王旭蘭 ，劉齊元，王群讓，王 毅

冠心病(coronary heart disease，CHD)的發(fā)病率逐年增加，發(fā)病機制十分復(fù)雜，其中脂代謝紊亂、脂肪沉積是冠心病發(fā)生、發(fā)展的重要原因之一[1]。目前降膽固醇脂在冠心病的治療中有著不可或缺的地位。他汀類藥物通過抑制肝臟羥甲基戊二酰輔酶A(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A，HMG-CoA)還原酶，進而阻礙甲羥戊酸中間體的合成而發(fā)揮降膽固醇作用。越來越多的臨床試驗發(fā)現(xiàn)，強化降低低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、強化降脂(即將LDL-C降至<1.8 mmol/L或在原有基線水平降低50%以上)能有效減少冠心病病人心血管事件的發(fā)生率和死亡率[2]。然而大劑量他汀的“6%效應(yīng)”和隨之而來的不良反應(yīng)(轉(zhuǎn)氨酶升高、肌溶解等)又限制了他汀的應(yīng)用[3]。脂必泰是由紅曲、澤瀉、白術(shù)、山楂4味中藥提取物配伍組成的純中成藥制劑，因其可降低總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白(LDL)，且副作用較少，還能升高高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)和抗動脈粥樣硬化作用而逐漸被臨床醫(yī)師接受[4]。有研究提示HDL在冠心病、瓣膜病等疾病和手術(shù)狀態(tài)下失去原有的抗炎、抗凝、抑制動脈粥樣硬化、保護內(nèi)皮功能、促進血管新生等心血管保護作用而變?yōu)橼呇譎DL，而他汀可以部分改善趨炎HDL的功能[5-6]。本研究探討脂必泰聯(lián)合小劑量他汀治療對冠心病病人血脂及HDL功能的影響及其可能的機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月—2018年7月就診于陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科的冠心病病人60例作為試驗組，年齡42～65(48.75±11.82)歲，同時排除患有未控制的高血壓、嚴重感染性疾病等病人。將病人隨機分為他汀組(阿托伐他汀20 mg，治療8周)和脂必泰組[脂必泰(1粒，2次/日)聯(lián)合阿托伐他汀(10 mg)，治療8周]，每組30例。另選取同期于陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院體檢的志愿者30名作為對照組，年齡45～60(49.72±12.31)歲。所有參與者簽署知情同意書，本研究通過陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 HDL提取 采集60例冠心病病人用藥前、對照組人群體檢時及各組試驗終點時的空腹靜脈血，依據(jù)文獻[7]采用超高速離心提取HDL。BCA蛋白濃度測定試劑盒(美國，Thermo Scientific公司)測定HDL濃度后放4 ℃冰箱(中國，海爾公司)保存?zhèn)溆?，提取的HDL可存放3周。

1.2.2 抗氧化力檢測 依據(jù)文獻[6]通過血漿游離(cell-free)法檢測各組HDL抗氧化力：各組取等量(100 μg/mL)的HDL，分別加入10 μL CuCl2(21.7 μmol/L)避光孵育1 h，在孵育30 min時再加入10 μL 2.0 mg/mL 二氯熒光素二乙酸酯(Dichlorofluorescein-diacetate，DCFH-DA)孵育30 min。孵育結(jié)束后用酶標儀(美國，Thermo Scientific 公司)連續(xù)12 h讀取HDL的相對熒光強度值(relative fluorescence units，RFU)，RFU越高提示抗氧化能力越弱。

