馬金慧　楊克澤　吳之濤　崔凌霄　任寶倉　楊成德　高正睿　陳志國

摘要：近年來，由藤倉鐮孢菌（Fusarium fujikuroi）引起的玉米莖腐病在甘肅發(fā)生危害，造成部分品種植株枯死，嚴重減產(chǎn)。為篩選防治玉米藤倉鐮孢莖腐病的高效低毒殺菌劑，本研究采用菌絲生長速率法測定14種殺菌劑對藤倉鐮孢菌的毒力。結果表明：10%苯醚甲環(huán)唑WG、12.5%戊唑醇EW、75%肟菌·戊唑醇WG和70%丙森鋅WP對藤倉鐮孢菌菌絲的生長均有較好的抑制作用。對該菌毒力最強的殺菌劑是12.5%戊唑醇EW，其EC50值為0.0831 μg/mL;較強的是10%苯醚甲環(huán)唑WG和75%肟菌·戊唑醇WG，其EC50值分別為0.2927 μg/mL和0.3914 μg/mL;70%丙森鋅WP和75%百菌清WP的毒力相對較強，EC50值分別為0.6404 μg/mL和0.7487 μg/mL;2%春雷霉素AS毒力最弱，EC50 值為45.6161 μg/mL。玉米藤倉鐮孢菌菌絲生長對75%肟菌·戊唑醇WG、0.3%四霉素AS、80%代森錳鋅WP和2%春雷霉素AS的敏感性相對較強，對75%百菌清WP、77%氫氧化銅WP和50%烯酰嗎啉WG的敏感性較弱。

關鍵詞：玉米莖腐病;藤倉鐮孢菌（F.fujikuroi）;生長速率法;毒力測定

中圖分類號：S482文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2020）03-0102-05

AbstractIn recent years， corn stalk rot caused by Fusarium fujikuroi occurred seriously in Gansu Province， causing some varieties to die and yield-reduction seriously. In order to screen out the high-efficiency and low-toxicity fungicides for field control of corn stalk rot， the toxicity of 14 fungicides to F. fujikuroi was determined by mycelium growth rate method. The results showed that 10% methyloxazole WG， 12.5% tebuconazole EW， 75% oxime bacteria·tebuconazole WG and 70% propineb WP had better inhibitory effects on mycelium growth of F. fujiana，in which，12.5% tebuconazole EW had the strongest toxicity to F.fujikuroi with the EC50 value as 0.0831μg/mL. The toxicity of 10% methyloxazole WG and 75% oxime bacteria·tebuconazole WG was stronger，and the corresponding EC50 values were 0.2927， 0.3914 μg/mL， respectively. 70% propineb WP and 75% chlorothalonil WP had relatively stronger toxicity with the EC50 values as 0.6404 and 0.7487 μg/mL， respectively，While that of 2% kasugamycin AS was the weakest with the EC50 value as 45.6161 μg/mL. The mycelial growth of F.fujikuroi was relatively sensitive to 75% oxime bacteria·tebuconazole WG， 0.3% tetramycin AS， 80% carmazine WP and 2% kasugamycin AS， but less sensitive to 75% chlorothalonil WP， 77% copper hydroxide WP and 50% dimethomorph WG.

KeywordsCorn stalk rot;Fusarium fujikuroi;Growth rate method;Toxicity test

玉米是重要的糧飼兼用型作物和工業(yè)原料、能源植物[1]，種植范圍廣，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和國民經(jīng)濟中占有重要地位。近年來，由于來自全國各地的雜交組合增多，加之連年種植，重茬迎茬嚴重，甘肅制種玉米病害發(fā)生呈現(xiàn)復雜性。2016年甘肅首次發(fā)現(xiàn)由藤倉鐮孢菌（Fusarium.fujikuroi）引起的玉米莖腐病[2]，發(fā)病植株通常表現(xiàn)為地上第二節(jié)以上部位發(fā)病。受害植株主要表現(xiàn)為莖基部葉鞘上呈圓形、近圓形水漬狀病斑，剝開葉鞘后可見發(fā)病部位有白色稀疏霉層，莖節(jié)部腐爛并縊縮，病重時繞莖稈一周，發(fā)病節(jié)上部青枯，造成植株矮化、倒伏、枯死和田間斷壟。該病在大喇叭口期田間呈順行連片發(fā)生，一旦發(fā)病會造成嚴重損失，甚至絕收，嚴重影響玉米產(chǎn)量，其它生育期未見發(fā)生。目前此病已在武威、張掖等地制種田發(fā)生，2018年武威大田中也已發(fā)現(xiàn)，并造成一定面積的損失。

