任玲君 余國慶 方麗娟

肝細胞肝癌（HCC）是目前臨床最高發(fā)的惡性腫瘤之一［1］。甲胎蛋白（AFP）是目前臨床使用最基礎(chǔ)的血清學(xué)標(biāo)志物，因診斷敏感性僅40%～65%［2-4］，且早期肝癌陽性率更低，有些患者甚至整個病程中血清AFP一直呈陰性［5］。另外，部分其他腫瘤（如胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等）也會出現(xiàn)不同程度的陽性率［6-8］。但單用AFP進行肝癌的早期診斷有明顯的缺陷，發(fā)掘新的血清標(biāo)志物尤為重要［9］。熱休克蛋白90α（Hsp90α）是一組與細胞感受應(yīng)激損傷關(guān)系密切的蛋白質(zhì)［10］，具有分子伴侶作用，參與多種細胞內(nèi)蛋白的折疊、裝配及運轉(zhuǎn)［11］，研究發(fā)現(xiàn)，Hsp90α與腫瘤發(fā)生、生物學(xué)行為及其預(yù)后有較密切關(guān)系，Hsp90α在肝癌中高表達，可作為肝癌早期診斷標(biāo)志物［12］。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）是一類分布在細胞膜表面的蛋白聚糖，通過一系列細胞表面受體信號傳導(dǎo)來調(diào)節(jié)其形態(tài)和行為［13］，文獻報道早期肝癌組織中GPC3水平顯著升高，有較高的靈敏度和特異性，有望成為肝癌早期診斷或鑒別診斷有價值的新的血清學(xué)標(biāo)志物［14］。Hsp90α和GPC3的臨床應(yīng)用給肝癌的早期診斷提供可能，本資料中利用血清Hsp90α、AFP和GPC3進行聯(lián)合檢測，旨在通過研究發(fā)現(xiàn)其單一或聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷效果及臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年4月至2017年3月患者及體檢者共619例，其中男317例，女302例；年齡15～90歲，平均（49.95±7.43）歲。其中HCC患者193例，男101例，女92例，平均年齡（51.15±6.62）歲；肝硬化患者127例，男63例，女64例，平均年齡（49.95±5.77）歲；慢性肝炎患者101例，男53例，女49例，平均年齡（50.55±7.43）歲。對照組198例為體檢健康者，其中男101例，女97例，平均年齡（52.02±6.48）歲。肝癌組、肝硬化組、慢性肝炎組和健康對照組的性別、年齡、體重量指數(shù)等臨床資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。本研究均與患者簽署知情同意書。

1.2 實驗室檢查 取各組受試者靜脈血3ml，靜置15～30min后以3500g離心5min，4h內(nèi)完成血清Hsp90α、AFP及 GPC3檢 測。Hsp90α 和 GPC3試劑及校準(zhǔn)品來自于江蘇酶免實業(yè)有限公司ELISA法，用sunrise型酶標(biāo)儀測定；血清AFP檢測采用Abbott i2000分析儀及配套試劑，檢測過程嚴格按照SOP文件操作。1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。采用多因素logistics回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 肝癌組、肝硬化組、慢性肝炎組和健康對照組臨床資料比較（）

表1 肝癌組、肝硬化組、慢性肝炎組和健康對照組臨床資料比較（）

組別 肝癌組 肝硬化組 慢性肝炎組 對照組 統(tǒng)計量 P值例數(shù) 193 127 101 198性別比（n，男/女） 101/92 63/64 52/49 101/97 χ2=0.215 0.928年齡（歲） 51.15±6.62 49.95±5.77 50.55±7.43 52.02±6.48 t=0.610 0.648體重量指數(shù)（kg/m2）19.62±1.52 19.52±1.13 18.99±1.41 19.85±1.23 t=0.664 0.625

2.1 各組血清Hsp90α、AFP及GPC3水平比較 見表2。

表2 各組Hsp90α、AFP和GPC3水平比較［g/L，（）］

表2 各組Hsp90α、AFP和GPC3水平比較［g/L，（）］

注 ：與 T0比較，*P＜0.05，#P＜0.05

組別HCC組肝硬化組 慢性肝炎組 對照組 P值T0期 T1期 T2期 T3期 T4期n 51 48 45 41 8 127 101 98 Hsp90α 0.054±0.012 0.065±0.014 0.074±0.008 0.085±0.006* 0.082±0.005# 0.014±0.002 0.004±0.003 0.002±0.001 ＜0.05 AFP 426.18±58.62 583.24±62.65 749.25±57.18 765.52±43.62* 752.62±35.39# 126.18±15.99 86.18±5.79 9.07±1.49 ＜0.05 GPC3 216.28±34.39 224.40±43.21 239.01±50.07 445.80±53.15* 644.20±47.33# 151.70±13.97 191.20±13.21 13.50±9.01 ＜0.05

圖1 Hsp90α在HCC未轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移患者中的表達差異

2.2 Hsp90α在HCC未轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移患者中的表達差異分析 因Hsp90α、AFP和GPC3在肝癌組不同分期表達存在明顯差異，因此，進一 步 以Hsp90α為觀察對象，探討其在HCC未轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移患者中的表達情況。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)移病例組血漿Hsp90α顯著高于未轉(zhuǎn)移組（P=0.003）。見圖 1。