1.2.3 血管新生功能檢測 采用轉(zhuǎn)基因斑馬魚細胞株TG ，由The Zebrafish Information Network (ZFIN，美國)提供，這一基因型細胞株的內(nèi)皮細胞表達增強綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)。待斑馬魚長至3～12個月時，讓其自然交配產(chǎn)卵(胚胎)，收集和挑選處于1～4細胞期的健康胚胎進行實驗。將挑選好的斑馬魚胚胎接種于24孔板內(nèi)，分別用各組HDL孵育96 h，96 h后用0.05%的苯氧乙酸將胚胎麻醉，然后將每3個胚胎移入一個96孔板的微孔內(nèi)置熒光顯微鏡下拍照，通過檢查每個胚胎在腸下靜脈血管(subintestinal vein，SIV)異位血管生長的多少對血管新生能力進行評價。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用Graph pad prism 5 作圖。

2 結(jié) 果

2.1 3組臨床資料比較 3組年齡和性別比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。3組血脂指標比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 3組臨床資料比較

注：TG為三酰甘油；與對照組比較，①P<0.05。

2.2 各組HDL抗氧化能力比較 與對照組(374.23±57.35)比較，試驗組治療前HDL抗氧化能力(999.30±79.62)明顯減弱；治療后他汀組(742.73±87.75)和脂必泰組(687.20±98.64)HDL抗氧化能力較治療前均改善。詳見圖1。

與對照組比較，＊ P<0.05；與試驗組(治療前)比較， # P<0.05。

2.3 HDL對斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的影響 與對照組比較，試驗組(治療前)HDL抑制斑馬魚胚胎SIV異位血管的血管新生，他汀組和脂必泰組HDL促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生。詳見圖2。

圖2 HDL對斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的影響

3 討 論

本研究顯示，冠心病病人的HDL抗氧化能力較正常HDL減弱，其促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的能力也較正常HDL減弱，常規(guī)劑量他汀治療及低劑量

他汀聯(lián)合脂必泰治療均可一定程度改善冠心病病人HDL抗氧化能力及促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生能力，且常規(guī)劑量他汀治療與低劑量他汀聯(lián)合脂必泰治療比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。提示就分子生物學(xué)層面，脂必泰聯(lián)合低劑量他汀與常規(guī)劑量他汀在冠心病病人的應(yīng)用中療效接近。

多項關(guān)于他汀的大規(guī)模臨床試驗均證實，膽固醇水平的降低程度與冠心病病死率及總死亡率呈負相關(guān)[8]。他汀類通過降低LDL-C水平，降低脂核巨噬細胞數(shù)和斑塊脂質(zhì)含量，進而減小斑塊體積、降低斑塊硬度和增大血管腔。此外，有研究顯示他汀還具有促進內(nèi)皮細胞生成一氧化氮(NO)和改善內(nèi)皮功能；抑制血管平滑肌細胞和巨噬細胞增殖；抗炎、抗氧化、抗凝和促進血管新生等作用[9-11]。隨著研究的深入，他汀類藥物廣泛應(yīng)用于臨床，但是與中、低劑量他汀治療比較，大劑量他汀并沒有顯著降低膽固醇(他汀類藥物的“6 規(guī)則”， 即他汀類劑量加倍，LDL-C只降低 6%)，但其肝損傷、肌痛等副作用發(fā)生率增加[12]。

脂必泰是由紅曲、山楂、澤瀉、白術(shù)4味中藥提取物配伍組成的純中成藥制劑，因其副作用較少，且具有降低TC、TG、LDL-C、載脂蛋白B100，升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白A1等調(diào)脂和抗動脈粥樣硬化作用，脂必泰聯(lián)合低劑量他汀治療逐漸被臨床醫(yī)生接受[13]。本研究結(jié)果顯示，脂必泰聯(lián)合低劑量他汀可以部分改善冠心病病人HDL抗氧化能力和促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的能力，而且脂必泰聯(lián)合低劑量他汀與常規(guī)劑量他汀治療效果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

綜上所述，在分子生物學(xué)機制上，脂必泰聯(lián)合低劑量他汀在冠心病病人中的應(yīng)用是有效的，但尚待大型的臨床研究進一步驗證脂必泰聯(lián)合他汀治療的有效性和安全性。