國內外研究表明，藤倉鐮孢菌是引起水稻惡苗病的重要致病菌[3，4]，對其研究也是作為水稻惡苗病的主要病原菌而進行[5，6]，有關該菌對其它作物危害的研究較少。本試驗在前人對藤倉鐮孢菌引起的玉米莖腐病癥狀、病原菌及其生物學特性研究的基礎上，選擇14種殺菌劑，研究其對玉米藤倉鐮孢菌的毒力，以期篩選出有效藥劑，為該病防治提供技術依據(jù)。

1材料與方法

1.1病原菌

本試驗于2017年在甘肅省農(nóng)業(yè)工程技術研究院植物病理學實驗室進行。藤倉鐮孢菌在甘肅省農(nóng)業(yè)工程技術研究院植物病理實驗室4℃冰箱中保存。

1.2供試培養(yǎng)基

采用PDA培養(yǎng)基對病原菌進行保存和活化。

1.3供試殺菌劑

供試殺菌劑共14種（表1）。1.4試驗方法

菌絲生長速率抑制法：根據(jù)預試結果，將不同殺菌劑用無菌水配制成5個濃度（質量濃度）梯度（表2）。分別將不同濃度藥劑按照體積比1∶9的比例加入到滅菌冷卻至50℃的PDA培養(yǎng)基中，充分混勻后分別倒入直徑9 cm的滅菌培養(yǎng)皿中，制成系列濃度的含藥培養(yǎng)基。每處理設3次重復，以加入無菌水的PDA培養(yǎng)基作對照。用直徑0.5 cm的無菌打孔器沿著菌種同一個圓周打孔，用滅菌鑷子將打好的菌餅接種到含藥培養(yǎng)基的正中央，菌絲面朝下，每皿一塊，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 d。采用十字交叉法測量菌落直徑（cm），取平均值，計算抑菌率。

抑菌率（%）=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-0.5）×100。

1.5數(shù)據(jù)處理與分析

采用Microsoft Excel和SPSS軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析。將抑菌率換算成抑制幾率值，藥劑質量濃度轉化為對數(shù)值，并用回歸法求毒力回歸方程和相關系數(shù)，計算EC50值。

2結果與分析

2.1不同殺菌劑對藤倉鐮孢菌菌絲的抑制作用

由表2可以看出，處理后6 d，各殺菌劑不同濃度處理對藤倉鐮孢菌菌絲均有不同程度的抑制作用，同種殺菌劑隨濃度增大菌落直徑逐漸減小、抑制率逐漸增大。其中，10%苯醚甲環(huán)唑WG、12.5%戊唑醇EW（最低濃度處理除外）、75%肟菌·戊唑醇WG和70%丙森鋅WP不同濃度處理的抑菌率均達到60%以上。各殺菌劑中，75%肟菌·戊唑醇WG濃度7 μg/mL時其抑制率達到100%;10%苯醚甲環(huán)唑WG濃度152 μg/mL時其抑制率達到98.4%;0.3%四霉素AS和80%代森錳鋅WP濃度分別為111、86 μg/mL時其抑菌率分別為98.3%和99.6%，但其它濃度的抑菌率均較低;2%春雷霉素AS濃度0.78 μg/mL時其抑菌率為1.6%，幾乎對藤倉鐮孢菌菌絲沒有抑制作用。由此認為，10%苯醚甲環(huán)唑WG、12.5%戊唑醇EW、75%肟菌·戊唑醇WG和70%丙森鋅WP對藤倉鐮孢菌菌絲的生長均有較好的抑制作用。

2.2不同殺菌劑對藤倉鐮孢菌的室內毒力測定

由表3可知，14種殺菌劑對玉米藤倉鐮孢菌的毒力由強到弱依次為12.5%戊唑醇EW、10%苯醚甲環(huán)唑WG、75%肟菌·戊唑醇WG、70%丙森鋅WP、75%百菌清WP、50%多菌靈WP、80%代森錳鋅WP、47%春雷·王銅WP、62.5 g/L精甲·咯菌腈SC、70%甲基硫菌靈WP、0.3%四霉素AS、77%氫氧化銅WP、50%烯酰嗎啉WG和2%春雷霉素AS。其中12.5%戊唑醇EW的毒力最強，其EC50值為0.0831 μg/mL;10%苯醚甲環(huán)唑WG和75%肟菌·戊唑醇WG的毒力相對較強，其EC50值分別為0.2927 μg/mL 和0.3914 μg/mL;而2%春雷霉素AS的毒力最弱，其EC50 值為45.6161 μg/mL。

