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        子宮內(nèi)膜炎患牛唾液生化變化的初步研究

        2020-07-08 10:42:56馬玉忠李睿文汪恩強(qiáng)
        中國牛業(yè)科學(xué) 2020年3期
        關(guān)鍵詞:唾液淀粉酶尿酸

        李 蕊, 馬玉忠, 李睿文, 汪恩強(qiáng)

        (河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河北 保定 071000)

        唾液是齦溝液、黏膜滲出液、唾液腺腺泡超滲液的混合體,由口腔腺體分泌產(chǎn)生,具有清潔、殺菌、排泄等多種功能[1]。最新科研成果表明,唾液成分的變化與機(jī)體病理生理狀態(tài)密切相關(guān),唾液成分的變化可以作為疾病發(fā)生時(shí)的提示信息[2],幫助臨床進(jìn)行疾病診斷和對(duì)病理情況的掌控。并由于其采集方式較方便易行,非侵入性采集的方法可以減少對(duì)動(dòng)物體的傷害,使其在越來越多的應(yīng)用于臨床的同時(shí),也具有廣泛的使用前景。

        目前,在對(duì)牛唾液的研究中,已經(jīng)有對(duì)發(fā)熱過程中急性相蛋白和氧化應(yīng)激標(biāo)記物的變化的初步研究[3],但是還沒有在以子宮內(nèi)膜炎為模型下對(duì)奶牛唾液生物標(biāo)準(zhǔn)物變化的研究。子宮內(nèi)膜炎是由于飼養(yǎng)衛(wèi)生條件差,營養(yǎng)缺乏,激素分泌異常,病原微生物感染等因素導(dǎo)致的疾病,嚴(yán)重危害奶牛的生產(chǎn)繁殖性能,是阻礙畜牧業(yè)發(fā)展的重要產(chǎn)科疾病,給我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。所以本試驗(yàn)以子宮內(nèi)膜炎奶牛為模型,觀察在炎癥發(fā)生時(shí)奶牛唾液生物標(biāo)志物的變化,評(píng)價(jià)應(yīng)激、炎癥和氧化應(yīng)激在奶牛炎癥反應(yīng)中所選擇的唾液生物標(biāo)志物的可能變化。

        1 材料與方法

        1.1 材 料

        1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)?zāi)膛_x自保定唐縣某牛場,選取三胎次奶牛40頭,分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組20頭。試驗(yàn)組為20頭典型性臨床型子宮內(nèi)膜炎患牛,對(duì)照組為20頭健康奶牛。兩組奶牛均每日清早未進(jìn)食前收集唾液,每日飼喂2次,飼喂時(shí)間為8:00和17:00,飼料精粗比1∶4,自由飲水。

        1.1.2 主要試劑 唾液淀粉酶試劑盒、腺苷脫氨酶試劑盒、溶菌酶檢測試劑盒,均購自南京建成生物工程研究所;皮質(zhì)醇試劑盒,購自上海瓦蘭生物科技有限公司;總抗氧化能力試劑盒,購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司;尿酸檢測試劑盒、乳酸檢測試劑盒、乙酰膽堿酯酶試劑盒,均購自北京索萊寶科技有限公司;酸度計(jì),購自北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

        1.1.3 主要儀器 PF640火焰光度計(jì),購自上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。

        1.2 方 法

        1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物選取 按照奶牛子宮內(nèi)膜炎診斷方法,依據(jù)臨床癥狀與發(fā)情情況以及直腸檢查結(jié)果進(jìn)行確診,選取20頭典型性臨床型子宮內(nèi)膜炎患牛作為試驗(yàn)組奶牛。為排除奶?;茧[形子宮內(nèi)膜炎可能性的干擾,選擇30頭未見臨床型子宮內(nèi)膜炎特征的奶牛,無菌采集子宮分泌物,進(jìn)行致病菌分離培養(yǎng)、革蘭氏染色、鏡檢,選取20頭未分離培養(yǎng)出致病菌的健康奶牛作為對(duì)照組。

        1.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物樣品采集 將奶牛頭部保定,試驗(yàn)人員佩戴無菌長臂手套抻出牛舌,使唾液自然流出,用50 mL離心管收集,并編號(hào),放入冰盒低溫保存,迅速送回試驗(yàn)室進(jìn)行檢測。

