楊美玲，章禮久

(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，安徽 合肥)

0 引言

胃癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來發(fā)病率在惡性腫瘤中位居前列。因其早期癥狀不典型、臨床缺乏其特異性診斷標(biāo)記物，故胃癌的病死率仍居高不下[1]。基于胃癌發(fā)生發(fā)展過程中存在多基因調(diào)控的特點，本文旨在探索胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的分子機制，尋找胃癌新型的診斷標(biāo)志物及高效特異的治療靶點[2]。SEPT 基因廣泛存在于除植物外真核生物中，具有GTP 酶活性，其編碼的蛋白質(zhì)在動物體內(nèi)具有較大的功能分化[3]。SEPT 蛋白廣泛存在于人體中，在細胞分裂、細胞物質(zhì)運輸、細胞周期調(diào)控、T 細胞等發(fā)育方面均發(fā)揮著重要作用[4-11]。研究表明，SEPT9 不僅與細胞周期密切相關(guān)，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、感染性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病聯(lián)系緊密。目前有研究指出SEPT9在結(jié)直腸癌、卵巢癌、肺癌等腫瘤組織中高表達，近年來有研究指出[12-13]，SEPT9 可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程[14-15]。HIF-1 是一種常見的核轉(zhuǎn)錄因子，HIF-1α在調(diào)節(jié)細胞低氧反應(yīng)中至關(guān)重要，其通過調(diào)控多種基因轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的能量代謝及新生血管生成[16-17]。VEGF 是目前已知的強效血管生成因子，可促進內(nèi)皮細胞有絲分裂，促進細胞增殖，也可通過增加血管通透性、內(nèi)皮細胞遷移，促進新生血管生成。本文旨在研究SEPT9 蛋白在胃癌中的表達情況、探索其可能的分子機制，為臨床胃癌提供新的診斷及治療的分子靶點[18-19]。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取安醫(yī)大二附院2015 年至2019 年于普外科行手術(shù)治療患者術(shù)后胃癌組織82 例及其對應(yīng)的癌旁組織。病理診斷由三名醫(yī)師完成。根據(jù)AJCC 第7版胃癌 T NM分期標(biāo)準(zhǔn)：I、II 期標(biāo)本：44 例，Ⅲ期、Ⅳ期標(biāo)本：38 例。腫瘤大小：＜5cm 者：42 例，≥ 5cm 者 40 例；高中分化者：46 例，低分化者：36 例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者：39例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者：43 例。所有納入患者的病歷資料齊全真實，且取材時均于未行任何放化療。

1.2 方法

1）免疫組化染色：將切片經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、過氧化氫孵育及脫脂牛奶封閉后，分別加入SEPTIN9抗體、HIF-1α 抗體、VEGF 抗體，濕盒孵育，4℃過夜。以PBS 代替一抗作陰性對照，二抗采用HRP 標(biāo)記羊抗兔多聚體，經(jīng)DAB 顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封固。2）結(jié)果判定：隨機選取5 個高倍視野，分別在低倍視野 (×40) 觀察，在高倍視野 (×200) 確認，由 3 位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師在未知組織病理特征的情況下進行雙盲閱片，判定結(jié)果。根據(jù)陽性細胞染色強度確定染色結(jié)果：細胞膜和(或)細胞質(zhì)染淡棕色為弱陽性(+)，棕色者為陽性(++)，深棕色為強陽性(+++)。染色陰性或弱陽性為低表達，染色陽性或強陽性為高表達。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

運用統(tǒng)計軟件 SPSS 20.0 對數(shù)據(jù)進行處理。SEPTIN 9、HIF-1α、VEGF 在胃癌及癌旁組織中的陽性表達率和Septin 9 在不同分化程度胃癌組織中高表達率采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 研究結(jié)果

2.1 SEPTIN 9 在胃癌及癌旁組織中的表達情況

表1 SEPTIN 9 在胃癌組織及癌旁組織中的表達情況

在82 例胃癌組織中，陽性表達67 例(81.7%)，陰性表達15 例(18.3%)。82 例癌旁組織中，陽性表達28例(34.1%)，其余54 例(65.9%)為陰性表達。SEPTIN9在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織。

