劉 陽 仇 珊

（1陜西省漢中市動物疾病預(yù)防控制中心，陜西漢中 723000；2漢中市勉縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心，陜西漢中 724200）

豬瘟是由豬瘟病毒引起豬的一種以高熱、出血為主要特征的烈性、高度接觸性傳染病，是國家強制免疫的重大動物疫病之一。目前，對豬瘟的主要預(yù)防途徑仍舊是通過疫苗免疫，市場上使用較多的是豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗，且關(guān)于豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗免疫效果的爭論也由來已久，養(yǎng)殖戶在合理選擇疫苗類型方面仍存在較大困擾。為了科學(xué)比較豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗免疫效果，本試驗選擇豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗進(jìn)行了對比試驗，比較分析二者的免疫效果，客觀公正地評價了豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗的免疫效果，為廣大養(yǎng)殖戶選擇豬瘟疫苗類型提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 疫苗

選用編號為A的政府采購豬瘟脾淋苗和編號為B的某公司生產(chǎn)的豬瘟細(xì)胞苗進(jìn)行對比試驗。

1.1.2 試劑

豬瘟間接血凝抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.1.3 儀器

單道和8道微量移液器均購自德國Brand公司、高速離心機、微量振蕩器、96孔U型聚乙烯反應(yīng)板。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗動物與分組

在陜西省漢中市某規(guī)模養(yǎng)豬場選擇4窩體質(zhì)健康、體重接近的仔豬，隨機分成4組，每組10頭，具體分組及疫苗注射劑量見表1。

1.2.2 免疫注射

仔豬23日齡進(jìn)行首免，首免28天后進(jìn)行二免，免疫劑量參照表1。

表1 豬瘟疫苗對比試驗分組

1.2.3 采樣次數(shù)與時間

試驗過程中共采血5次，第1次采血在首免當(dāng)天，主要是查明仔豬的母源抗體情況；后4次采血分別在一免后14 d、21 d、28 d和二免后21 d。

1.2.4 結(jié)果判定

正向間接血凝試驗（IHA）按試劑盒說明書進(jìn)行操作。檢測結(jié)果按原農(nóng)業(yè)部[農(nóng)醫(yī)發(fā)（2012）2號]文件要求判定，判定標(biāo)準(zhǔn)：其有效抗體效價≥1:32（第5孔）為免疫合格。

1.2.5 飼養(yǎng)管理

試驗豬場試驗用豬各組單獨飼養(yǎng)，與其他同齡豬群同舍飼養(yǎng)，按照日常飼養(yǎng)管理操作規(guī)程飼養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗結(jié)果統(tǒng)計

各組豬瘟免疫抗體檢測合格率結(jié)果統(tǒng)計見表2。豬瘟脾淋苗首免后14 d、21 d、28 d和二免后21 d平均效價，A1組有升有降、A2組呈下降趨勢，合格率除A1組首免后21 d、二免后21 d和A2組二免后21 d外，其余各采樣時間免疫抗體合格率均達(dá)到了70%。豬瘟細(xì)胞苗首免后14 d、21 d、28 d后和二免后21 d平均效價B1組呈先上升再下降的趨勢，B2組呈上升趨勢，2組各采樣時間的免疫抗體合格率均達(dá)到了70%。

2.2 試驗結(jié)果分析

表2 豬瘟疫苗比對試驗各組免疫抗體合格率統(tǒng)計表

2.2.1 不同種疫苗相同劑量對比

由圖1、圖2可以看出，除首免后14 d，其余3次檢測，脾淋苗A1組免疫抗體合格率、平均效價都低于細(xì)胞苗B1組，脾淋苗A2組免疫抗體合格率、平均效價也都低于細(xì)胞苗B2組。首免后14天，可能受母源抗體的干擾，A1、A2組脾淋苗免疫抗體合格率平均效價均高于相應(yīng)B1、B2組細(xì)胞苗。說明在相同劑量免疫情況下，細(xì)胞苗的免疫效果優(yōu)于脾淋苗。

