石鋒，王寧，陳臘梅，郭飛波

（湖北省天門市第一人民醫(yī)院，湖北 天門）

0 引言

NSCLC（非小細(xì)胞肺癌）屬于臨床上常見的惡性腫瘤，與小細(xì)胞癌區(qū)別在于其癌細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂較為緩慢，因此其擴(kuò)散轉(zhuǎn)移較遲?；颊咴缙诎Y狀通常表現(xiàn)為胸痛、痰血、低熱及咳嗽等，并不明顯特征性，極易被忽視[1-2]。隨著疾病不斷進(jìn)展，隨之出現(xiàn)疲乏、呼吸困難及咯血等現(xiàn)象，直接危及生命安全，給患者帶來嚴(yán)重后果。臨床既往多采取影像學(xué)方式進(jìn)行診斷，并存在明顯特征性，但其單一檢查的漏診率及誤診率較高，極易耽誤病情，不利于病情快速康復(fù)[3-4]。隨后臨床提出在此基礎(chǔ)上采取EGFR19/21、Livin 蛋白水平檢查，可進(jìn)一步提升檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床治療方案的選擇及預(yù)后評(píng)估提供參考價(jià)值，但臨床相關(guān)報(bào)道較少[5]。本文對(duì)此展開研究，擇我院2016 年1 月至2019 年1月納入的63 例NSCLC 患者作為研究對(duì)象，分別給予CT、EGFR19/21、Livin 蛋白水平檢查，分析其聯(lián)合診斷在疾病中的價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇 我 院 2016 年 1 月 至 2019 年 1 月 納 入 的 63例NSCLC 患者作為研究對(duì)象，其中男性患者36 例，女性患者 27 例；年齡 25-76 歲，平均（48.97±1.26）歲；腺癌 25 例，鱗癌 38 例；腫塊直徑 2-8cm，平均直徑（5.12±1.36）cm；高分化者 14 例，中分化者 26 例，低 分 化 者 23 例；I 期 25 例，II 期 21 例，III 期 17 例。另選擇腫瘤組織邊緣的癌旁正常肺組織標(biāo)本作為對(duì)照組。

納入標(biāo)準(zhǔn)[6]：（1）所有研究對(duì)象均經(jīng)過病理檢驗(yàn)確診；（2）資料完整，中途未退出研究者；（3）患者及家屬均知曉本次研究目的，并自愿加入。

排除標(biāo)準(zhǔn)[7]：（1）依從性較差，無法順利完成研究；（2）研究前經(jīng)檢查顯示器官功能異常、肝腎疾病、全身性疾病者；（3）存在精神方面疾病、文盲或者溝通障礙者。

1.2 方法

所有研究對(duì)象均給予CT、EGFR19/21、Livin 蛋白水平檢查，首先選擇GE 公司Light-speedVCT64 排128 層螺旋CT，掃描范圍設(shè)置為胸鎖關(guān)節(jié)到腎上腺，管電流調(diào)整為300mA，管電壓120kV，層厚5mm，薄層重建為1.25mm。而增強(qiáng)掃描選擇非離子型對(duì)比劑，濃度控制在300mgI/mL，劑量為100mL，注射速度2.5-3.0mL/s，最后由兩名專業(yè)醫(yī)師對(duì)獲得的CT 圖像進(jìn)行閱片。

選擇EGFR 基因突變檢測(cè)試劑盒，儀器選擇羅氏480II 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀，利用Taqman 探針技術(shù)分析肺癌組織及癌旁正常組織的EGFR19/21 情況，其中反應(yīng)循環(huán)參數(shù)設(shè)置為：50℃2min，95℃10min，激活DNA 聚合酶，95℃ 15s，62℃ 1min，重復(fù) 40 次。

將所有標(biāo)本置于10%甲醛液中妥善固定，常規(guī)方式進(jìn)行石蠟包埋，隨后連續(xù)切片五張，保證片厚在4um左右，嚴(yán)格遵照免疫組化SABC 法進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)說明書要求。

1.3 觀察指標(biāo)

密切關(guān)注所有研究對(duì)象的CT、EGFR19/21、Livin蛋白水平檢查結(jié)果，分析三者聯(lián)合檢測(cè)運(yùn)用于疾病診斷中的價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 CT 檢查結(jié)果

所有研究對(duì)象經(jīng)過CT 檢查后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有54例患者的分期情況與病理檢驗(yàn)結(jié)果一致，因此CT 檢查的符合率為85.71%（54/63）。

2.2 Livin 蛋白水平檢查結(jié)果

所有研究對(duì)象經(jīng)過Livin 蛋白水平檢查后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其免疫組織化學(xué)陽性信號(hào)主要存在細(xì)胞漿上，并呈現(xiàn)出棕黃色細(xì)顆粒狀，其中NSCLC 組織中Livin 蛋白的陽性表達(dá)率55.56%（35/63），而正常癌旁組織中Livin 蛋白的陽性表達(dá)率4.76%（3/63），因此NSCLC組織中Livin 蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于正常癌旁組織（P＜0.05）。

2.3 EGFR19/21 檢查結(jié)果

所有研究對(duì)象經(jīng)過EGFR19/21 檢查后，結(jié)果顯示NSCLC 組織中存在EGFR 絡(luò)氨酸結(jié)合域的基因突變有 21 例（33.33%），其中第 21 外顯子替代突變率38.10%（8/21），第19 外顯子缺失突變率61.90%（13/21）。

