呂艷玲,李嘉慧，劉宇

(1.北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院，北京 101300；2.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091)

中藥已經(jīng)成為中國傳統(tǒng)文化不可分割的一部分，在治療疾病方面具有很好的療效，而傳統(tǒng)的治療過程中往往使用的都是中藥材飲片，但是隨著患者對于治療效果要求的增高和中藥現(xiàn)代化的快速發(fā)展，多種中藥飲片的有效成分得以提取，同時(shí)不同的中藥劑型應(yīng)運(yùn)而生，如中藥免煎顆粒。中藥免煎顆粒作為一種中藥新劑型，主要以中藥飲片為依托，根據(jù)藥劑學(xué)理論為方向，選擇靶向溶媒，提取單味中藥飲片的有效成分，采用現(xiàn)代技術(shù)分離、純化，進(jìn)一步包裝而成的顆粒物質(zhì)，患者可以直接溫水服用，避免了服用過程中傳統(tǒng)中藥飲片的煎煮過程，規(guī)避了傳統(tǒng)中藥飲片不易存儲(chǔ)和攜帶的缺點(diǎn)[1-3]。但是有關(guān)中藥免煎顆粒與中藥飲片有效成分含量比較的研究報(bào)道尚不多見，限制了中藥免煎顆粒在臨床上的應(yīng)用。本文通過對麩炒白術(shù)和牡丹皮2味中藥免煎顆粒和其飲片有效成分含量進(jìn)行研究，來判斷兩者的差別。

1 實(shí)驗(yàn)藥物和儀器

麩炒白術(shù)免煎顆粒、牡丹皮免煎顆粒分別由廣東一方藥業(yè)公司提供，批號(hào)分別為8086742、8115382。白術(shù)、牡丹皮中藥飲片分別由北京時(shí)珍堂巴東有限公司、北京明輝恒通有限公司提供，批號(hào)分別為18050401、 17022501。丹皮酚對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，標(biāo)準(zhǔn)品含量均>99%。無水乙醚(分析純)、甲醇(色譜純)和乙腈(色譜純)均由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司提供。氣質(zhì)聯(lián)用儀由安捷倫公司提供，型號(hào)為7890A-5975C。高效液相色譜儀由日本島津公司提供，型號(hào)為LC-20AT。

2 麩炒白術(shù)免煎顆粒與中藥飲片中揮發(fā)油含量的測定

2.1 揮發(fā)油提取

取白術(shù)飲片200 g，粉碎，備用，白術(shù)顆粒20包，備用。分別放入100 mL圓底燒瓶中，加入純水500 mL，混合均勻，靜置60 min，提取直至提取裝置中揮發(fā)油量組分不再增加為止，冷卻至室溫，乙醚萃取直至乙醚層無色透明，收集乙醚層液體，低溫、水浴蒸發(fā)乙醚后真空干燥48 h，精密稱重[4-5]。有關(guān)白術(shù)飲片和麩炒白術(shù)顆粒中揮發(fā)油提取結(jié)果見表1。

表1 白術(shù)飲片和麩炒白術(shù)顆粒揮發(fā)油色澤及提取率結(jié)果

2.2 有效成分的測定

將干燥后樣品加入適量乙醚，定容至100 mL，采用氣質(zhì)聯(lián)用儀分析揮發(fā)油組成成分和含量。

氣相色譜條件：進(jìn)樣量1.0 μL；分流進(jìn)樣(分流比5∶1)；初始溫度50 ℃保溫3 min，4 ℃/min勻速升溫至120 ℃，保溫8 min,6 ℃/min勻速升溫至250 ℃保溫10 min[4-5]。

質(zhì)譜條件：選用電子轟擊電離源，離子源溫度220 ℃，0.9 kV，采用質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫分析數(shù)據(jù)[4-5]。

結(jié)果顯示，麩炒白術(shù)免煎顆粒與白術(shù)飲片揮發(fā)油成分存在差異，中藥飲片中含有43種揮發(fā)油成分，占總含量的92.33%，含量最多的成分為蒼術(shù)酮，其次為香橙烯，α-雪松烯；免煎顆粒分離出33種揮發(fā)油成分，占總含量的87.77%，含量最多的成分同樣為蒼術(shù)酮，其次γ-欖香烯，香橙烯。共有31種揮發(fā)油為兩種中藥劑型共有，相比較中藥飲片，β-綠葉烯和8-十七碳烯為中藥免煎顆粒特有，12種獨(dú)特成分為中藥飲片特有，免煎顆粒與中藥飲片所含揮發(fā)油組分比較如表2。

表2 麩炒白術(shù)免煎顆粒與中藥飲片所含揮發(fā)油組分比較

續(xù)表2

編號(hào)出峰時(shí)間(min)化合物名稱分子量相對含量白術(shù)飲片麩炒白術(shù)顆粒2727.05α-石竹烯2040.580.332827.25S-十七碳烯238-0.302927.76杜松腦2220.770.933028.174(14),11-桉葉二烯2041.251.483128.746,7-二氫甲氧呋豆素2183.462.853229.31柏木烯2040.880.503329.429-methylene-7-pentadecyne2200.430.573429.732,6-ditert-butylquinone2200.550.603529.96香橙烯20411.8810.943631.15綠葉烯2041.280.943731.05薦草烯2040.02-3832.722-methoxymethyl-4,4-dimethyl-5-phenyldihydropyran2321.822.423933.91α-紅沒藥醇2220.34-4034.11十六酸2560.77-4134.82匙葉桉油稀醇2200.560.254235.21芹烷二烯酮2181.320.994335.56Isolantolactonoid butenolide A2320.771.964436.98油酸2821.802.244537.21十八酸2840.41-

