樊江峰， 余四九， 徐庚全， 郭淑珍， 李瑞武， 王立斌， 潘陽(yáng)陽(yáng)， 馬登錄， 王文飆， 李保明， 包扎西， 王杰峰

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070;2.甘肅省牛羊胚胎工程技術(shù)研究中心，蘭州 730070；3.甘南州畜牧科學(xué)研究所，甘肅 合作 747000；4.夏河縣畜牧工作站，甘肅 夏河 747100)

牦牛是生活在高寒、缺氧、枯草期長(zhǎng)的嚴(yán)峻自然條件下，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期自然選擇和適應(yīng)而形成的一種重要家畜品種。目前，中國(guó)存欄牦牛約有1 500萬(wàn)頭，占世界牦?？倲?shù)的95%以上[1]，占中國(guó)?？倲?shù)的1/6[2]。由于受惡劣的自然環(huán)境和傳統(tǒng)放牧飼養(yǎng)管理方式的影響，牦牛繁殖效率、生長(zhǎng)速度等整體生產(chǎn)性能較為低下[3]。近些年，為了提高牦牛繁育后代的生產(chǎn)性能，我國(guó)多地開展了采用人工授精技術(shù)進(jìn)行雜交利用和優(yōu)良品種培育的研究和推廣應(yīng)用工作。誘導(dǎo)發(fā)情、同期發(fā)情等技術(shù)在牦牛群體人工授精工作中也表現(xiàn)出了明顯的優(yōu)勢(shì)，可以集中組織實(shí)施，便于工作的開展。然而，受傳統(tǒng)飼養(yǎng)管理方式的影響，牦牛群體的跟蹤觀察和發(fā)情鑒定難度較大，導(dǎo)致準(zhǔn)確的發(fā)情和輸精時(shí)機(jī)難于把握，人工授精整體成功率較低。準(zhǔn)確的發(fā)情鑒定是保證人工授精后成功受孕的關(guān)鍵因素之一。本研究對(duì)牦牛發(fā)情期主要生殖器官和卵巢的動(dòng)態(tài)變化做了詳細(xì)的觀測(cè)和分析，以期為牦牛準(zhǔn)確的發(fā)情鑒定及誘導(dǎo)發(fā)情、同期發(fā)情等發(fā)情調(diào)控技術(shù)的處理效果判定提供參考依據(jù)。

卵巢是決定雌性動(dòng)物發(fā)情活動(dòng)及受孕最重要的生殖器官，它具有周期性排出卵子的外分泌功能和產(chǎn)生激素的內(nèi)分泌功能，這種周期性活動(dòng)的表現(xiàn)形式因動(dòng)物種類的不同存在著很大差異。牦牛是季節(jié)性發(fā)情的動(dòng)物，發(fā)情時(shí)間受環(huán)境、溫度、牧草生長(zhǎng)狀況和自身營(yíng)養(yǎng)狀況的影響較為明顯。在我國(guó)大部分地區(qū)，牦牛發(fā)情時(shí)間主要集中在6—10月份[1]。隨著發(fā)情季節(jié)的到來(lái)，牦牛卵巢上開始出現(xiàn)優(yōu)勢(shì)卵泡并分泌大量雌激素，牦牛個(gè)體表現(xiàn)出發(fā)情癥狀并排卵。牦牛的這種季節(jié)性繁殖活動(dòng)與奶牛、黃牛明顯不同，對(duì)其繁殖周期各主要階段生殖器官的描述和觀測(cè)，已有一些研究資料[4-9]。本研究從群體的角度出發(fā)，統(tǒng)計(jì)了發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情牦牛和再次發(fā)情牦牛各主要發(fā)情癥狀的表現(xiàn)幾率和卵巢在發(fā)情期的主要變化，為了進(jìn)一步探明牦牛卵巢活動(dòng)規(guī)律，探索其季節(jié)性發(fā)情的生物學(xué)機(jī)理提供一些基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)牦牛來(lái)自于甘肅省夏河縣牙利吉鄉(xiāng)阿納扎西牦牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社和彭次合扎西牦牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社。于2019年6月10日從合作社飼養(yǎng)的牦牛群體中篩選營(yíng)養(yǎng)狀況良好、無(wú)臨床可見疾病，年齡4～10歲的母牦牛200頭組成試驗(yàn)牦牛群，常規(guī)全放牧飼養(yǎng)。試驗(yàn)牦牛群中投放體質(zhì)健壯、3歲以上并經(jīng)輸精管結(jié)扎的試情公牦牛6頭。試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)到的147頭發(fā)情牦牛為試驗(yàn)牦牛群中自2019年7月14日至2019年8月20日期間觀察到發(fā)情的個(gè)體。

