喻運(yùn)珍，鄧平，張立強(qiáng)，周偉東，羅楊志，鄭青，李勤，余少梅

（1．武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北 武漢430207；2．武漢中博水產(chǎn)生物技術(shù)有限公司，湖北 武漢430070）

鱖（Sinipercachuatsi）隸屬于硬骨魚綱（Osteichthyes），鱸形目（Perciformes），鮨科（Serranidae），鱖屬（Siniperca），是我國特有的淡水名貴經(jīng)濟(jì)魚類。因其肉味鮮美、營養(yǎng)豐富，已成為國內(nèi)極為重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種[1]，也是武漢市周邊主養(yǎng)的重要經(jīng)濟(jì)魚類。

隨著鱖養(yǎng)殖面積和養(yǎng)殖密度逐漸增加，導(dǎo)致疾病暴發(fā)越來越嚴(yán)重，包括傳染性脾腎壞死病毒病、細(xì)菌性爛鰓病及原生動物的車輪蟲病等是危害養(yǎng)殖鱖的主要疾病[2-3]。養(yǎng)殖戶在鱖發(fā)生疾病的過程中常常根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷給藥，甚至在治療效果不佳時使用違禁藥物，對食品安全和環(huán)境造成了潛在的威脅。

目前對水產(chǎn)品抗生素殘留的檢測主要發(fā)生在銷售環(huán)節(jié)[4-5]，而對養(yǎng)殖環(huán)節(jié)特別是疾病爆發(fā)階段是否添加違禁抗生素的檢測鮮有報(bào)道。硝基呋喃類和氯霉素為水產(chǎn)養(yǎng)殖上禁用藥物，但仍有不少文獻(xiàn)報(bào)道在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中被普遍使用[6-7]。因此作者收集了武漢市周邊地區(qū)送檢的各個階段的患病鱖，對其水質(zhì)、病因進(jìn)行分析，并檢測了硝基呋喃類和氯霉素殘留情況，旨在為水產(chǎn)品養(yǎng)殖環(huán)節(jié)特別是病害發(fā)生階段硝基呋喃類和氯霉素的非法添加狀況提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，并對指導(dǎo)養(yǎng)殖戶安全用藥，減少濫用抗生素的風(fēng)險具有重要的指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 樣品收集

2019年5—9月收集送往武漢市農(nóng)科院水產(chǎn)所患病鱖（主要來源為武漢市周邊的養(yǎng)殖池塘）共計(jì)14批42條。部分養(yǎng)殖戶在送檢患病鱖前已憑經(jīng)驗(yàn)用藥，甚至使用了違禁藥。對發(fā)病塘水質(zhì)按《水和廢水監(jiān)測分析方法》進(jìn)行測定[8]。病原先通過解剖及顯微觀察確定病因，對具有細(xì)菌性爛鰓典型癥狀的患病鱖進(jìn)行病原菌的分離純化及鑒定[9]，并對疑似傳染性脾腎壞死病毒病的患病鱖進(jìn)行病毒檢測[10]。用于硝基呋喃類和氯霉素檢測的樣品置于－80℃條件下冷凍保存待測定。

1.2 樣品處理與分析

將冷凍的樣品置于4℃下解凍12 h后，去皮，取肌肉部分勻漿后于-18℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

硝基呋喃類藥物（NFs）主要檢測4種常見的代謝物，3-氨基-2-惡唑烷酮（AOZ）、氨基脲（SEM）、1-氨基-乙內(nèi)酰脲（AHD）和5-嗎啉基甲基-3-氨基-2-惡唑烷（AMOZ）。按照國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006《水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[11]，并適當(dāng)優(yōu)化后進(jìn)行測定。

氯霉素（CAP）依據(jù)GB/T 22338—2008《動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定》[12]，并適當(dāng)優(yōu)化后進(jìn)行測定。

2 結(jié)果分析

2.1 發(fā)病塘水質(zhì)分析

由表1可知，送檢的14份水樣，pH值變化范圍為7.37~8.13，屬于偏堿性水體?？偟?、氨氮和亞硝態(tài)氮濃度變化范圍分別為5.03~7.53 mg/L、0.605~2.99 mg/L和0.001~0.779 mg/L。其中有3份水樣亞硝態(tài)氮濃度低于0.1 mg/L?？偭缀突钚粤诐舛茸兓秶謩e為0.341~1.057 mg/L和0.009~0.74 mg/L。

2.2 患病鱖病因分析

由表2可知，對送檢的14批次患病鱖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室解剖，疑似病毒病共計(jì)9例，通過PCR檢測僅發(fā)現(xiàn)1例為鱖傳染性脾腎壞死病毒病感染。顯微鏡下對患病鱖的鰓及體表粘液進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)3例為車輪蟲病。對疑似爛鰓病病原進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定，確定為柱狀黃桿菌引起的細(xì)菌性爛鰓病。

表1 發(fā)病塘水質(zhì)參數(shù)

