the problems in the production of Agaricus bisporus， the mycelialgrowth rate and mycelial growth were taken as test indicators， and black wheat was used as the main raw material， supplemented by a certain amount of potatoes， decomposed wheat straw， glucose and peptone. Optimization of the mother culture medium of Agaricus bisporus by orthogonal design. The optimized formula obtained in the test was： 1000 mL of medium plus 100g potato， 300g black wheat， 100g decomposed wheat straw， 20g glucose， 1g peptone， 20g agar， 1gKH2PO4， and 1gMgSO4·7HO2. The growth rate and mycelium growth were better than PDA comprehensive medium.

Key words：Black wheat; Agaricus bisporus; Mother medium; Orthogonal design

雙孢菇（Agaricus bisporus）又稱白蘑菇，屬傘菌目、傘屬科、蘑菇屬，是一種食藥兩用菌類[1]，其含有大量的酪氨酸酶，對(duì)降低血壓有效，且鐵元素含量高，適于貧血或低血糖人群食用。近年來，隨著人們生活水平的提高，對(duì)雙孢菇的需求量大增，但由于傳統(tǒng)上雙孢菇母種生產(chǎn)一般采用PDA培養(yǎng)基，存在菌絲生長速率較慢、菌絲生長效果差等問題，從而限制了雙孢菇工業(yè)化生產(chǎn)的快速推廣。

韓梅、馬琴等研究表明，應(yīng)用麥粒培養(yǎng)基或麥粒培養(yǎng)基與PDA培養(yǎng)基結(jié)合生產(chǎn)雙孢菇母種的效果較好[2-4]。本研究以此為基礎(chǔ)，并結(jié)合當(dāng)?shù)仉p孢菇菌種生產(chǎn)中應(yīng)用效果較好的黑小麥，進(jìn)一步探討了雙孢菇母種培養(yǎng)基的優(yōu)化配方，為提高雙孢菇的菌種生產(chǎn)效率提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌種與原料 雙孢菇菌種W192，由山東瑞蕈天庫菌種開發(fā)有限公司提供。黑小麥，由臨沂瑞澤生物科技股份有限公司黑小麥生產(chǎn)基地提供。主要儀器設(shè)備如下：VS-840KVU型生物超凈工作臺(tái)（蘇州安泰）;YXQ-LS-50SII型全自動(dòng)立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）;010A-1E型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠）等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備 定量稱取黑小麥、烘干的腐熟麥秸，分別文火煮沸1h即得黑小麥浸出液和麥秸浸出液;馬鈴薯切成小塊后文火煮沸20min制取馬鈴薯煮汁。按設(shè)計(jì)配方在各浸出液或煮汁中加入葡萄糖、蛋白胨，各培養(yǎng)基中均加入0.1%的磷酸二氫鉀、0.1%的硫酸鎂、2%的瓊脂，調(diào)節(jié)pH值至7～7.5。待各成分加熱溶解后定容至1000mL，于121℃下滅菌30min，倒平板備用。

1.2.2 接種培養(yǎng)與指標(biāo)測(cè)定 無菌條件下用打孔器取相同大小的菌種塊接種于平板中部，用石蠟?zāi)⑴囵B(yǎng)皿封口，恒溫25℃下避光培養(yǎng)16d。菌絲平均生長速度的測(cè)定：菌絲培養(yǎng)16d后，測(cè)定總生長長度，計(jì)算菌絲的平均生長速度;菌絲長勢(shì)測(cè)定：觀察菌絲稠密度，菌落邊緣的整齊度，氣生菌絲量的多少，分別用1～5來綜合評(píng)價(jià)菌絲長勢(shì)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 正交試驗(yàn) 試驗(yàn)共設(shè)置馬鈴薯、黑小麥、腐熟麥秸以及葡萄糖+蛋白胨4個(gè)試驗(yàn)因素。4試驗(yàn)因素分別設(shè)置3個(gè)水平，按L9（34）正交表進(jìn)行培基優(yōu)化試驗(yàn)，試驗(yàn)因素水平見表1。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。

1.3.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳用量配制培養(yǎng)基，與PDA綜合培養(yǎng)基及普通小麥替換黑小麥后的優(yōu)化培養(yǎng)基作對(duì)比試驗(yàn)，檢驗(yàn)正交試驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)設(shè)6次重復(fù)，完全隨機(jī)排列。

1.4 數(shù)據(jù)分析 采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 影響雙孢菇菌絲長勢(shì)的因素 由表2可知，在各培養(yǎng)基中菌絲邊緣整齊度及氣生菌絲狀況相似，均表現(xiàn)良好;菌絲濃密度稍有差異，是菌絲長勢(shì)綜合評(píng)分的主要依據(jù)。通過極差分析可知：黑小麥對(duì)菌絲長勢(shì)的影響最大;馬鈴薯、腐熟麥秸及葡萄糖+蛋白胨的影響相似。以菌絲長勢(shì)為試驗(yàn)指標(biāo)的優(yōu)化培養(yǎng)基配方為：A2B3C3D1，即每配制1000mL培養(yǎng)基，加馬鈴薯100g，黑小麥300g，腐熟麥秸100g，蛋白胨1g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀、硫酸鎂各1g。初步分析利用黑小麥和腐熟麥秸的浸出液配制培養(yǎng)基，并添加一定量的遲效碳源和氮源，有利于形成長勢(shì)良好的雙孢菇菌絲。