1.2 發(fā)情時(shí)間確定

由畜牧獸醫(yī)專業(yè)技術(shù)人員每天早、晚2次跟群觀察母牛發(fā)情表現(xiàn)，每次3 h以上。以一次跟群觀察期間，出現(xiàn)2次及以上試情公牛爬跨時(shí)呆立不動(dòng)的“靜立反射”現(xiàn)象為母牛發(fā)情開始的判斷依據(jù)，并將本次觀察時(shí)間定為該牛發(fā)情的第0天。發(fā)情時(shí)間的最小單位為0.5 d，即早上觀察到發(fā)情的下午記為發(fā)情第0.5天，下午觀察到發(fā)情的第2天早上記為發(fā)情第0.5天。母牛發(fā)情期的終止時(shí)間以發(fā)情開始后第1次跟群觀察期間未見到試情公牛的跟隨、親近、嗅聞尾根等現(xiàn)象來(lái)記。

1.3 生殖器官臨床檢查

外陰部腫脹情況及粘膜表面色澤采用直接觀察法；子宮頸外口腫脹程度及質(zhì)地、子宮角彈性采用直腸檢查進(jìn)行判斷；子宮頸外口色澤及粘液狀況的檢查采用?？梢曒斁珮?BTS-NKSSJ，北京倍特雙科技發(fā)展有限公司，中國(guó))經(jīng)陰道檢查。以上非量化臨床指標(biāo)均由3名有一定臨床經(jīng)驗(yàn)的獸醫(yī)專業(yè)人員獨(dú)立檢查、記錄，按照多數(shù)人的記錄結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.4 卵巢組織B超檢查及測(cè)量

牦牛妥善保定，清除直腸宿糞。操作人員手入直腸，確定子宮角及卵巢的大體位置，然后將B超儀(全數(shù)字便攜式動(dòng)物B超診斷儀，ECO3VET，無(wú)錫祥生醫(yī)學(xué)影像有限責(zé)任公司，中國(guó))線陣掃描探頭(7.5 MHz線陣直腸探頭，L7V-A，無(wú)錫祥生醫(yī)學(xué)影像有限責(zé)任公司，中國(guó))帶入直腸，在兩側(cè)子宮角前段外側(cè)與骨盆腔側(cè)壁之間的縱向凹陷處仔細(xì)探查，確定卵巢輪廓，辨別卵泡及黃體結(jié)構(gòu)，卵泡呈邊界清楚的低回聲或無(wú)回聲液性暗區(qū)，黃體呈結(jié)構(gòu)均勻的低回聲圓形或橢圓形區(qū)域。利用B超儀自帶的測(cè)量功能分別測(cè)量卵巢的長(zhǎng)、寬、厚，卵泡和黃體長(zhǎng)徑。參照崔燕等對(duì)牦牛卵泡的分類方法[10]，筆者統(tǒng)計(jì)了Ⅱ級(jí)以上卵泡(直徑≥5 mm)的數(shù)量。卵巢組織B超檢查時(shí)有關(guān)指標(biāo)的定義及計(jì)算公式分別為：優(yōu)勢(shì)卵巢指發(fā)情開始后第1次B超檢查時(shí)體積較大一側(cè)卵巢；小卵巢指發(fā)情開始后第1次B超檢查時(shí)體積較小一側(cè)卵巢；固有黃體指本次發(fā)情之前一個(gè)發(fā)情周期卵巢上形成的黃體；卵巢體積=卵巢長(zhǎng)徑×卵巢寬度×卵巢厚度。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，有關(guān)數(shù)據(jù)之間的差異顯著性檢驗(yàn)采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件中的方差分析(ANOVA)進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 牦牛發(fā)情期生殖器官主要變化

