董淑蕓　張世洋

[摘要]目的?探討羊胎盤凍干粉片對小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法?將200只KM小鼠隨機分為5個免疫組，每個免疫群組40只。設(shè)羊胎盤凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和陰性對照組，每組10只動物。 按0.2 ml/100g的體積經(jīng)口給予小鼠灌胃，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30天后，進(jìn)行各項免疫指標(biāo)的測定。 結(jié)果?羊胎盤凍干粉片劑量組與陰性對照組比較能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化作用（P<0.05），促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（P<0.05），促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增強小鼠的單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力（P<0.05），對小鼠NK細(xì)胞活性則無明顯影響（P>0.05）。結(jié)論 羊胎盤凍干粉片具有增強小鼠免疫力功能的作用。

[關(guān)鍵詞]?羊胎盤凍干粉;枸杞子提取物;維生素C;小鼠;免疫、NK

羊胎盤是由羊的子宮粘膜和尿囊絨毛膜發(fā)生聯(lián)系所形成，它是在母羊孕育胎兒時，胎兒血液和母體進(jìn)行養(yǎng)分交換的組織。胎盤中含有多種活性物質(zhì)以及豐富的營養(yǎng)成分[1]。徐桂花[2-3]等對羊胎盤進(jìn)行化學(xué)成分分離提取后進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn)，羊胎盤中具有高含量的谷氨酸，約占氨基酸總量的16.07%，精氨酸約占氨基酸總量的13.988%?除谷氨酸，精氨酸外，還含有14種常見氨基酸，其中8種為必需氨基酸，約占氨基酸總量的33.50%。文獻(xiàn)論證[4-5]谷氨酸，精氨酸可有效的促進(jìn)細(xì)胞免疫功能，體液免疫功能.

枸杞子甘，性平。主要歸肝、腎、肺經(jīng)。為滋陰助陽，益精補血之良藥。其化學(xué)成分主要含胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、煙酸、抗壞血酸、β-谷甾醇、及微量元素等。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)通過大量藥理實驗和臨床實驗明，枸杞其主要活性成份枸杞多糖（Lycicum barbarum polysaccbarides，LBP）具有顯著增強免疫功能[6-7]、保肝功能，抗衰老功能及抗疲勞等藥理作用[8]。

維生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗壞血酸，是人體必需的微量營養(yǎng)元素之一，它具有抗氧化、參與合成膠原蛋白、治療和預(yù)防壞血病、預(yù)防動脈硬化、治療貧血、防癌等多種生理學(xué)功能。除此之外，維生素C還能促進(jìn)機體內(nèi)抗體的形成，提高白細(xì)胞的吞噬能力和對疾病的抵抗力以及對寒冷的耐受力，從而增強機體的免疫功能[9-10]。

本實驗通過灌胃小鼠方式，觀察羊胎盤凍干粉片對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。羊胎盤凍干粉片由羊胎盤凍干粉、枸杞子提取物和維生素C原料制成。

材料與方法

1.1 受試物?實驗室自制，以羊胎盤凍干粉、枸杞子提取物、維生素C原料制成。每片含羊胎盤凍干粉片250mg、枸杞子提取物30mg、維生素C?10mg，規(guī)格0.6g/片。推薦成人每日口服6片。

1.2 動物?采用健康清潔級KM種小鼠200只，雄性，體重18～22g，SPF級，廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.3 主要儀器與試劑?酶標(biāo)儀、電子分析天平、二氧化碳培養(yǎng)箱、半自動生化分析儀、顯微鏡等。MTT、RPMI1640培養(yǎng)液、、綿羊紅細(xì)胞、等。

1.4分組及劑量?先將動物隨機分組，每40只小鼠為1個免疫組，共5個免疫組。每個免疫群組設(shè)羊胎盤凍干粉片低、中、高劑量組分別為[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和陰性對照組，每組10只小鼠。動物灌胃按0.2ml/100g體積給予，對照組給予等體積純水。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30d。

1.5 實驗方法 采用MTT法檢測ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和耳腫脹法檢測遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)兩項細(xì)胞免疫功能檢測;采用Jerne改良玻片法檢測抗體生成細(xì)胞數(shù)和血凝法檢測血清溶血素水平兩項體液免疫功能檢測;采用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗（半體內(nèi)法）和小鼠碳廓清實驗兩項單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測;NK細(xì)胞活性檢測采用乳酸脫氫酶測定法。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法?采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 受試物對小鼠體重和臟器/體重比值的影響?受試物各劑量組的小鼠末期體重、體重增重、胸腺/體重及脾臟/體重比值與陰性對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示受試物對小鼠的體重增長和免疫器官重量無明顯影響。

2.2 受試物對小鼠細(xì)胞免疫的影響 小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力實驗中，中劑量組的增殖能力[（Dλ）差值]與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗中，中、高劑量組的左右耳片重量差值與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.3 受試物對小鼠體液免疫的影響?抗體生成細(xì)胞數(shù)檢測中，中、高劑量組的溶血空斑數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。血清溶血素水平檢測中，中、高劑量組的溶血素抗體積數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意（P<0.05）。（表1）

2.4 受試物對小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響?吞噬雞紅細(xì)胞實驗中，各劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均高于陰性對照組，其中高劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。小鼠碳廓清實驗中，低、中劑量組的碳廓清吞噬指數(shù)與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）（表2）。

2.5 受試物對小鼠 NK 細(xì)胞活性的影響?受試物各劑量組的NK細(xì)胞活性高于陰性對照組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

本實驗結(jié)果顯示，羊胎盤凍干粉片劑量組與陰性對照組比較能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化作用（P<0.05），促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（P<0.05），促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增強小鼠的單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力（P<0.05），對小鼠NK細(xì)胞活性則無明顯影響（P>0.05）。表明羊胎盤凍干粉片具有增強小鼠免疫力的作用。

引用文獻(xiàn)：

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陸暉，閆曉梅，張雙全.羊胎盤活細(xì)胞素微量元素和氨基酸組成的分析.南京師大學(xué)報（自然科學(xué)版）2001 年第 24 卷第 1 期：79-82

李玉慶 張小平 程愛國.精氨酸的免疫調(diào)理作用.中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志 2007年2月第 1O卷第 2期：121-122

趙保路，張標(biāo).專利號：CN201611034280.3. 2017年2月22號：1-7

段文杰.枸杞子的藥理作用及價值.?黑龍江醫(yī)藥.2013年，26（6）：127-128

宋憲銘 ，賈 寧。枸杞多糖對小鼠免疫功能響的研究。甘肅奇牧獸醫(yī) 2011年 6（總 221）期：5-7

8.蔣萬志 ，張洪泉.枸杞多糖在免疫和抗衰老方面的研究進(jìn)展. 中國野生植 第 29卷第 2期2010年 4月：5-7

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10.維生素C對小鼠免疫功能的影響.右江名族醫(yī)學(xué)院學(xué)報.1990年3月，12（1）：1-3