按照回歸方程的斜率k與殺菌劑對病原菌的敏感性成正比的關系，供試藥劑中，斜率k最大為3.2237，說明藤倉鐮孢菌對75%肟菌·戊唑醇WG最為敏感;其次斜率k相對較大時為1.8201，說明其對0.3%四霉素AS較為敏感;80%代森錳鋅WP和2%春雷霉素AS的斜率k分別為1.2606和1.2021，說明其對這兩種藥劑相對敏感;斜率k在0.5467～0.6718之間，說明其對75%百菌清WP、77%氫氧化銅WP和50%烯酰嗎啉WG的敏感性較弱。

3討論與結論

玉米莖腐病的病原菌主要有腐霉菌和鐮孢菌，其中由禾谷鐮孢菌所致該病的報道較多 [7-9]，由藤倉鐮孢菌引起的莖腐病鮮有報道。本研究以藤倉鐮孢菌為供試菌株，測定14種殺菌劑對該菌的室內毒力。結果表明：14種供試藥劑中對玉米藤倉鐮孢菌的毒力較強的有12.5%戊唑醇EW、10%苯醚甲環(huán)唑WG和75%肟菌·戊唑醇WG、70%丙森鋅WP和75%百菌清WP，2%春雷霉素AS毒力最弱。玉米藤倉鐮孢菌菌絲生長對75%肟菌·戊唑醇WG、0.3%四霉素AS、80%代森錳鋅WP和2%春雷霉素AS敏感性相對較強，對75%百菌清WP、77%氫氧化銅WP和50%烯酰嗎啉WG的敏感性較弱。藤倉鐮孢菌作為水稻惡苗病的主要病原菌研究較多，如陳宏州等[10]室內毒力測定表明戊唑醇對藤倉鐮孢菌的毒力最強，這與本研究結果一致，但在田間試驗中戊唑醇的防治效果并不很突出。多菌靈對藤倉鐮孢菌也有一定抑制作用，但相關研究顯示該菌對多菌靈產(chǎn)生了抗藥性 [11]，生產(chǎn)中不建議推薦使用。整體來看，三唑類殺菌劑對于藤倉鐮孢菌的抑制效果較為明顯。室內毒力測定雖然可為玉米藤倉鐮孢莖腐病的防治提供一定的理論依據(jù)，但室內篩選的藥劑在大田中的防效可能存在差異，因此還需在探明該病發(fā)病規(guī)律和流行因素的前提下通過大田試驗對室內所選藥劑的效果進一步驗證。

參考文獻：

[1]段燦星，王曉鳴，武小菲，等. 玉米種質和新品種對腐霉莖腐病和鐮孢穗腐病的抗性分析[J]. 植物遺傳資源學報，2015，16（5）：947-954.

[2]崔凌霄，楊成德，田有輝，等. 甘肅省玉米鐮孢莖腐病病原鑒定及其生物學特性[J].草業(yè)科學，2018，35（10）：2373-2380.

[3]Wulff E G，Srensen J L，Lübeck M，et al. Fusarium spp.associated with rice Bakanae：ecology，genetic diversity，pathogenicity and toxigenicity[J]. Environmental Microbiology，2010，12（3）：649-657.

[4]陳宏州，楊紅福，姚克兵，等. 水稻惡苗病病原菌鑒定及室內藥劑毒力測定[J]. 植物保護學報，2018，45（6）：1356-1366.

[5]陳子豪. 藤倉鐮孢菌對多菌靈抗藥性分子機制及檢測方法研究[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學，2014.

[6]鄭睿，聶亞鋒，于俊杰，等. 江蘇省水稻惡苗病菌對咪鮮胺和氰烯菌酯的敏感性[J]. 農(nóng)藥學學報，2014，16（6）：693-698.

[7]王曉鳴，王振營. 中國玉米病蟲草害圖鑒[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2018：56-65.

[8]吳之濤，楊克澤，馬金慧，等. 玉米莖基腐病研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2018，46（22）：5-7.

[9]郭成，王寶寶，楊洋，等. 玉米莖腐病研究進展[J]. 植物遺傳資源學報，2019，20（5）：1118-1128.

[10]陳宏州，楊紅福，饒鳴帥，等. 水稻惡苗病防治藥劑效果評價[J]. 中國農(nóng)學通報，2018，34（33）：140-146.

[11]Chen Z H，Gao T，Liang S P，et al. Molecular mechanism of resistance of Fusarium fujikuroi to benzimidazole fungicides[J]. FEMS Microbiology Letters，2014，357（1）：77-84.