對(duì)147頭出現(xiàn)“靜立反射”的牦牛進(jìn)行了跟蹤觀察和生殖器官的臨床檢查，詳細(xì)記錄了幾種主要發(fā)情癥狀的出現(xiàn)幾率。結(jié)果表明，牦牛發(fā)情癥狀較為微弱?？傮w來(lái)看，出現(xiàn)靜立反射的牦牛生殖器官會(huì)出現(xiàn)以下變化：外陰部腫脹、皮膚皺褶減少或者消失(圖1A)，粘膜表面潮紅(圖1B)；陰門有清亮或稍顯渾濁的粘液流出，部分個(gè)體只有在直腸檢查擠壓時(shí)，粘液流出較為明顯(圖1C)；直腸檢查可感覺(jué)到子宮頸外口腫脹變粗、質(zhì)地較為堅(jiān)硬，子宮角富有彈性；內(nèi)窺鏡經(jīng)陰道探查可見子宮頸外口粘膜鮮紅、皺褶變粗厚，陰道底部有較多粘液(圖1D)。但檢查發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)靜立反射的個(gè)體，并不全部具有以上癥狀。尤其是發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情的牦牛，其發(fā)情癥狀更為微弱，有67.7%的個(gè)體出現(xiàn)外陰腫脹、潮紅，陰門有粘液流出的個(gè)體僅占56.2%，子宮頸外口腫脹明顯的占89.6%；子宮角富有彈性的占84.3%，發(fā)情期長(zhǎng)度平均為1.8 d。發(fā)情季節(jié)再次發(fā)情的個(gè)體，發(fā)情癥狀較為明顯，有72.4%的個(gè)體出現(xiàn)外陰腫脹、潮紅，陰門有粘液流出的個(gè)體占65.8%，子宮頸外口腫脹明顯的占92.4%；子宮角富有彈性的占85.7%；發(fā)情期長(zhǎng)度平均為1.4 d，略短于初次發(fā)情個(gè)體，但差異不顯著(P>0.05)。主要發(fā)情癥狀的出現(xiàn)幾率如表1所示。

注：外陰部腫脹，皮膚皺褶粗厚；B.陰道粘膜潮紅；C.直腸檢查時(shí)陰門流出大量稍顯渾濁粘液；D.子宮頸外口腫脹、粘膜鮮紅，陰道底部有大量粘液。

圖1 牦牛主要發(fā)情癥狀表現(xiàn)

表1 牦牛發(fā)情期主要發(fā)情表現(xiàn)的發(fā)生幾率及發(fā)情期長(zhǎng)度

注：*表示差異不顯著(P>0.05)。

2.2 牦牛卵巢組織的B超影像特征

采用B型超聲診斷儀對(duì)發(fā)情后牦牛卵巢發(fā)育狀況進(jìn)行了跟蹤探查和測(cè)量。結(jié)果表明，直腸線陣探頭檢查時(shí)，牦牛卵巢輪廓清楚、組織結(jié)構(gòu)清晰。卵泡組織呈邊界清楚的低回聲或無(wú)回聲液性暗區(qū)，在發(fā)育早期多呈不規(guī)則的長(zhǎng)橢圓形，位置較接近于卵巢中央；隨著體積的增大卵巢形狀逐漸成為圓形，并向卵巢表面遷移。黃體與周圍組織邊界可辨，多成結(jié)構(gòu)均勻的低回聲圓形或橢圓形區(qū)域，一般位于卵巢長(zhǎng)軸方向的一端(圖2)。

