施新琴，范作卿*，王娜，朱琳，郭洪恩，崔為正

（1.山東省蠶業(yè)研究所，山東 煙臺(tái) 264002；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生態(tài)與環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271018）

家蠶幼蟲體富含蛋白質(zhì)、脂肪酸、維生素、生物活性物質(zhì)等，是營養(yǎng)食品和飼料開發(fā)的理想昆蟲資源［1-4］。特別在藥食兩用方面具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢，一方面家蠶幼蟲蛋白質(zhì)含量高達(dá)60%，超過魚、牛奶、雞蛋，是一種優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白源，富含16種氨基酸，極易被人體消化吸收，不易引起膽固醇增高；另一方面全蠶粉中脂肪酸含量2%，微量元素含量較為豐富，總黃酮含量高，在降血糖方面有著顯著效果［5-12］，且對(duì)小鼠免疫功能有一定增強(qiáng)作用，確為藥食兩用佳品。大量研究證實(shí)全蠶粉具有顯著的降血糖功效與其富含多種活性物質(zhì)包括生物堿、多糖、黃酮類物質(zhì)、蠶素、蛻皮激素、三碘甲腺原氨酸等密不可分，尤其是生物堿1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）發(fā)揮了重要的作用［5，7，12］。但是由于全蠶粉中1-DNJ含量受家蠶飼料、蠶桑品種以及加工方法等影響差別很大［13-19］，同時(shí)全蠶粉中脂肪含量較高，極易產(chǎn)生氧化酸敗的問題，不僅會(huì)使產(chǎn)品產(chǎn)生油哈敗味，還會(huì)使產(chǎn)品發(fā)生褪色、褐變，降低產(chǎn)品品質(zhì)和功效，甚至產(chǎn)生有害物質(zhì)引起食物中毒，氧化安全性差，導(dǎo)致其加工難度增大，增加了全蠶粉的產(chǎn)業(yè)化難度。

為此，本研究以山東省蠶桑生產(chǎn)中常用、有代表性的家蠶品種為研究對(duì)象，篩選適宜全蠶粉加工的家蠶品種，同時(shí)探討干燥、滅菌及脫脂等加工方法對(duì)全蠶粉中1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）的影響，為全蠶粉加工及產(chǎn)業(yè)化提供進(jìn)一步的科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 全蠶粉的制備

1.1.1 不同家蠶品種全蠶粉的制備 選取家蠶品種菁松、皓月、菁松×皓月、春蕾×鎮(zhèn)珠、9202×9201、973×974、9202×魯七、魯七及魯黃9個(gè)品種，在春季以“莒選一號(hào)”桑適熟葉飼育至5齡第3天，饑餓24 h處理后冷凍、干燥、粉碎，過80目篩后，-10℃冷凍保存，待測。

1.1.2 不同干燥方法全蠶粉的制備 選取“9202×魯七”蠶品種，在春季以“莒選一號(hào)”適熟葉飼喂至5齡第3天，饑鋨24 h后分別選用-40℃冷凍干燥、100℃烘干及微波干燥三種方法干燥后粉碎，過80目篩，-10℃冷凍保存，待測。

1.2 脫脂全蠶粉的制備

選用正己烷溶劑對(duì)全蠶粉進(jìn)行脫脂，料液比為1∶4，超聲波40 min，35℃水浴浸提12 h，20℃靜置30 min，取沉淀，重復(fù)提取一次，40℃或80℃烘干沉淀后得脫脂蠶粉。

選用正己烷溶劑對(duì)全蠶粉進(jìn)行脫脂，料液比為1∶4，超聲波40 min，35℃水浴浸提12 h，4 500 r/min離心處理10 min，取沉淀，重復(fù)提取一次，40℃或80℃烘干沉淀后得脫脂蠶粉。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 微波滅菌方法 選取待測全蠶粉5 g，平鋪于培養(yǎng)皿中，置于微波爐，選高火微波處理3 min后取出。

1.3.2 蠶粉1-DNJ含量測定方法 采用反相高效液相色譜-紫外檢測法測定［20］，每個(gè)處理重復(fù)3次，測定樣品的1-DNJ含量以表示。

1.4 主要儀器

754型分光光度計(jì)，電子恒溫水浴鍋，TGL-16G臺(tái)式離心機(jī)，LGJ-10真空冷凍干燥機(jī)，2XZ旋片式真空泵，202型電熱鼓風(fēng)干燥箱，Galanz WD900SL23-2微波爐。

高效液相色譜儀（美國Dionex）；高速冷凍離心機(jī)（德國Biofoge strauos）；冷凍真空干燥機(jī)（國產(chǎn)LGI10）；電子恒溫水浴鍋；TGL-16G臺(tái)式離心機(jī)；KQ-600型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)）；202型電熱鼓風(fēng)干燥箱（龍口市先科儀器有限公司生產(chǎn)）。