        1.2.3 各標(biāo)志物測定 按照相關(guān)試劑盒指示步驟進(jìn)行操作的檢測項(xiàng)目有:α唾液淀粉酶、皮質(zhì)醇、腺苷脫氨酶、乙酰膽堿酯酶、溶菌酶、總抗氧化能力、pH值、總蛋白含量、乳酸和尿酸含量。所有分析均在自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行。鈉鉀比的檢測使用PF640型火焰光度計(jì)。

        1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 根據(jù)表格數(shù)據(jù),對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步分析。使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0對(duì)各生標(biāo)志物前后變化數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,P<0.01時(shí)表示差異極顯著,P<0.05時(shí)表示差異顯著。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 試驗(yàn)動(dòng)物情況

        選取的試驗(yàn)動(dòng)物分為試驗(yàn)組(n=20)和對(duì)照組(n=20),各組奶牛具體情況對(duì)比見表1。兩組試驗(yàn)動(dòng)物平均年齡均為4歲,平均胎次均為3胎;產(chǎn)后天數(shù)相差較??;兩組試驗(yàn)?zāi)膛V须y產(chǎn)頭數(shù)差異明顯,試驗(yàn)組難產(chǎn)頭數(shù)為16頭,而對(duì)照組健康奶牛中難產(chǎn)頭數(shù)為2頭;兩組試驗(yàn)?zāi)膛Lヒ虏幌骂^數(shù)差異明顯,試驗(yàn)組為14頭,對(duì)照組為1頭,兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析,差異極顯著(P<0.01)。

        表1 試驗(yàn)組和對(duì)照組奶牛信息對(duì)比

        2.2 各標(biāo)志物測定結(jié)果

        對(duì)照組(n=20)與試驗(yàn)組(n=20)奶牛唾液被檢生物標(biāo)志物及其結(jié)果見表2和表3,表2數(shù)據(jù)均為總體樣本平均數(shù)。結(jié)果表明:在被檢測的各項(xiàng)唾液生化指標(biāo)中,試驗(yàn)組與對(duì)照組兩組數(shù)據(jù)對(duì)比,差異極顯著(P<0.01)的生化指標(biāo)為膽堿酯酶,差異顯著(P<0.05)的生化指標(biāo)為乳酸。相比對(duì)照組,試驗(yàn)組的升高項(xiàng)生化指標(biāo)為尿酸、皮質(zhì)醇、乳酸、唾液淀粉酶,下降項(xiàng)生化指標(biāo)為pH值、膽堿酯酶、抗氧化性、腺苷脫氨酶及總蛋白。由表3可知,相比對(duì)照組,試驗(yàn)組子宮內(nèi)膜炎患牛鈉鉀比含量有所下降。

        表2 對(duì)照組與試驗(yàn)組奶牛唾液各項(xiàng)生物標(biāo)志物變化情況

        表3 對(duì)照組和試驗(yàn)組奶牛唾液中鈉鉀比對(duì)比

        3 結(jié) 論

        研究收集試驗(yàn)組子宮內(nèi)膜炎患牛和對(duì)照組健康奶牛唾液,針對(duì)所選10種生物標(biāo)志物使用相關(guān)試劑盒在自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行檢測,并將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析,得出結(jié)論,被測各項(xiàng)指標(biāo)中,相比對(duì)照組健康奶牛,試驗(yàn)組子宮內(nèi)膜炎患牛的升高項(xiàng)為尿酸、皮質(zhì)醇、乳酸、唾液淀粉酶,下降項(xiàng)生化指標(biāo)為pH值、膽堿酯酶、抗氧化性、腺苷脫氨酶及總蛋白,鈉鉀比下降0.83,說明鈉營養(yǎng)狀況受到該病影響。

        4 討 論

        尿酸一直被認(rèn)為是一種抗氧化化合物,唾液中尿酸含量的增加可以體現(xiàn)機(jī)體在子宮內(nèi)膜炎過程中產(chǎn)生了氧化應(yīng)激反應(yīng)[3]。據(jù)報(bào)道稱,唾液中的尿酸含量可作為診斷代謝綜合征的潛在生物標(biāo)志物[4],子宮內(nèi)膜炎患牛唾液尿酸含量的上升,可以提示奶牛患病后機(jī)體的代謝功能受到一定的影響。