注：A、B初次發(fā)情牦牛卵巢(3號(hào)牛，發(fā)情開始第2天)，C、D再次發(fā)情牦牛卵巢(7號(hào)牛，發(fā)情開始第1天)；A、C優(yōu)勢(shì)卵巢，B、D小卵巢。圖中十字星指卵泡，五角星指黃體；虛線代表卵巢長(zhǎng)度、寬度，卵泡直徑、黃體直徑等卵巢組織結(jié)構(gòu)的測(cè)量距離，右下角數(shù)據(jù)代表相應(yīng)測(cè)量距離的長(zhǎng)度。

圖2 發(fā)情期牦牛卵巢典型B超影像

B超跟蹤掃查發(fā)現(xiàn)，在發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情的牦牛，排卵前其兩側(cè)卵巢均無(wú)可辨別的黃體存在，最大直徑卵泡多出現(xiàn)在優(yōu)勢(shì)卵巢上，排卵發(fā)生后轉(zhuǎn)變?yōu)樾律S體。發(fā)情季節(jié)再次發(fā)情的牦牛，發(fā)情時(shí)優(yōu)勢(shì)卵巢上往往有上一發(fā)情周期形成的黃體(圖2C)，其直徑多在1.0 cm以上，最大直徑卵泡多出現(xiàn)在小卵巢上，排卵后在小卵巢上形成新生黃體。

2.3 發(fā)情期牦牛卵巢狀態(tài)變化特征

利用B型超聲診斷儀經(jīng)直腸線陣探頭掃查監(jiān)測(cè)結(jié)合直腸檢查，對(duì)78頭出現(xiàn)“靜立反射”且生殖器官發(fā)情癥狀明顯牦牛的卵巢進(jìn)行了跟蹤觀測(cè)。結(jié)果表明，初次發(fā)情的牦牛，在發(fā)情開始后的0～4 d，優(yōu)勢(shì)卵巢體積由發(fā)情第0天的(2.41±0.31) cm3逐漸增大到(5.56±0.77) cm3，而小卵巢變化不明顯，平均體積在(1.94±0.12)～(2.14±0.42) cm3之間。最大卵泡一般出現(xiàn)在優(yōu)勢(shì)卵巢上，單個(gè)直徑最大可達(dá)到1.06 cm，平均值在發(fā)情開始后第1天達(dá)到最大(0.91±0.22 cm)。5 mm以上卵泡的數(shù)量平均在(2.14±0.64)～(3.14±1.12)個(gè)之間；排卵都發(fā)生在優(yōu)勢(shì)卵巢上，排卵時(shí)間相對(duì)集中在發(fā)情第2天(58.14%)。排卵后形成的新生黃體直徑逐漸增加，到發(fā)情第4天其直徑平均可達(dá)(1.28±0.17) cm。再次發(fā)情的牦牛，在發(fā)情第0天，優(yōu)勢(shì)卵巢和小卵巢的體積(7.41±1.28 cm3和4.65±0.43 cm3)都明顯大于初次發(fā)情牦牛(P<0.01)，之后小卵巢生長(zhǎng)較為迅速，至發(fā)情第4天其直徑平均可達(dá)(7.96±0.67) cm3，已超過(guò)同期優(yōu)勢(shì)卵巢體積(7.56±0.83 cm3)，而優(yōu)勢(shì)卵巢體積變化不明顯。最大卵泡多出現(xiàn)在小卵巢上，其直徑最大可達(dá)(0.88±0.21) cm，略小于初次發(fā)情牦牛，但差異不顯著(P>0.05)。5 mm以上卵泡數(shù)量平均在(2.60±0.80)～(3.60±0.80)個(gè)之間。排卵多發(fā)生在小卵巢上，排卵時(shí)間相對(duì)集中在發(fā)情第2天(65.71%),但也有少數(shù)個(gè)體(17.14%)于發(fā)情第1天就發(fā)生排卵；排卵后形成的新生黃體在發(fā)情第4天其直徑平均可達(dá)(1.19±0.26) cm，略小于初次發(fā)情牦牛，但差異不顯著(P>0.05)。發(fā)情期牦牛卵巢發(fā)育的主要參數(shù)及其變化趨勢(shì)見表2，圖3。