2.2 SEPTIN 9 在胃癌組織中的表達及其與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

表2 SEPTIN 9 在胃癌組織中的表達及其與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

表 2：腫瘤直徑 ＞5cm 胃癌組織中，SEPTIN9 高表達 30 例 (75.00%); ≤ 5cm 胃癌組織中，SEPTIN9 高表達6 例(14.3%)。SEPTIN9 在腫瘤直徑＞5cm 胃癌組織中的高表達率顯著高于腫瘤直徑≤5cm 胃癌組織。同樣，在低分化胃癌組織中SEPTIN9 高表達率顯著高于中高分化組（表達率分別為88.9%、39.1%），在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組織中SEPTIN9 高表達率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組織（表達率分別為：82.00%、50.00%），在TNM 分期為III、IV 期胃癌組織中SEPTIN9 高表達率顯著高于TNM 分期為I、II 期胃癌組織（表達率為89.5%、18.2%），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。（P＜0.05）

2.3 胃癌組織中HIF-1α、VEGF 的表達情況

2.3.1 胃癌組織中HIF-1α 的表達情況

見表三。

表3 胃癌組織中HIF-1α 的表達情況

在82 例胃癌組織中，陽性表達52 例(63.4%)，陰性表達30 例(36.6%)。82 例癌旁組織中，陽性表達26例 (31.7%)，其余 56 例 (68.3%) 為陰性表達。HIF-1α在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織。

2.3.2 胃癌組織中VEGF 的表達情況

表4 胃癌組織中VEGF 的表達情況

在82 例胃癌組織中，陽性表達48 例(58.5%)，陰性表達34 例(41.5%)。82 例癌旁組織中，陽性表達15例 (18。3%)，其余 67 例 (81.7%) 為陰性表達。VEGF在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織。

3 討論

目前全世界范圍內(nèi), 腫瘤已經(jīng)成為致死的主要原因，胃癌是常見的消化系統(tǒng)腫瘤之一，其病死率居高不下。迄今為止，胃癌尚無特異的腫瘤標(biāo)志物，故尋找新型的分子標(biāo)記物對于胃癌的診斷及治療有著重要意義。SEPTIN 基因家族成員龐大，廣泛存在于真核生物中，其編碼的蛋白質(zhì)功能復(fù)雜，參與細胞分裂、囊泡運輸、細胞極化等眾多過程。[20]研究表明SEPTIN家族作為癌癥的重要相關(guān)因子，在人類腫瘤性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。[20]SEPTIN 9 定位于染色17q25.3，研究發(fā)現(xiàn)，Septin9 與卵巢癌、前列腺癌、胃腸道腫瘤、腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，[21]血清Septin 9 基因甲基化水平對于結(jié)直腸癌的診斷及預(yù)后判斷有著重要參考價值。[22]也有報道指出Septin9 可能為潛在的原癌基因，通過調(diào)控其下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展，可能為監(jiān)測癌癥發(fā)生的生物學(xué)標(biāo)記物，并且為癌癥的治療提供潛在的靶點。

本研究發(fā)現(xiàn)，SEPTIN 9 在胃癌組織中的表達顯著高于對應(yīng)的癌旁組織，且表達水平與胃癌腫瘤大小、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期存在顯著相關(guān)性，表明SEPTIN 9 與胃癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移聯(lián)系緊密。學(xué)者發(fā)現(xiàn)，[22-24]SEPT9 是HIF-1α 的重要保護因子，當(dāng)SEPT9 蛋白表達升高，可以通過抑制缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α) 的泛素化降解途徑，促進 HIF-1α 過表達，從而促進細胞增殖及新生血管生成。換言之，SEPT9可通過激活HIF-1α-VEGF 通路，來調(diào)節(jié)腫瘤細胞在微環(huán)境中的增殖。本研究可證實，HIF-1α、VEGF 在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，表明SEPTIN 9可能通過上述機制促進胃癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，SEPT9、HIF-1α、VEGF 在胃癌組織中的表達顯著升高，且SEPT9 表達與患者臨床病理學(xué)特征存在相關(guān)性，其可能通過SEPT9-HIF-1α-VEGF 通路影響胃癌細胞的生物學(xué)行為，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，可用于輔助胃癌的診斷和病情評估，相關(guān)機制需進一步研究證實。