2.4 比較不同檢驗(yàn)方式的敏感性及特異度

聯(lián)合檢測(cè)的敏感性及特異度明顯高于單一檢測(cè)（P＜0.05）。見表 1。

表1 比較不同檢驗(yàn)方式的敏感性及特異度

3 討論

近年來，我國(guó)肺癌的患病率及病死率逐年升高，已成為危害人們生命健康的主要疾病，其中NSCLC 的發(fā)生率約占肺癌的80% 左右，且患者五年生存率僅15%，受到醫(yī)療界重點(diǎn)關(guān)注[8-10]。若能夠盡早發(fā)現(xiàn)并及時(shí)對(duì)患者的臨床分期及病理分型進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，可有效指導(dǎo)、調(diào)整患者的臨床治療方案，并為評(píng)估治療結(jié)果提供參考依據(jù)，進(jìn)一步延長(zhǎng)生存周期，因此選擇有效的診斷方式成為關(guān)鍵[11-13]。

隨著影像學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，臨床發(fā)現(xiàn)CT 在NSCLC 診斷中意義較大，其屬于無創(chuàng)性檢查，能夠?qū)颊卟≡钗恢?、范圍及周邊組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行確定，同時(shí)觀察淋巴結(jié)分布圖，并準(zhǔn)確判斷縱膈淋巴結(jié)與腫大肺門位置，從而發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況，在臨床分期判斷上具有重要作用。但單一檢查具有一定局限性，可能增加誤診漏診的風(fēng)險(xiǎn)[14-16]。隨后臨床發(fā)現(xiàn)[17]，肺癌的發(fā)生發(fā)展與多種原癌基因的激活、抑癌基因的失活密切相關(guān)，其中脆性組氨酸三聯(lián)體基因?qū)儆谛屡d抑癌基因，在多類腫瘤中具有重要意義。而Livin 蛋白屬于凋亡抑制蛋白家族中主要成員，在多種腫瘤中具有高表達(dá)狀態(tài)，但在正常組織中存在低表達(dá)或者不表達(dá)狀態(tài)。另外臨床認(rèn)為基因突變對(duì)疾病治療的影響較大，其中EGFR 的基因突可對(duì)EGFR 下游信號(hào)通路的激活程度產(chǎn)生一定影響，從而防止多種腫瘤信號(hào)蛋白上調(diào)，避免腫瘤細(xì)胞發(fā)生增殖及分化現(xiàn)象[18-20]。因此若能夠在CT 檢查基礎(chǔ)上采取EGFR19/21、Livin 蛋白水平檢查效果更好，進(jìn)一步提升檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，但臨床上相關(guān)報(bào)道較少。本文對(duì)此展開研究，結(jié)果顯示：所有研究對(duì)象經(jīng)過CT、EGFR19/21、Livin 蛋白水平檢查后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有54 例患者的分期情況與病理檢驗(yàn)結(jié)果一致，因此CT 檢查的符合率為85.71%（54/63）。其免疫組織化學(xué)陽性信號(hào)主要存在細(xì)胞漿上，并呈現(xiàn)出棕黃色細(xì)顆粒狀，其中NSCLC 組織中Livin 蛋白的陽性表達(dá)率55.56%（35/63），而正常癌旁組織中Livin 蛋白的陽性表達(dá)率4.76%（3/63），因此NSCLC組織中Livin 蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于正常癌旁組織（P＜0.05）。NSCLC 組織中存在 EGFR 絡(luò)氨酸結(jié)合域的基因突變有21 例（33.33%），其中第21 外顯子替代突變率38.10%（8/21），第19 外顯子缺失突變率61.90%（13/21）。聯(lián)合檢測(cè)的敏感性及特異度明顯高于單一檢測(cè)（P＜0.05），提示三者聯(lián)合檢驗(yàn)的敏感性及特異度更高，值得臨床推廣使用。Livin 蛋白主要對(duì)上游及下游半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶進(jìn)行綁定與抑制，從而防止細(xì)胞凋亡，其主要生存在細(xì)胞核內(nèi)，其綁定能夠介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)還可抑制活性半胱氨酸蛋白酶，而BIR 結(jié)構(gòu)域在抗凋亡過程中與caspases 發(fā)揮相互作用。Livin 在正常組織中不表達(dá)或者呈現(xiàn)低表達(dá)，但在多種惡性腫瘤中存在高表達(dá)狀態(tài)，因此利用其在腫瘤組織中的特殊表達(dá)，Livin 可成為診斷腫瘤及預(yù)后評(píng)估的方式之一[21]。而EGFR19/21 屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體家族的主要成員，對(duì)配體的結(jié)合作用可對(duì)AKT/Notch 信號(hào)通路進(jìn)行刺激，從而促進(jìn)下游腫瘤細(xì)胞對(duì)周邊正常組織發(fā)生浸潤(rùn)，提升腫瘤細(xì)胞通過淋巴結(jié)或者血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)性。一旦發(fā)生EGFR19/21 基因突變后，可直接影響EGFR19/21 對(duì)配體結(jié)合的生物學(xué)效應(yīng)，從而引發(fā)EGFR 蛋白的空間結(jié)構(gòu)變化，同時(shí)對(duì)其蛋白的生理功能造成較大影響[22]。另外EGFR19/21 檢驗(yàn)的方式具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高及快速等特點(diǎn)，盡早檢出后及時(shí)給予相關(guān)干預(yù)，可防止疾病進(jìn)展，為預(yù)后提供保障。

綜上所述，CT、EGFR19/21、Livin 蛋白水平檢查運(yùn)用于NSCLC 診斷中均具有較高的應(yīng)用價(jià)值，尤其是聯(lián)合檢測(cè)的敏感性及特異度更高，盡早為病情評(píng)估提供參考依據(jù)，值得臨床推廣使用。