1.5 主要試劑

1-deoxynojirimycin、9-fluorenylmethyl chloroformate均購自SIGMA公司；乙腈（色譜純）購自天津市凱通化學(xué)試劑有限公司；冰乙酸（分析純）購自天津市大茂化學(xué)試劑廠，甘氨酸（分析純）購自上海伯奧生物技術(shù)有限公司，鹽酸、氫氧化鉀、硼酸等均購自山東省化工研究院。整個(gè)試驗(yàn)中所用水都是由Milli-Q蒸餾系統(tǒng)的多蒸水。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同家蠶品種對(duì)全蠶粉1-DNJ含量的影響

測定菁松等9個(gè)蠶品種的全蠶粉中1-DNJ含量，結(jié)果見表1?？梢钥闯?，不同品種家蠶對(duì)1-DNJ含量富集能力有所不同，全蠶粉中1-DNJ含量存在顯著差別，其中家蠶原種的1-DNJ含量普遍高于雜交種，含量最高者是最低者的1.42倍。原種中以菁松品種全蠶粉1-DNJ含量最高，為0.375%；雜交種中春蕾×鎮(zhèn)珠的全蠶粉1-DNJ含量最高，為0.369%；973×974最低，僅為0.265%。

表1 不同家蠶品種對(duì)全蠶粉1-DNJ含量的影響

2.2 不同干燥方法對(duì)全蠶粉1-DNJ含量的影響

測定烘干、冷凍、微波不同干燥方法處理全蠶粉中1-DNJ含量，結(jié)果見表2?？梢钥闯?，干燥方法不同對(duì)全蠶粉1-DNJ含量有顯著性的影響，其中，-40℃冷凍干燥制備的蠶粉1-DNJ含量最高，為0.366%，其次為100℃烘干，微波干燥處理的效果最差，僅為0.184%；全蠶干燥前饑餓處理與否對(duì)1-DNJ含量也有影響，以饑餓24 h排空腸道后制作的蠶粉效果最佳。原因可能是桑葉中1-DNJ含量較蠶偏低，在不排空腸道的情況下消化道中的桑葉殘?jiān)绊懥巳Q粉的1-DNJ值，使其1-DNJ含量偏低。

表2 不同干燥方法對(duì)全蠶粉1-DNJ含量的影響

2.3 微波殺菌對(duì)蠶粉1-DNJ含量的影響

測定微波殺菌前后全蠶粉中1-DNJ含量，結(jié)果（表3）表明，短時(shí)間微波殺菌對(duì)全蠶粉1-DNJ含量影響不大。

表3 微波殺菌對(duì)蠶粉1-DNJ含量的影響

2.4 不同脫脂方法對(duì)全蠶粉1-DNJ含量的影響

脫脂處理全蠶粉中1-DNJ含量測定結(jié)果見表4，表明脫脂處理可以顯著提高全蠶粉的1-DNJ含量，6種不同脫脂處理的全蠶粉，以離心、脫脂處理蠶粉80℃烘干的全蠶粉1-DNJ含量最高，達(dá)0.596%。

表4 不同脫脂處理對(duì)全蠶粉1-DNJ含量的影響

3 討論與結(jié)論

3.1 本試驗(yàn)采用RP-HPLC紫外檢測法測定不同家蠶品種全蠶粉1-DNJ含量，發(fā)現(xiàn)原種蠶的1-DNJ含量普遍高于雜交種，其中原種以菁松品種較好，雜交種以春蕾×鎮(zhèn)珠品種較佳。實(shí)際生產(chǎn)中以這兩個(gè)品種為佳。

3.2 不同制備方法對(duì)全蠶粉中1-DNJ含量有一定的影響，整體呈現(xiàn)饑餓冷凍干燥＞饑餓100℃烘干＞未饑餓冷凍干燥＞饑餓微波干燥。全蠶粉干燥方法以冷凍干燥最佳，微波干燥最差，其原因可能是低溫處理有效保護(hù)了全蠶粉中的1-DNJ，而微波干燥溫度較高，時(shí)間較長，對(duì)蠶粉中1-DNJ破壞較嚴(yán)重。家蠶在加工前饑餓處理比不進(jìn)行饑餓處理其1-DNJ含量高，但未達(dá)到顯著性差異，主要是因?yàn)樾Q糞中及桑葉中1-DNJ含量較低，排空腸道后相對(duì)提高了1-DNJ含量所致，但是生產(chǎn)中為了獲得最大量1-DNJ全蠶粉，可以選擇不排空直接冷凍家蠶。

3.3 加工好的全蠶粉經(jīng)微波殺菌處理3 min后與未處理差異不顯著，說明微波短時(shí)間殺菌處理不會(huì)破壞全蠶粉中1-DNJ，不會(huì)導(dǎo)致其含量降低，所以在生產(chǎn)中可以采用微波處理3 min對(duì)蠶粉進(jìn)行滅菌。

3.4 脫脂處理全蠶粉的1-DNJ含量明顯高于未處理全蠶粉的含量，可能是脫脂去除了一定的脂溶性成分，相對(duì)提高了蠶粉的1-DNJ含量。離心處理脫脂全蠶粉可以提高效率，同時(shí)對(duì)1-DNJ含量影響不大。所以脫脂方法宜采用正己烷脫脂，脫脂處理中以離心沉淀、80℃烘干性價(jià)比較高。