表2 牦牛發(fā)情后卵巢狀態(tài)主要指標(biāo)變化特征

注：*表示同一檢查時(shí)間再次發(fā)情牦牛該指標(biāo)與初次發(fā)情牦牛相應(yīng)指標(biāo)有顯著性差異(P<0.05)；**表示同一檢查時(shí)間再次發(fā)情牦牛該指標(biāo)與初次發(fā)情牦牛相應(yīng)指標(biāo)差異極顯著(P<0.01)。

圖3 牦牛發(fā)情后卵巢狀態(tài)主要指標(biāo)變化

3 討 論

準(zhǔn)確的發(fā)情鑒定是人工授精工作中提高牦牛受配率、受胎率和繁殖率的關(guān)鍵，也是確定最適宜配種時(shí)間的基礎(chǔ)[11]。牛發(fā)情的方法有外部觀察法、試情法、直腸檢查法、陰道檢查法和超聲波診斷法等，但綜合考慮到準(zhǔn)確性和簡(jiǎn)便性，在生產(chǎn)上應(yīng)用最多的是外部觀察法和直腸檢査法。Lyimo等人發(fā)現(xiàn)奶牛體內(nèi)雌激素和皮質(zhì)醇濃度與發(fā)情癥狀的表現(xiàn)強(qiáng)度有很高的相關(guān)性，因此他們認(rèn)為可視癥狀的監(jiān)測(cè)是確定奶牛輸精時(shí)機(jī)的可靠而有效的方法[11]。趙明旺等對(duì)為了充實(shí)牦牛發(fā)情鑒定方法，對(duì)發(fā)情時(shí)牦牛的行為表現(xiàn)、外陰部、排出粘液以及被毛的變化進(jìn)行了全面的歸納總結(jié)，描述了發(fā)情過(guò)程中能夠表現(xiàn)出的各種癥狀，為筆者進(jìn)行準(zhǔn)確的牦牛發(fā)情鑒定提供了重要資料[12]。王文飆等[13]對(duì)82頭采用GnRH+PG+GnRH法同期發(fā)情處理后鑒定為發(fā)情牦牛的發(fā)情癥狀進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明，外陰部有粘液流出或尾根有粘液結(jié)痂這一現(xiàn)象在未帶犢母中有34%的個(gè)體出現(xiàn)，而帶犢牦牛只有30%；子宮頸開張的現(xiàn)象在未帶犢和帶犢母中的出現(xiàn)比例分別為46%和36%。然而，對(duì)自然發(fā)情時(shí)各種發(fā)情癥狀在牦牛群體中出現(xiàn)的比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的資料未見報(bào)道。盡管Sarkar等在非繁殖季節(jié)進(jìn)行補(bǔ)飼的牦牛測(cè)定出有50%(4/8)的個(gè)體體內(nèi)出現(xiàn)高于基礎(chǔ)水平的孕酮和17β-雌二醇周期性變化[14]，但普遍認(rèn)為牦牛為季節(jié)性發(fā)情的動(dòng)物。在我國(guó)大部分養(yǎng)殖區(qū)域，牦牛的發(fā)情時(shí)間主要集中在7—10月份。每年進(jìn)入發(fā)情季節(jié)后，母牦牛的首次發(fā)情活動(dòng)表現(xiàn)往往比較微弱。筆者對(duì)37頭發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情母牦牛的檢查結(jié)果表明，生殖器官在發(fā)情期的各種典型變化并不能在每頭牛上全部呈現(xiàn)出來(lái)。其中，子宮頸外口似乎是對(duì)發(fā)情活動(dòng)最為敏感的部位，有89.6%的牛出現(xiàn)腫脹性變化；而在奶牛和黃牛發(fā)情鑒定中最為依賴的典型癥狀——“吊線(陰門有粘液流出)”在發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情的牦牛中只有56.2%的出現(xiàn)幾率。人們對(duì)發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情個(gè)體發(fā)情表現(xiàn)微弱的原因，進(jìn)行了較多的研究?？