表2 患病鱖病因分析結(jié)果

表3 患病鱖體內(nèi)硝基呋喃類和氯霉素殘留情況

2.3 患病鱖體內(nèi)硝基呋喃類和氯霉素殘留分析

患病鱖體內(nèi)硝基呋喃類和氯霉素殘留情況的檢測結(jié)果見表3。對14批次患病鱖肌肉中硝基呋喃類殘留進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，14批次樣品均未檢出硝基呋喃類。對14批次患病鱖肌肉中氯霉素殘留進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，有1例使用了禁用藥物氯霉素，檢出率為7.14%。

3 討論

與其他養(yǎng)殖魚類不同，鱖為肉食性魚類，主要以活的餌料魚為食。5—9月是鱖快速生長階段，攝食旺盛，排泄物較多，水質(zhì)容易惡化。對14批次患病鱖養(yǎng)殖池塘水質(zhì)指標(biāo)分析表明，除3份水樣亞硝態(tài)氮含量較低外，其他池塘總氮、氨氮及亞硝態(tài)氮明顯偏高。已有研究表明，較高的氨氮及亞硝態(tài)氮可造成魚類免疫力下降，誘發(fā)鱖疾病發(fā)生[13-14]。

患病鱖病原檢測結(jié)果表明，9例疑似病例，通過PCR檢測僅發(fā)現(xiàn)1例確診為鱖傳染性脾腎壞死病毒病。推測可能是由水環(huán)境不良導(dǎo)致鱖產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)或其他疾病引起，需提高診斷技能。原生動物車輪蟲病也是與水環(huán)境特別是亞硝態(tài)氮密切相關(guān)的疾病，車輪蟲感染魚體鰓部后，造成繼發(fā)性細(xì)菌感染，會引發(fā)細(xì)菌性爛鰓[15]。結(jié)合水質(zhì)指標(biāo)數(shù)據(jù)，鱖養(yǎng)殖過程中應(yīng)注意水質(zhì)特別是氨氮及亞硝態(tài)氮的調(diào)控，把水質(zhì)管理和疾病診斷治療結(jié)合起來，可降低疾病的爆發(fā)幾率，減少用藥風(fēng)險。

硝基呋喃類藥物是一類重要的廣譜抗菌藥物，在生物體內(nèi)分別代謝產(chǎn)生AOZ、SEM、AHD和AMOZ。因具有致癌、致突變等不良反應(yīng)，我國在2002年將硝基呋喃類藥物列入《食用動物禁用的獸藥及其它化合物清單》[16]。該次調(diào)查的武漢市周邊發(fā)病塘14批次患病鱖樣品中，均未檢測到硝基呋喃類殘余（檢出限為0.25μg/kg）。董峰光等對煙臺轄區(qū)內(nèi)水產(chǎn)品養(yǎng)殖環(huán)節(jié)、運(yùn)輸環(huán)節(jié)、流通環(huán)節(jié)和餐飲環(huán)節(jié)硝基呋喃的污染狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn)，僅流通環(huán)節(jié)樣品存在硝基呋喃代謝物檢出[17]?？岛幍劝l(fā)現(xiàn)廣東省市售鱖體內(nèi)硝基呋喃及其代謝物檢出率為4%[18]。王志芳等對廣西羅非魚主產(chǎn)區(qū)養(yǎng)殖池塘抗生素殘留狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在養(yǎng)殖水體、底泥及羅非魚體內(nèi)均未檢測到硝基呋喃類抗生素[19]。根據(jù)已有研究和作者的檢測結(jié)果推測，硝基呋喃類抗生素在流通環(huán)節(jié)使用可能更普遍。

氯霉素為廣譜抗菌藥物，但具有一定的毒副作用。我國在2002年將氯霉素列入《食用動物禁用的獸藥及其它化合物清單》[16]。氯霉素作為水產(chǎn)養(yǎng)殖違禁藥物，在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)、運(yùn)輸環(huán)節(jié)、流通環(huán)節(jié)和餐飲環(huán)節(jié)仍存在違規(guī)添加的情況。邱文倩等對福建省養(yǎng)殖場、批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場、餐館、超市和運(yùn)輸車輛的魚養(yǎng)殖用水調(diào)查發(fā)現(xiàn)，氯霉素檢出率在5.6%～15.6%[7]。華娟等對福建市售動物源性食品中氯霉素類藥物的殘留水平調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖魚的檢出率為82.1%[20]。林佩玲等檢測發(fā)現(xiàn)大亞灣網(wǎng)箱養(yǎng)殖的虎龍斑和黑鯛中存在氯霉素殘留量[21]。該調(diào)查的武漢市周邊患病鱖樣品中1例檢測氯霉素，殘留量達(dá)5.86μg/kg（檢出限為0.1μg/kg）。與已有研究相似，氯霉素在鱖養(yǎng)殖環(huán)節(jié)特別是疾病爆發(fā)階段有添加的可能性。雖然該調(diào)查的氯霉素藥物檢出率不高，但卻有較高的檢出濃度，對食用者健康仍具有較大的威脅。

因此，在鱖養(yǎng)殖環(huán)節(jié)要指導(dǎo)養(yǎng)殖戶安全用藥，強(qiáng)調(diào)改善養(yǎng)殖水環(huán)境對減少魚類病害發(fā)生的重要作用，并在鱖易爆發(fā)疾病階段加強(qiáng)監(jiān)管，減少使用違禁藥物的可能性。