何樹華 陳御珍 鄭明彬 陳銘祥＊

高效液相色譜法是儀器分析的一種重要方法[1]，是醫(yī)藥院校中醫(yī)學類、藥學類及其相關專業(yè)必需的實驗課內(nèi)容，是實踐性操作性專業(yè)性很強的一種分析方法，在教學和科研方面為培養(yǎng)技能型醫(yī)藥專才發(fā)揮著重要作用。高效液相色譜適用于分析受熱不穩(wěn)定易分解的、高沸點、不易揮發(fā)的、分子量較大、不同極性的天然和合成有機化合物，應用范圍十分廣泛，具有高效率、高分辨率、高靈敏度、高速度的特點。而且，儀器十分昂貴，并要經(jīng)常維護，因而，對于高效液相的管理提出了很高的要求。

1 制度管理

建立和完善高效液相色譜相關管理制度，使管理制度科學化合理化規(guī)范化，在學校和學院層面建立《高效液相色譜使用、維護管理制度》，加強管理。由于使用人員較多，要實行提前預約制度，按照預約時間排隊。儀器使用前要熟悉儀器操作規(guī)程，不得做與實驗無關的參數(shù)設置；不得拆卸儀器，有問題要及時匯報。因?qū)嶒炄藛T使用不當造成的儀器或軟件損壞由實驗者或其負責人負責盡快維修。實驗數(shù)據(jù)存放建立的文件夾，以實驗者名字命名，數(shù)據(jù)拷貝用專用U 盤，不得擅自在電腦里安裝軟件，確實需要安裝需經(jīng)過管理者同意。使用者要經(jīng)過專業(yè)的操作培訓，合格后方可單獨操作儀器。通過規(guī)范化的制度管理，不但能提高儀器的使用率，還能延長儀器的壽命。

2 規(guī)范化操作管理

進行高效液相色譜實驗時，每個環(huán)節(jié)的操作，直接影響實驗的成敗，有些失誤甚至會造成儀器不同零部件的損壞，因而每個操作都要嚴謹和細致，因此有必要規(guī)范化操作，制定標準的操作流程。以普通的高效液相色譜儀為例，具體步驟要有嚴格的先后操作順序：

（1）過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。

（2）對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10- 20 分鐘。

（3）打開HPLC 工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。

（4）進入HPLC 控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。

（5）有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual 菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。

（6）調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。

（7）設計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩(wěn)流，一般2～5 分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading- inject 轉(zhuǎn)換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

（8）進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

（9）關機時，先關計算機，再關液相色譜。

只有規(guī)范具體的操作流程，才能更好地進行分析實驗，獲得準確真實科學的實驗數(shù)據(jù)，才能更好地維護好高效液相色譜儀器。

3 維護管理

在使用高效液相色譜色譜儀器后一定要做好維護管理，一般來說最好的維護就是經(jīng)常規(guī)范性使用，在操作使用時充分了解儀器的注意事項，做到科學分析合理使用。流動相需采用色譜純?nèi)軇殲槌兯?，準備所需的流動相，以滿足儀器要求，避免損壞色譜柱;超純水須當天配當天用；進樣或溶劑進入色譜柱前須經(jīng)徹底的排氣，嚴禁氣泡進入色譜柱;流動相進入色譜柱后要檢查流路有沒漏液，特別是色譜柱的接頭；嚴禁100%水進入反相色譜柱，需有一定的有機溶劑比例；嚴禁使用沒經(jīng)濾膜過濾的溶劑沖洗色譜柱，避免將互不相溶的溶劑一同進入泵內(nèi)；流動相需經(jīng)過濾、除氣后方可使用，用適合的0.45μm 濾膜過濾，超聲脫氣20～30min；待分析的樣品必須徹底溶解澄清、過濾，配制樣品和標準溶液，用合適的0.45μm 濾膜過濾，以避免堵塞、損壞色譜柱，所有通過色譜柱的液體須經(jīng)嚴格過濾；流動相的比例須逐步過渡，不能跨度太大；流速不論是由慢到快還是由快到慢也須逐步過渡，最大流速一般不超過10ml/min；分析完成后，須及時清洗色譜柱和檢測器的比色池，原則上先用流動相沖洗30min，再逐步過渡到100%有機溶劑（甲醇或乙腈）沖洗30min，嚴禁由一種溶劑馬上變換另一種溶劑，酸堿鹽類須先由90%水:10%甲醇沖洗30～60min，再逐步過渡到100%甲醇沖洗。長時間不用色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存普通；C18 柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析，定期測柱效，有下降，可以用10%異丙醇甲醇沖洗色譜柱。每次實驗后要做好登記使用記錄，長時間不用時，管理人員應該定期檢查高效液相色譜各個部件的狀況，做好相關的維護措施。

4 總結

高效液相色譜儀器在醫(yī)藥院校的教學和科研中使用率和利用率很高，本文通過儀器的制度化管理、操作規(guī)范化管理和維護管理，使其更好地服務于教學和科研，只有加強各方面的管理，提高使用率延長使用壽命[2]，才能更好地提高教學質(zhì)量和科研水平，為學校和社會培養(yǎng)創(chuàng)新型技能型高素質(zhì)醫(yī)藥人才，提高畢業(yè)生的就業(yè)競爭力。