傮w來(lái)看，這一現(xiàn)象的出現(xiàn)與牦牛受體內(nèi)生殖激素分泌和卵巢發(fā)育狀況密切相關(guān)。余四九等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在繁殖季節(jié)中第一次發(fā)情前，牦牛體內(nèi)17β-雌二醇和孕酮含量相對(duì)恒定，但在即將出現(xiàn)明顯的外部發(fā)情癥狀時(shí)，17β-雌二醇出現(xiàn)一個(gè)與真正發(fā)情時(shí)基本相同的波峰，孕酮也出現(xiàn)一個(gè)小波峰，但其持續(xù)的時(shí)間要比正常周期的短，且孕酮的峰值很低。此時(shí)，牦牛卵巢上雖有卵泡發(fā)育，但未見其成熟和排卵，在外觀上表現(xiàn)出微弱的類似發(fā)情的癥狀，其持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短不一，一般經(jīng)歷1～5 d后才出現(xiàn)真正的發(fā)情。可見，牦牛體內(nèi)雌激素和孕酮的水平及其變化，影響著卵巢卵泡的發(fā)育過(guò)程和外部發(fā)情表現(xiàn)。另一方面，筆者對(duì)18頭發(fā)情季節(jié)再次發(fā)情牦牛的觀察結(jié)果表明，盡管其主要發(fā)情癥狀表現(xiàn)更為充分，但也不是任一個(gè)體都完全呈現(xiàn)發(fā)情所有癥狀。有92.4%的個(gè)體出現(xiàn)子宮頸外口腫脹，而陰門有粘液流出的個(gè)體也僅占65.8%，發(fā)情期持續(xù)時(shí)間則明顯小于初次發(fā)情個(gè)體(1.4±0.5 d與1.8±0.6 d，P>0.05)。母牦牛(尤其是發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情牦牛)的發(fā)情表現(xiàn)較為微弱，這就要求筆者在沒(méi)有長(zhǎng)時(shí)間跟蹤觀察記錄的情況下，對(duì)牦牛的發(fā)情鑒定要結(jié)合生殖器官變化、行為變化進(jìn)行綜合判斷，否則，單純依靠某一方面的癥狀表現(xiàn)，容易導(dǎo)致鑒定錯(cuò)誤，引起誤迫或者漏配。

卵巢卵泡發(fā)育狀況是哺乳動(dòng)物表現(xiàn)發(fā)情癥狀的內(nèi)在原因，也是決定動(dòng)物發(fā)情配種后能否成功受孕的關(guān)鍵因素之一[16]。卵巢卵泡發(fā)育動(dòng)態(tài)及其調(diào)控機(jī)制也一直是動(dòng)物繁殖領(lǐng)域的重要研究方向[17]。在非發(fā)情季節(jié)牦牛卵巢狀態(tài)研究方面，常蘭等[4]在青海天峻縣對(duì)45頭處于乏情期的牦牛進(jìn)行了觀測(cè)統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)無(wú)論懷孕與否，牦牛卵巢上都有直徑6.0 mm以上卵泡存在，且其數(shù)量在2年產(chǎn)1胎的個(gè)體中最高，平均可以達(dá)到5.18個(gè)以上，但未見到直徑大于15.0 mm的大優(yōu)勢(shì)卵泡?？梢?，牦牛在乏情期雖沒(méi)有發(fā)情的外部表現(xiàn)，但卵巢仍處于活動(dòng)狀態(tài)，只是發(fā)育的卵泡達(dá)不到成熟、排卵的程度。張壽等[18]也對(duì)青海高原上處于發(fā)情期和妊娠早期牦牛的卵巢、卵泡、妊娠黃體進(jìn)行了觀察，對(duì)卵巢整體的大小、重量、6.0 mm以上卵泡的數(shù)量以及妊娠黃體的直徑等指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)量。筆者也做過(guò)牦牛妊娠期卵巢、卵泡及黃體的形態(tài)學(xué)觀測(cè)[8]，進(jìn)一步補(bǔ)充了牦牛卵巢發(fā)育動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的基本資料。

