熊厚溪，徐 榮，石海霞，丁 鈴

(畢節(jié)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，貴州 畢節(jié) 551700)

續(xù)斷為川續(xù)斷科草本植物川續(xù)斷(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根，味苦、辛，微溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷、止崩漏的功效，常用于治療肝腎不足、腰膝酸軟、風(fēng)濕痹痛、跌撲損傷、崩漏等[1]。續(xù)斷為川產(chǎn)道地藥材之一，貴州主產(chǎn)于畢節(jié)、興義、安順、貴陽(yáng)、遵義等地。主要生于草叢、路旁、溝邊、林緣礦地等潮濕處，野生資源豐富[2]。近10年，市場(chǎng)需求量逐漸增加，野生資源日漸減少。但就目前而言，續(xù)斷的種植面積較少，研究基礎(chǔ)薄弱，來(lái)源主要依靠于野生資源。目前，有關(guān)續(xù)斷的研究主要集中在炮制、化學(xué)成分、藥理作用等方面[3-12]，關(guān)于不同生境和不同生長(zhǎng)年限的相關(guān)研究較少。筆者通過(guò)對(duì)續(xù)斷的不同生境、不同生長(zhǎng)年限進(jìn)行采樣，測(cè)定續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量，綜合分析續(xù)斷的適宜生長(zhǎng)環(huán)境和采收時(shí)間，為續(xù)斷資源的合理種植和采收提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣方設(shè)置與樣品采集

1.1.1 野生樣品 在前期完成續(xù)斷群落調(diào)查基礎(chǔ)上，2018年8月15日于貴州織金縣少普鄉(xiāng)喇叭河村(位于東經(jīng)105°35′45.73″～105°38′5″，北緯26°33′25″～26°34′15″，海拔1 670～1 840 m)的自然分布區(qū)設(shè)定樣方，每個(gè)樣方面積2～4 m2，通過(guò)記錄樣方內(nèi)的續(xù)斷植株、多度、蓋度等，評(píng)估重要值劃分樣方中續(xù)斷的生境，采集樣方中的全部續(xù)斷植株，帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 栽培樣品 選取畢節(jié)市遠(yuǎn)程民族研究所續(xù)斷種植基地作為研究對(duì)象，基地位于貴州省七星關(guān)區(qū)朱昌鎮(zhèn)(位于東經(jīng)105°18′57.18″，北緯27°10′37.48″，海拔1 614 m)隨機(jī)挖取一年生、二年生、多年生續(xù)斷植株各5株，帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.1.3 鑒定 所采樣品均經(jīng)過(guò)畢節(jié)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中藥教研室熊厚溪鑒定為川續(xù)斷科川續(xù)斷(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根。將所有續(xù)斷樣本先清洗干凈，用烘箱(約50℃)烘至半干，再發(fā)汗，當(dāng)藥材斷面變綠后，取出，烘干，再粉碎，用于續(xù)斷藥材中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量測(cè)定。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 高效液相色譜儀(LC-20AD，日本島津)、電子分析天平(EL104，梅特勒-托利多儀器有限公司)、超聲波清洗器(SK8210HP，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)、電熱鼓風(fēng)干燥箱(101-1AB，天津市泰斯特儀器有限公司)等。

1.2.2 試劑 甲醇(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、乙腈(色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)、川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品(批號(hào)：111685-201506，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。

1.3 測(cè)定方法

參照2015版《中國(guó)藥典》一部續(xù)斷藥材“含量測(cè)定”項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定[1]。

1.3.1 色譜條件與適應(yīng)性 色譜柱：C18(5 μm 4.6×250 mm S/N 4K9705-07)。流動(dòng)相：流動(dòng)相A，水；流動(dòng)相B，乙腈；乙腈與水比例為30∶70。檢測(cè)條件：檢測(cè)波長(zhǎng)212 nm，柱溫30℃，流速1 mL/min。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取適量川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品，精密稱定，置容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成含川續(xù)斷皂苷Ⅵ0.153 7 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備 取續(xù)斷粉末約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.3.4 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，根據(jù)外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算各組分含量。測(cè)得續(xù)斷樣品共計(jì)40份。將各樣品峰面積帶入下式計(jì)算，得樣品川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量。