2.2 影響雙孢菇菌絲生長速度的因素 由表3可知，培養(yǎng)基優(yōu)化配方為A1B3C3D2或A2B3C3D2。根據(jù)極差R值的大小，各試驗(yàn)因素對(duì)菌絲生長速度影響程度的大小排序依次為黑小麥>馬鈴薯>葡萄糖+蛋白胨>腐熟麥秸。進(jìn)一步對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，其結(jié)果見表4。除腐熟麥秸外，其他3個(gè)因素對(duì)菌絲生長速度均有顯著影響或極顯著影響。根據(jù)F值與p值大小可知，各試驗(yàn)因素對(duì)菌絲生長量影響程度的大小排序依次為黑小麥>馬鈴薯>葡萄糖+蛋白胨>腐熟麥秸，與極差分析結(jié)果一致。由于C因素對(duì)菌絲生長速度無顯著影響，A2與A1、B2與B3、D2與D3間無顯著差異，在配制培養(yǎng)基時(shí)可分別取最低含量，以降低試驗(yàn)成本。綜合極差分析與方差分析結(jié)果，以菌絲生長速度為試驗(yàn)指標(biāo)的優(yōu)化培養(yǎng)基配方為A2B2C3D2，即每配制1000mL培養(yǎng)基，加馬鈴薯100g，黑小麥200g，葡萄糖20g，腐熟麥秸100g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀、硫酸鎂各1g。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果分析 試驗(yàn)中通過菌絲生長速度與菌絲生長勢(shì)2個(gè)指標(biāo)衡量雙孢菇菌絲生長狀況，根據(jù)2個(gè)指標(biāo)確定的最佳配方并不完全相同，特別是應(yīng)用成本較低的腐熟麥秸對(duì)菌絲生長速度無顯著影響，但對(duì)菌絲長勢(shì)有一定的影響。綜合試驗(yàn)分析結(jié)果，本研究最終確定的培養(yǎng)基優(yōu)化配方為A2B3C3D3，即每配制1000mL培養(yǎng)基，加馬鈴薯100g，黑小麥300g，腐熟麥秸100g，葡萄糖20g，蛋白胨1g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀、硫酸鎂各1g。由表5可知，優(yōu)化配方菌絲生長速度為4.39mm/d，大于普通小麥替換黑小麥優(yōu)化配方的4.19mm/d，但未達(dá)顯著水平，極顯著大于PDA綜合培養(yǎng)基的3.22mm/d;菌絲長勢(shì)用普通小麥替換黑小麥后無明顯差異，但明顯優(yōu)于PDA綜合培養(yǎng)基。優(yōu)化配方試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)中較好的第3號(hào)和6號(hào)處理相比，菌絲長勢(shì)相同，但菌絲平均生長速度稍大。因此，經(jīng)驗(yàn)證最佳優(yōu)化配方確定為A2B3C3D3。

3 結(jié)論與討論

本次試驗(yàn)結(jié)果表明，以菌絲生長速度和菌絲長勢(shì)為試驗(yàn)指標(biāo)，雙孢菇母種培養(yǎng)的最佳配方為：每配制1000mL培養(yǎng)基加馬鈴薯100g，黑小麥300g，腐熟麥秸100g，葡萄糖20g，蛋白胨1g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g。以該配方生產(chǎn)雙孢菇母種，生長速度達(dá)4.39mm/d，且菌絲長勢(shì)良好。

在本次試驗(yàn)中，應(yīng)用腐熟麥秸浸提液生產(chǎn)雙孢菇母種，對(duì)菌絲生長速度并無顯著提高，但每1000mL培養(yǎng)基中加腐熟麥秸100g時(shí)，菌絲生長速度大于不加和加50g 2種情況，這與付江習(xí)[5]的糞草培養(yǎng)基可促菌絲早發(fā)的研究結(jié)果相似。由此可見，應(yīng)用黑小麥代替普通小麥生產(chǎn)雙孢菇母種是完全可行的，且效果更好。由于在雙孢菇栽培種工業(yè)化生產(chǎn)中多采用黑小麥為主要生產(chǎn)基質(zhì)，以黑小麥浸提液生產(chǎn)出的雙孢菇母種，在栽培種基質(zhì)上應(yīng)適應(yīng)性更強(qiáng)、發(fā)菌更快，但具體應(yīng)用效果還有待于進(jìn)一步試驗(yàn)檢驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)

[1]邱奉同，郝繼偉.食用菌栽培技術(shù)[M].濟(jì)南：山東人民出版社，2014.

[2]韓梅，楊文輝，郭石生.雙孢菇母種培養(yǎng)基優(yōu)選試驗(yàn)[J].青?？萍?，2007（01）：38-39.

[3]馬琴，張福元.雙孢菇母種培養(yǎng)基優(yōu)選試驗(yàn)[J].食用菌，2003（02）：20-21.

[4]劉剛.不同培養(yǎng)基和pH值對(duì)雙孢菇母種菌絲生長的影響[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014（16）：71，74.

[5]付江習(xí).利用糞草培養(yǎng)基制作雙孢菇母種[J].食用菌，1999（06）：19. （責(zé)編：張宏民）