在發(fā)情周期雌性動(dòng)物卵巢尤其是卵泡發(fā)育的動(dòng)態(tài)變化方面，近年來(lái)人們做了大量的研究工作[19-23]。Oliveira等的研究表明，季節(jié)和同期發(fā)情處理時(shí)卵巢狀態(tài)都會(huì)影響母羊排卵前卵泡的發(fā)育過(guò)程[24]。在研究方法方面，Scully等比較了三維彩超和二維超聲波診斷儀在黃牛發(fā)情周期優(yōu)勢(shì)卵泡和黃體發(fā)育過(guò)程中的特征。他認(rèn)為盡管三維彩超可以觀測(cè)到血管變化，但在觀測(cè)黃體和卵泡方面獲得的有用信息比二維超聲并沒(méi)有多很多，而二維超聲使用更加便捷，適合在生產(chǎn)中應(yīng)用[25]?？梢?，普通二維B超檢查仍然是卵巢發(fā)育狀態(tài)觀測(cè)的有效手段。Schüller等采用直腸檢查和B超探查對(duì)奶牛的研究表明，熱應(yīng)激條件下發(fā)情表現(xiàn)會(huì)變?nèi)?，排卵前卵泡尺寸也?huì)減小[26]。這充分說(shuō)明發(fā)情表現(xiàn)和卵泡發(fā)育狀況還受環(huán)境因素的影響。黃雅瓊等利用B-型超聲波診斷儀，對(duì)青年母牛在發(fā)情周期中卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程進(jìn)行了連續(xù)觀察，發(fā)現(xiàn)卵巢上小卵泡(1～4 mm)、中卵泡(5～7 mm)和大卵泡(≥8 mm)的數(shù)量和直徑均呈動(dòng)態(tài)變化。青年母牛在整個(gè)發(fā)情周期中，優(yōu)勢(shì)卵泡的平均直徑為13.6 mm，成熟卵泡的平均直徑為13.8 mm，1個(gè)發(fā)情周期有3～4個(gè)卵泡發(fā)育波，其中有3個(gè)卵泡發(fā)育波的占71.43%，而4個(gè)的占28.57%[27]。這一研究工作，揭示了青年母牛卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的動(dòng)態(tài)模式，但對(duì)發(fā)情期母牛卵巢的整體狀態(tài)描述較少。蒙學(xué)蓮等運(yùn)用組織學(xué)技術(shù)對(duì)36頭成年母牦牛卵巢卵泡的結(jié)構(gòu)與發(fā)育狀況進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)發(fā)情期有腔卵泡數(shù)明顯高于發(fā)情間期[9]。該研究從組織學(xué)角度對(duì)發(fā)育各個(gè)階段的牦牛卵泡形態(tài)特征及其在發(fā)情周期不同階段的數(shù)量進(jìn)行了描述，但很難將其轉(zhuǎn)化為發(fā)情期某一時(shí)刻牦牛卵巢應(yīng)有的狀態(tài)，從而為筆者進(jìn)行牦牛的發(fā)情鑒定提供依據(jù)。

