董淑蕓 張世洋
[摘要]目的?探討羊胎盤凍干粉片對小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法?將200只KM小鼠隨機分為5個免疫組,每個免疫群組40只。設(shè)羊胎盤凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/(kg·BW)]和陰性對照組,每組10只動物。 按0.2 ml/100g的體積經(jīng)口給予小鼠灌胃,每天灌胃1次,連續(xù)灌胃30天后,進(jìn)行各項免疫指標(biāo)的測定。 結(jié)果?羊胎盤凍干粉片劑量組與陰性對照組比較能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化作用(P<0.05),促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(P<0.05),促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平(P<0.05),增強小鼠的單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力(P<0.05),對小鼠NK細(xì)胞活性則無明顯影響(P>0.05)。結(jié)論 羊胎盤凍干粉片具有增強小鼠免疫力功能的作用。
[關(guān)鍵詞]?羊胎盤凍干粉;枸杞子提取物;維生素C;小鼠;免疫、NK
羊胎盤是由羊的子宮粘膜和尿囊絨毛膜發(fā)生聯(lián)系所形成,它是在母羊孕育胎兒時,胎兒血液和母體進(jìn)行養(yǎng)分交換的組織。胎盤中含有多種活性物質(zhì)以及豐富的營養(yǎng)成分[1]。徐桂花[2-3]等對羊胎盤進(jìn)行化學(xué)成分分離提取后進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn),羊胎盤中具有高含量的谷氨酸,約占氨基酸總量的16.07%,精氨酸約占氨基酸總量的13.988%?除谷氨酸,精氨酸外,還含有14種常見氨基酸,其中8種為必需氨基酸,約占氨基酸總量的33.50%。文獻(xiàn)論證[4-5]谷氨酸,精氨酸可有效的促進(jìn)細(xì)胞免疫功能,體液免疫功能.
枸杞子甘,性平。主要歸肝、腎、肺經(jīng)。為滋陰助陽,益精補血之良藥。其化學(xué)成分主要含胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、煙酸、抗壞血酸、β-谷甾醇、及微量元素等。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)通過大量藥理實驗和臨床實驗明,枸杞其主要活性成份枸杞多糖(Lycicum barbarum polysaccbarides,LBP)具有顯著增強免疫功能[6-7]、保肝功能,抗衰老功能及抗疲勞等藥理作用[8]。
維生素 C(Vitamin C ,Ascorbic Acid)又叫 L-抗壞血酸,是人體必需的微量營養(yǎng)元素之一,它具有抗氧化、參與合成膠原蛋白、治療和預(yù)防壞血病、預(yù)防動脈硬化、治療貧血、防癌等多種生理學(xué)功能。除此之外,維生素C還能促進(jìn)機體內(nèi)抗體的形成,提高白細(xì)胞的吞噬能力和對疾病的抵抗力以及對寒冷的耐受力,從而增強機體的免疫功能[9-10]。
本實驗通過灌胃小鼠方式,觀察羊胎盤凍干粉片對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。羊胎盤凍干粉片由羊胎盤凍干粉、枸杞子提取物和維生素C原料制成。
材料與方法
1.1 受試物?實驗室自制,以羊胎盤凍干粉、枸杞子提取物、維生素C原料制成。每片含羊胎盤凍干粉片250mg、枸杞子提取物30mg、維生素C?10mg,規(guī)格0.6g/片。推薦成人每日口服6片。
1.2 動物?采用健康清潔級KM種小鼠200只,雄性,體重18~22g,SPF級,廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。
1.3 主要儀器與試劑?酶標(biāo)儀、電子分析天平、二氧化碳培養(yǎng)箱、半自動生化分析儀、顯微鏡等。MTT、RPMI1640培養(yǎng)液、、綿羊紅細(xì)胞、等。
1.4分組及劑量?先將動物隨機分組,每40只小鼠為1個免疫組,共5個免疫組。每個免疫群組設(shè)羊胎盤凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/(kg·BW)]和陰性對照組,每組10只小鼠。動物灌胃按0.2ml/100g體積給予,對照組給予等體積純水。每天灌胃1次,連續(xù)灌胃30d。
1.5 實驗方法 采用MTT法檢測ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和耳腫脹法檢測遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)兩項細(xì)胞免疫功能檢測;采用Jerne改良玻片法檢測抗體生成細(xì)胞數(shù)和血凝法檢測血清溶血素水平兩項體液免疫功能檢測;采用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗(半體內(nèi)法)和小鼠碳廓清實驗兩項單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測;NK細(xì)胞活性檢測采用乳酸脫氫酶測定法。
1.6 統(tǒng)計學(xué)方法?采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用t檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 受試物對小鼠體重和臟器/體重比值的影響?受試物各劑量組的小鼠末期體重、體重增重、胸腺/體重及脾臟/體重比值與陰性對照組間比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),提示受試物對小鼠的體重增長和免疫器官重量無明顯影響。
2.2 受試物對小鼠細(xì)胞免疫的影響 小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力實驗中,中劑量組的增殖能力[(Dλ)差值]與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗中,中、高劑量組的左右耳片重量差值與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。
2.3 受試物對小鼠體液免疫的影響?抗體生成細(xì)胞數(shù)檢測中,中、高劑量組的溶血空斑數(shù)與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。血清溶血素水平檢測中,中、高劑量組的溶血素抗體積數(shù)與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意(P<0.05)。(表1)
2.4 受試物對小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響?吞噬雞紅細(xì)胞實驗中,各劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均高于陰性對照組,其中高劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。小鼠碳廓清實驗中,低、中劑量組的碳廓清吞噬指數(shù)與陰性對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)(表2)。
2.5 受試物對小鼠 NK 細(xì)胞活性的影響?受試物各劑量組的NK細(xì)胞活性高于陰性對照組,但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表2)。
3討論
本實驗結(jié)果顯示,羊胎盤凍干粉片劑量組與陰性對照組比較能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化作用(P<0.05),促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(P<0.05),促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平(P<0.05),增強小鼠的單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力(P<0.05),對小鼠NK細(xì)胞活性則無明顯影響(P>0.05)。表明羊胎盤凍干粉片具有增強小鼠免疫力的作用。
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