2.3 HCC組不同預(yù)后情況患者圍介入期血清Hsp90α、AFP和GPC3水平比較 見表3。

表3 HCC組不同預(yù)后情況患者圍介入期血清Hsp90α、AFP和GPC3水平比較［g/L，（）］

表3 HCC組不同預(yù)后情況患者圍介入期血清Hsp90α、AFP和GPC3水平比較［g/L，（）］

注：死亡組各時間點HSP90ɑ、AFP、GPC3與生存組比較P均＜0.05

時間/檢測項目 死亡組（n=102） 生存組（n=91）T0 Hsp90α 0.059±0.023 0.022±0.007 AFP 422.52±41.27 301.18±32.67 GPC3 212.27±22.34 103.54±10.28 T1 Hsp90α 0.063±0.013 0.066±0.012 AFP 592.52±19.55 487.88±12.01 GPC3 232.33±20.15 122.34±9.73 T2 Hsp90α 0.080±0.020 0.062±0.006 AFP 701.30±33.31 665.22±22.03 GPC3 241.77±22.54 189.31±10.00 T3 Hsp90α 0.084±0.013 0.059±0.010 AFP 752.42±29.55 671.18±14.57 GPC3 432.28±20.33 388.27±17.48 T4 Hsp90α 0.089±0.023 0.052±0.008 AFP 769.52±11.99 701.09±11.14 GPC3 642.27±25.04 520.54±18.01

2.4 Hsp90α、AFP及GPC3單一及聯(lián)合檢測對HCC的診斷價值 單一指標(biāo)檢測診斷時，Hsp90α的敏感度最高（74.20%），但GPC3的特異度最高（82.06%）；兩個聯(lián)合檢測方案中，Hsp90α/GPC3方案的敏感度 最 高（89.22%），AFP+GPC3和 Hsp90α+AFP方案特異度較高（92.44%，84.05%）；三項聯(lián)合檢測時，Hsp90α/AFP/GPC3方案的敏感度較高（92.3%），Hsp90α+AFP+GPC3特異度較高（97.68%）。肝癌患者血清Hsp90α、AFP、GPC3單項檢測，Hsp90α的敏感性最高，而特異性GPC3最高，三者聯(lián)合檢測的靈敏度提高至92.3%，較其單項檢測的敏感度差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.5 利用 ROC曲線評價Hsp90α、AFP、GPC3單項及3項聯(lián)合檢測對肝癌的診斷價值 單項檢測時，Hsp90α的曲線下面積（AUC）為0.8931，AFP的AUC為 0.776，GPC3的 AUC為 0.728。 以 Hsp90α、AFP、GPC3水平為檢驗變量，以診斷結(jié)果為狀態(tài)變量，用向后Backward Condition方法做Binary Logistic回歸分析，計算各個體預(yù)測值的變量PRE。對上述Logistic回歸模型行似然比檢驗，結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=129.83，P＜0.001），通過做三者聯(lián)合檢測的ROC曲線分析。Hsp90α、AFP及GPC3聯(lián)合檢測時AUC為0.923，均高于單項檢測，但三項聯(lián)合與Hsp90α單獨檢測AUC差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=1.34，P=0.15）。在肝癌檢測時，3項聯(lián)合檢測優(yōu)于單項檢測，而Hsp90α優(yōu)于AFP及GPC3。

3 討論

AFP是目前臨床上應(yīng)用最早，最基礎(chǔ)的HCC血清學(xué)標(biāo)志物，因部分HCC患者的AFP值低表達，易導(dǎo)致肝癌的漏診和誤診。另外，約30%的肝硬化、慢性肝病等非HCC患者的AFP水平也可以不同程度的升高［5］，故特異性低，臨床使用多項腫瘤標(biāo)志物進行聯(lián)合檢測勢在必然。

Hsp90α是一種腺嘌呤核苷三磷酸依賴的具有分子伴侶功能的蛋白質(zhì)，通過其與信號通路中的關(guān)鍵蛋白酶相互作用，調(diào)控細胞的生存、分化及代謝等重要生理過程。高水平表達的HSP90可促進腫瘤的發(fā)展，促進癌癥細胞的擴散和轉(zhuǎn)移，影響患者的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸。

本資料結(jié)果顯示，各實驗組Hsp90α水平均高于正常對照組，且HCC組高于肝硬化組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示Hsp90α水平檢測可用于HCC的診斷或早期診斷，同時也可作為兩者的鑒別診斷。結(jié)果顯示，本資料納入的193例HCC患者，依據(jù)其病理分期進行分組，隨著患者分期增加，Hsp90α、AFP及GPC3的表達水平均顯著升高，提示高表達指標(biāo)可能與HCC的病理分期具有密切聯(lián)系。現(xiàn)有臨床HCC的病理分期主要依靠組織活檢確認，因取材等因素不適于病情治療及轉(zhuǎn)歸監(jiān)測，多種血清學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合檢測成為可能。

由于單一標(biāo)志物的敏感性及特異性均無法達到臨床診斷需要，多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可彌補了這一缺陷。敏感性提高至92.3%，與單項檢測比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。同時通過ROC曲線分析，Hsp90α對肝癌診斷的敏感性高于AFP和GPC3，三者聯(lián)合檢測對肝癌診斷的敏感性顯著高于任何單一檢測，說明三項指標(biāo)聯(lián)合后能有效降低漏診率。

綜上所述，血清Hsp90α、AFP及GPC3聯(lián)合檢測能夠彌補單項檢測的缺陷，提高HCC的陽性檢出率，對HCC早期診斷或鑒別診斷、減少漏診具有臨床應(yīng)用價值。在臨床實際應(yīng)用中，須注意聯(lián)合檢測存在的缺點是假陽性率偏高。所以一定要結(jié)合病理、CT、B超等檢查結(jié)果綜合考慮，剔除假陽性患者，盡量減少誤診和漏診。