本研究中，筆者從牦牛發(fā)情鑒定的角度出發(fā)，詳細(xì)觀測(cè)統(tǒng)計(jì)了牦牛發(fā)情期卵巢體積、最大卵泡直徑、5 mm以上卵泡數(shù)量、黃體直徑等反映卵巢基本狀態(tài)的指標(biāo)。結(jié)果顯示，發(fā)情期牦牛卵巢的基本狀態(tài)因其在發(fā)情季節(jié)所處的發(fā)情次數(shù)不同而不同。通過(guò)直腸檢查進(jìn)行發(fā)情鑒定時(shí)，卵巢體積、卵泡大小及黃體的狀態(tài)是判斷的主要依據(jù)。本研究發(fā)現(xiàn)，初次發(fā)情的牦牛，優(yōu)勢(shì)卵巢和小卵巢的體積都要顯著小于再次發(fā)情牦牛的對(duì)應(yīng)卵巢。初次發(fā)情牦牛優(yōu)勢(shì)卵巢體積在發(fā)情第0天最小，平均為(2.41±0.11) cm3。這就提示，在牦牛發(fā)情鑒定時(shí)，不能單純因卵巢體積較小而判定為陰性。只要有一側(cè)卵巢體積達(dá)到或者接近這一數(shù)值時(shí)就有發(fā)情的可能。卵巢上最大卵泡的直徑在發(fā)情開始后的4 d內(nèi)初次發(fā)情牦牛和再次發(fā)情牦牛之間差異不顯著，平均值在(0.58±0.07)～(0.91±0.09) cm之間。筆者在檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)的最大個(gè)體直徑是一頭初次發(fā)情牦牛在發(fā)情開始后的第1天，其直徑達(dá)到了1.0 cm。可見，牦牛排卵前卵泡直徑相對(duì)較小，明顯小于資料報(bào)道的黃牛成熟卵泡的直徑(平均13.80 mm)[27]。因此，在牦牛直腸檢查發(fā)情鑒定過(guò)程中，要仔細(xì)探查卵巢狀況，不能因探查到的卵泡直徑較小而否定發(fā)情的可能性。對(duì)于再次發(fā)情的牦牛，在本次發(fā)情開始后的連續(xù)B超檢查中，都發(fā)現(xiàn)了固有黃體的存在，在發(fā)情開始后的4 d內(nèi)其直徑平均在0.80～0.95 cm之間?？梢?，在直腸檢查或B超掃查時(shí)，卵巢上有黃體的存在并不能作為否定母牦牛發(fā)情的可靠依據(jù)，也很有可能是上次發(fā)情周期中形成的固有黃體。

本研究對(duì)牦牛發(fā)情后卵巢基本狀況的觀測(cè)和描述，糾正了在實(shí)際生產(chǎn)中單純依靠某一發(fā)情癥狀的有無(wú)而判定發(fā)情與否的錯(cuò)誤做法，也為牦牛的發(fā)情鑒定積累了一些參考資料。

4 結(jié) 論

牦牛發(fā)情期主要發(fā)情癥狀并不完全出現(xiàn)，尤其是發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情個(gè)體的發(fā)情表現(xiàn)更不充分。發(fā)情季節(jié)初次發(fā)情和再次發(fā)情的牦牛其癥狀和生殖器官變化略有差異。牦牛的發(fā)情鑒定應(yīng)從外陰部、子宮頸、子宮角及卵巢等器官的色澤、質(zhì)地、形態(tài)結(jié)構(gòu)等方面進(jìn)行綜合判斷。子宮頸外口腫脹似乎是牦牛發(fā)情過(guò)程中較為敏感的表現(xiàn)。另外，卵巢的發(fā)育狀態(tài)對(duì)發(fā)情鑒定有重要的提示意義，在卵巢體積達(dá)到2.4 cm左右，卵泡直徑在0.8 cm左右時(shí)就有發(fā)情的可能。