        唾液淀粉酶和皮質(zhì)醇含量上升,可以體現(xiàn)交感神經(jīng)和腎上腺素的激活[3]。皮質(zhì)醇可作為人類臨床上很多內(nèi)分泌腺體異常的輔助診斷,唾液淀粉酶的升高和降低可作為慢性胰腺炎的診斷依據(jù),同時(shí)人類對(duì)內(nèi)毒素的反應(yīng)也可以引起唾液淀粉酶的含量升高。而在炎癥當(dāng)中,唾液淀粉酶的增加則可能是炎癥癥狀使唾液腺交感神經(jīng)受到了刺激和激活[5]。

        前有報(bào)道稱,炎癥和氧化應(yīng)激病例中都會(huì)出現(xiàn)乳酸增加的現(xiàn)象,可能是由于氧債或低氧灌注導(dǎo)致的厭氧糖酵解[3]。應(yīng)急反應(yīng)的激活也可以導(dǎo)致乳酸含量升高,尤其是腎上腺素系統(tǒng)的激活,會(huì)導(dǎo)致厭氧糖酵解[6]。

        在試驗(yàn)組的數(shù)據(jù)當(dāng)中筆者發(fā)現(xiàn)膽堿酯酶活性的降低。人類的膽堿酯酶的降低后多出現(xiàn)乙酰膽堿過剩而聚集,引起膽堿能興奮過度,類似有機(jī)磷中毒的現(xiàn)象[7]。目前還沒有對(duì)動(dòng)物炎癥情況下膽堿酯酶活性降低原因的相關(guān)研究和報(bào)道,該部分還需要深入試驗(yàn)和探討。

        腺苷脫氨酶也是試驗(yàn)組奶牛唾液指標(biāo)的降低項(xiàng)之一。它是一種與機(jī)體細(xì)胞免疫活性有重要關(guān)系的核酸代謝酶,也是反應(yīng)肝臟損傷的明顯指標(biāo)[8],同時(shí)炎癥的發(fā)生是引起肝臟損傷的誘因之一,這可能意味著患子宮內(nèi)膜炎奶牛唾液的腺苷脫氨酶與炎性反應(yīng)和肝損傷之間存在著某些相關(guān)性,有待進(jìn)一步研究。

        總蛋白和鈉鉀比的降低主要提示炎癥奶牛有營養(yǎng)不良的現(xiàn)象出現(xiàn)。人類唾液總蛋白含量降低多提示肝臟、腎臟病變,營養(yǎng)不良及慢性消耗病[9],也是抑制口腔齲齒發(fā)病的一項(xiàng)內(nèi)容[10],但炎性奶牛唾液總蛋白含量的降低及其原因,至今未見過相關(guān)報(bào)道。據(jù)有效記載,反芻動(dòng)物唾液中離子濃度Na和K之比是反映動(dòng)物體內(nèi)Na營養(yǎng)狀況的最佳指標(biāo)。部分學(xué)者認(rèn)為綿羊唾液鈉鉀比應(yīng)不小于10,另外反芻動(dòng)物唾液鈉鉀比只有達(dá)到4,才能算是Na營養(yǎng)缺乏[11]。因此,澳大利亞制定的反芻動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)指出:反芻動(dòng)物腮腺唾液Na/K小于5則為鈉營養(yǎng)缺乏;在比值5~14之間為臨界范圍;比值大于14,則表明鈉營養(yǎng)狀況良好[12]。本試驗(yàn)當(dāng)中的試驗(yàn)組奶牛鈉鉀比為4.34,比對(duì)照組奶牛有所降低,按照澳大利亞反芻動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定來看,屬于鈉營養(yǎng)缺乏的范疇。因此,在子宮內(nèi)膜炎奶牛的飼養(yǎng)過程中,有必要有針對(duì)性地對(duì)蛋白和鈉做出適當(dāng)補(bǔ)充。

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