余純 莊玉磊 楊萍 李紅

（1 廣州普華優(yōu)康健康管理咨詢有限公司 廣東 廣州 510530）

（2 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院生殖中心 廣東 廣州 510010）

單基因遺傳病是指受一對等位基因控制的遺傳病，且臨床上已經(jīng)確診的等位基因約有6600 多種，且每年以10 ～15 種速度遞增，已經(jīng)對人類健康構(gòu)成較大的威脅[1]。目前，臨床上常見的單基因遺傳病包括：紅綠色盲、白化病與血友病等[2]。國內(nèi)學(xué)者研究表明[3]：單基因遺傳病病因相對復(fù)雜，主要是由于基因在細(xì)胞復(fù)制時(shí)發(fā)生差錯(cuò)，亦可由于外界因素引起的突變。臨床研究表明：遺傳因素作用包括主要基因、特異性基因、染色體畸變等，再加上環(huán)境污染、生態(tài)環(huán)境破壞等，導(dǎo)致基因頻率增高，影響患者健康、生活[4-5]。近年來，基因診斷技術(shù)在臨床上得到應(yīng)用，已經(jīng)為早期診斷單基因病、多基因病及腫瘤遺傳病、線粒體遺傳病等帶來曙光，且經(jīng)歷了間接診斷到直接最難端，從簡單到復(fù)雜再回歸單一，具有廉價(jià)、高通量、自動(dòng)化等優(yōu)勢[6-7]。因此，本文采用隨機(jī)病例發(fā)放進(jìn)行研究，探討探討單基因遺傳病基因診斷技術(shù)的臨床應(yīng)用效果和意義，效果如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1—2018 年4 月治療的單基因遺傳病患者100例作為對象，孕周36～42周，平均（38.31±4.56）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）入組者均符合單基因遺傳病診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)臨床隨訪最終確診；（2）符合單基因遺傳病基因診斷技術(shù)適應(yīng)證，患者均能耐受；（3）能遵醫(yī)完成有關(guān)檢查、診斷；排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并妊娠期糖尿病、高血壓或自身免疫免疫系統(tǒng)疾病者；（2）精神異常、凝血功能異?；虬橛凶陨砻庖呦到y(tǒng)疾病者。

1.2 方法

所有患者均經(jīng)臨床隨訪最終確診（金標(biāo)準(zhǔn)）[8]；

確診前所有患者均給予單基因遺傳病基因診斷技術(shù)進(jìn)行診斷鑒別。（1）目標(biāo)序列捕獲與測序。所有患者入院后次日空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血5ml，放置在EDTA 中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)流程下提取基因組DNA，構(gòu)建DNA 文庫，利用高通量測序儀連續(xù)雙向測序90個(gè)循環(huán)，并利用Illumina Pipeline software 完成原始序列數(shù)據(jù)的讀??；（2）目標(biāo)序列的分析。獲得相應(yīng)的數(shù)據(jù)后下機(jī)完成信息部分分析。對獲得的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行測序質(zhì)量評(píng)估，剔除低質(zhì)量及被接頭污染的reads，然后利用BWA 軟件對HG19 序列進(jìn)行對比。同時(shí)，目標(biāo)序列分析時(shí)對序列捕獲效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并利用SOAP snp 軟件與Samtools 軟件完成目標(biāo)序列查詢，從而獲得目標(biāo)區(qū)域堿基多態(tài)性結(jié)果；然后將獲得的結(jié)果與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行對比，對可疑突變進(jìn)行注釋、篩選[9]。（3）基因突變序列的驗(yàn)證。對于發(fā)現(xiàn)的致病突變，對其所在的片段完成上、下游引物的設(shè)計(jì)，并完成PCR 擴(kuò)增，完成產(chǎn)物Sanger 測序，并將獲得的結(jié)果與相應(yīng)基因標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對比，從而驗(yàn)證單基因遺傳病基因診斷技術(shù)診斷結(jié)果，并將單基因遺傳病基因診斷技術(shù)診斷結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”結(jié)果進(jìn)行比較[10]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0 軟件處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用n（%）表示，計(jì)量資料行t 檢驗(yàn)，采用（±s）表示，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

入組的100 例單基因遺傳病患者均經(jīng)隨訪最終確診，所有患者確診前均行單基因遺傳病基因診斷技術(shù)，患者均得到確診，與“金標(biāo)準(zhǔn)”診斷符合率為100.00%。單基因遺傳代謝病中排在前三位的分別為遺傳代謝、神經(jīng)系統(tǒng)及皮膚系統(tǒng)疾病，分別占：34.00%、19.00%、9.00%，見表。

表 入組患者單基因遺傳病類型及構(gòu)成比

3.討論

單基因遺傳病是一類疾病的統(tǒng)稱，對人類健康損傷相對嚴(yán)重，且臨床上尚缺乏有效的治療手段，成為人類出生缺陷的主要原因。國內(nèi)學(xué)者研究表明：由于單基因病變常涉及一個(gè)或幾個(gè)基因突變，加強(qiáng)單基因遺傳病早期診斷、治療對改善患者預(yù)后具有重要的意義。國外學(xué)者研究表明：單基因遺傳病診斷前應(yīng)找找到致病的基因，對先證患者進(jìn)行病因分析，有助指導(dǎo)臨床治療。本研究中，入組的100 例單基因遺傳病患者均經(jīng)隨訪最終確診，所有患者確診前均行單基因遺傳病基因診斷技術(shù)，患者均得到確診，與“金標(biāo)準(zhǔn)”診斷符合率為100.00%。單基因遺傳代謝病中排在前三位的分別為遺傳代謝、神經(jīng)系統(tǒng)及皮膚系統(tǒng)疾病，分別占：34.00%、19.00%、9.00%，說明將單基因遺傳病基因診斷技術(shù)用于單基因遺傳病中能獲得較高的診斷符合率，能為臨床診療提供依據(jù)和參考。國內(nèi)學(xué)者研究表明：理論是所有的單基因病最終均應(yīng)檢測致病基因，而經(jīng)典的連鎖分析與定位克隆技術(shù)最為有效、最為準(zhǔn)確。但是，該方法對于表型不外顯或外顯不全，或自身產(chǎn)生的基因突變者難以獲得較高的準(zhǔn)確率。國外學(xué)者發(fā)明了MLPA 技術(shù)，屬于是一種高通量、針對待測核酸中靶序列完成定量、定性測定，屬于是一種新型的單基因檢測技術(shù)，僅需要少許DNA 即可，經(jīng)過變性、雜交、連接與PCR 擴(kuò)增等步驟即可實(shí)現(xiàn)不同靶基因的檢測與定量分析。同時(shí)，該方法與傳統(tǒng)測序方法相比能對缺失、重復(fù)的外顯子進(jìn)行全面檢測，能提高檢測精度與敏感度。因此，臨床上對于疑似單基因遺傳病患者應(yīng)加強(qiáng)單基因遺傳病基因診斷技術(shù)測定，對于測定結(jié)果異常患者應(yīng)及時(shí)制定有效的措施進(jìn)行干預(yù)，必要時(shí)指導(dǎo)患者終止妊娠。

綜上所述，單基因遺傳病基因診斷技術(shù)用于單基因遺傳病中能獲得較高的診斷符合率，具有創(chuàng)傷小、風(fēng)險(xiǎn)低等特點(diǎn)，能為臨床診療提供依據(jù)和參考。