2.2.2 不同種疫苗不同劑量對比

由圖1、圖2可知，首免后14天，A1組脾淋苗免疫抗體平均效價高于B2組細(xì)胞苗，其免疫合格率與B2組細(xì)胞苗相同，其余3次檢測，A1組脾淋苗的免疫抗體合格率、平均效價都低于B2組細(xì)胞苗。A2組脾淋苗首免后14天，免疫抗體合格率、平均效價高于B1組細(xì)胞苗，其余3次檢測，免疫抗體合格率和平均效價均低于B1組細(xì)胞苗，說明脾淋苗無論是標(biāo)準(zhǔn)劑量還是加大劑量，其免疫效果都不如細(xì)胞苗。

2.2.3 同種疫苗不同劑量對比

無論是脾淋苗還是細(xì)胞苗，加大免疫劑量的試驗A2組和B2組免疫抗體合格率均優(yōu)于A1組和B1組，尤其是脾淋苗A1組和A2組差異較大。加大免疫劑量的脾淋苗A2組首免后3次檢測，免疫抗體合格率均高于A1組，且合格率都維持在70%（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)），二免后21 d，2組免疫抗體合格率均有所下降，且都低于70%，這是因為二免后21 d免疫抗體正處于上升期；細(xì)胞苗免疫后，2組試驗各階段免疫抗體合格率均高于70%，都能產(chǎn)生較強的保護(hù)力，加大劑量的細(xì)胞苗B2組，由于受母源抗體較高的影響，首免后免疫抗體合格率呈下降趨勢，直到二免時才有所上升，二免后21 d，2組免疫抗體合格率均有所下降，但都達(dá)到了70%。脾淋苗加大劑量免疫后效果明顯，細(xì)胞苗加大劑量免疫，免疫效果差異不大。

3 討論

我國現(xiàn)有的豬瘟疫苗根據(jù)生產(chǎn)方式分為脾淋苗、原代細(xì)胞苗和傳代細(xì)胞苗。從理論上講，豬瘟脾淋苗是經(jīng)典疫苗，屬于組織苗，保護(hù)力很優(yōu)秀。長期以來，生豬養(yǎng)殖戶已經(jīng)習(xí)慣使用豬瘟脾淋苗，但是由于時代的發(fā)展和生豬養(yǎng)殖量的增加，脾淋苗已經(jīng)不能適應(yīng)需求，特別是合格兔源的減少，很難滿足豬瘟脾淋苗的生產(chǎn)需要，而且落后的生產(chǎn)工藝較難保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性[1]。本次試驗，無論是脾淋苗還是細(xì)胞苗，免疫后都能迅速刺激機體產(chǎn)生抗體，對豬群形成一定的保護(hù)力，但不管是標(biāo)準(zhǔn)劑量還是加大劑量，細(xì)胞苗的免疫效果都優(yōu)于脾淋苗，這與洪江庭[2]的試驗結(jié)論一致。

母源抗體過高，對疫苗免疫存在很強的干擾作用。本試驗中，母源抗體合格率、平均抗體效價較高的A1、A2、B2組首免后14 d、21 d，免疫抗體合格率、平均抗體效價不升反降，說明了母源抗體對首次免疫的干擾。因此除疫苗質(zhì)量外，母源抗體水平也是豬瘟疫苗免疫成敗的關(guān)鍵因素。據(jù)報道，母源抗體可以從細(xì)胞免疫和體液免疫2個方面對疫苗免疫產(chǎn)生干擾[3]，其作用機理主要是加強抗原物質(zhì)的清除，對弱毒疫苗起中和作用、母源抗體對特異性抗原位點的“封閉”而阻止抗原位點與機體免疫相關(guān)細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合等，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能對抗原物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。

疫苗免疫效果受多方面因素影響，個體差異對疫苗免疫效果也有較大影響。本試驗中，各組都出現(xiàn)了在母源抗體水平一致，接種同種相同劑量疫苗后，在同群飼養(yǎng)的情況下，同期采樣，采用同種抗體檢測方法檢測，不同豬只免疫抗體水平卻有高有低，差異較大。