3 牡丹皮免煎顆粒與中藥飲片有效成分含量的測定

3.1 色譜條件

色譜柱：伊力特C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，中國科學(xué)院北京化學(xué)物理研究所提供)；流動(dòng)相∶甲醇-水(50∶50)；檢查波長：274 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；理論塔板數(shù)按丹皮酚峰值計(jì)算應(yīng)大于等于5 000[6]。

3.2 對照品溶液制備

稱取丹皮酚對照品0.55 mg，加入甲醇10 mL，混合成濃度為0.055 mg/mL的對照品溶液，備用。

3.3 供試品溶液制備

稱取牡丹皮免煎顆粒1.2 g，牡丹皮中藥飲片10 g，放于錐形瓶中，加入甲醇100 mL，密封，搖勻，超聲處理(300 w，50 kHz)，30 min，冷卻至室溫，準(zhǔn)確稱量，甲醇補(bǔ)足缺失量，搖勻，過濾[7]。精密量取濾液1 mL放于10 mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜(0.45 μm)過濾，備用[7]。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系分析

緊密吸取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL放于100 mL容量瓶中，按照3.1中色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(y)，丹皮酚含量(μg)為橫坐標(biāo)(x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：y=1.777 1×10-3x-0.275 6，相關(guān)系數(shù)r≥0.999 9，結(jié)果顯示，丹皮酚在56～276 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

室溫條件下，取免檢顆粒的樣品溶液，靜置0 h、2 h、4 h、6 h、8 h后測定其有效成分含量，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.29%(n=5)，結(jié)果顯示，至少在8 h內(nèi)丹皮酚含量穩(wěn)定。

3.6 精密度試驗(yàn)

取配置好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別量取10 μL，每種樣品進(jìn)樣5次，測量峰面積，計(jì)算丹皮酚峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.21%(n=5)，結(jié)果顯示，此方法的精密度較好。

3.7 回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的免煎顆粒6份，加入適量丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)品，按照上文3.3的方法制備供試品，使用移液槍吸取10 μL進(jìn)行測定，計(jì)算加樣回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值，RSD=0.70%(n=6)。結(jié)果顯示，丹皮酚的回收率為97.10%，回收率試驗(yàn)結(jié)果如表3。

公式[6]：回收率(%)=[(測得丹皮酚的含量-樣品中丹皮酚的含量)/添加丹皮酚的含量]×100%

3.8 供試品溶液的測定

對供試品進(jìn)行含量測定，取3.3中供試品溶液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10 μL，測定含量。將免煎顆粒中的丹皮酚含量轉(zhuǎn)化成相當(dāng)生藥中的丹皮酚含量，比較分析[6]。結(jié)果顯示，丹皮酚在牡丹皮免煎顆粒中的含量與在中藥飲片中的含量存在明顯差異，分別為，免煎顆粒含有丹皮酚4.67 mg/g，中藥飲片含有丹皮酚24.25 mg/g。

表3 丹皮酚回收率試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

白術(shù)和牡丹皮是有較高藥用價(jià)值的中藥飲片，其中揮發(fā)油成分是白術(shù)的主要活性成分，臨床上具有利尿、消炎、鎮(zhèn)痛、降血糖、抗衰老和安胎等作用[8-10]，臨床上有多種方法可以用于分析白術(shù)的揮發(fā)油的含量，其中氣質(zhì)色譜是最重要的分析方法，文獻(xiàn)報(bào)道，邱琴等[11]利用超臨界CO2提取法對揮發(fā)油進(jìn)行提取，進(jìn)而利用氣質(zhì)色譜對其含量進(jìn)行分析。潘歡歡等[12]運(yùn)用氣質(zhì)色譜聯(lián)用法分析出了白術(shù)飲片中揮發(fā)油的成分。丹皮酚是牡丹皮的主要活性成分，嚴(yán)安定等[13-14]研究發(fā)現(xiàn)，丹皮酚是牡丹皮有效成分中含量和活性都較高的成分，是目前牡丹皮質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一,具有多種藥理活性，如抗炎[15]，抗氧化[16]，抗動(dòng)脈粥樣硬化[17-18]，抗抑郁[19-20]等。同時(shí)，以白術(shù)和牡丹皮為代表的中藥免煎顆粒是中藥現(xiàn)代化過程中發(fā)展起來的一種新的中藥劑型，與傳統(tǒng)的中藥飲片相比較，具有使用方便、有效成分明確、用量準(zhǔn)確和服用方便等多方面的優(yōu)點(diǎn)，越來越受到病人的喜愛。但是在臨床應(yīng)用上，中藥免煎顆粒能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)的中藥飲片被廣泛的應(yīng)用于臨床，還需要大量的試驗(yàn)數(shù)據(jù)作為支撐，此項(xiàng)研究已經(jīng)成為目前中醫(yī)界研究的熱點(diǎn)問題。

本次實(shí)驗(yàn)通過對麩炒白術(shù)免煎顆粒中揮發(fā)油的種類和含量、牡丹皮免煎顆粒中丹皮酚有效成分的含量與其相應(yīng)的中藥飲片有效成分種類和含量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)麩炒白術(shù)免煎顆粒、牡丹皮免煎顆粒與其相應(yīng)的中藥飲片的有效成分存在明顯的差別，同時(shí)相同成分含量也存在明顯差別。

由于中藥飲片及其制劑質(zhì)量的臨床使用的優(yōu)劣，不能僅憑借一種或者幾種有效成分的差別來判斷。因此，在傳統(tǒng)的中藥材飲片對比衍生出的各種新劑型的研究中，正確選擇靶向較強(qiáng)，對于中藥材化學(xué)成分分析較全面、具體，并充分利用中藥現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)技術(shù)，例如指紋圖譜手段，建立完善的中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，為中藥飲片及其制劑的臨床發(fā)展提供幫助[6，21]。