W=AXCRX×2/ARW×1 000×100%

式中，W為川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量；Ax為供試品峰面積；CR為對(duì)照品濃度；AR為對(duì)照品峰面積；X為稀釋因數(shù)，W為樣品重。

1.4 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用SPSS 22.0軟件對(duì)不同生境、不同生長(zhǎng)年限續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 續(xù)斷群落生境類(lèi)型

通過(guò)對(duì)樣方中喬木、灌木、草本植物的數(shù)量進(jìn)行評(píng)估，將續(xù)斷生境劃分為5種：?jiǎn)棠玖稚?、灌木叢生境、雜草叢生境、林緣礦地生境、退耕地。喬木林生境是以喬木為主的植被類(lèi)型，植株高大，群落郁閉度大，土層厚、濕潤(rùn)，樣方中續(xù)斷生長(zhǎng)茂盛，葉片大。灌木林生境是以灌木為主體的植被類(lèi)型，植株一般高在5 m以下。雜草叢生境一般灌木較少，多見(jiàn)草本類(lèi)植物，一般以禾本科、毛茛科、玄參科及蕨類(lèi)植物等為主。林緣礦地生境中植株多生長(zhǎng)在路邊、田坎等地，一般土層薄、貧瘠，續(xù)斷葉片枯綠、小。退耕地前幾年以種植農(nóng)作物為主，現(xiàn)土地荒廢，生境中也有續(xù)斷植株生長(zhǎng)，多伴生草本類(lèi)植株，一般以菊科植物為主。

2.2 不同生境下續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量

由表1可見(jiàn)，川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量為0.352 3%～1.1651%，平均為0.733 9%。其中，川續(xù)斷皂苷Ⅵ在林緣礦地生境中的含量最高，為1.165 1%；在退耕地生境中的含量最低，僅0.352 3%；退耕地和喬木林生境中含量無(wú)顯著差異，雜草叢和喬木林、灌木叢生境中無(wú)顯著差異。

表1 不同生境下續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的多重比較

注：同列小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同。2.3不同生長(zhǎng)年限續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量

由表2可見(jiàn)，二年生續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量最高，為1.408 1%；其次為多年生續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，為1.1694%；一年生續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量最低，僅0.640 9%，而二年生和多年生續(xù)斷根中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量無(wú)顯著差異。

表2 不同年限續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的多重比較

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)探討了不同生境環(huán)境下續(xù)斷植株中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量分布情況，同時(shí)探討了不同生長(zhǎng)年限的續(xù)斷植株中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量變化。在5種生境下，續(xù)斷植株在多個(gè)生境中的川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量有明顯差異，林緣礦地生境>灌木叢生境>雜草叢生境>喬木林生境>退耕地。其中在林緣礦地生境和退耕地生境中相差3倍，表明川續(xù)斷皂苷Ⅵ在續(xù)斷植株生境中具有選擇性。林緣礦地生境具有很好的光照，可以為續(xù)斷葉片提供很好的光合作用，同時(shí)林緣礦地續(xù)斷植株生長(zhǎng)環(huán)境中土層薄、土壤貧瘠，續(xù)斷植株只有不斷制造次數(shù)代謝產(chǎn)物來(lái)對(duì)抗惡劣的環(huán)境。

從續(xù)斷生長(zhǎng)年限中川續(xù)斷皂苷Ⅵ結(jié)果分析來(lái)看，一年生與兩年以上植株具有顯著性差異，而川續(xù)斷皂苷Ⅵ作為續(xù)斷的次生代謝產(chǎn)物，受生長(zhǎng)年限影響較大。一年生續(xù)斷植株未抽薹，地下部分生長(zhǎng)較緩慢，次生代謝產(chǎn)物累計(jì)較少；二年生續(xù)斷植株中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量顯著高于一年生植株，而與三年及以上生植株無(wú)顯著差異。故建議種植續(xù)斷藥材采收時(shí)間以兩年以上為宜，并結(jié)合產(chǎn)量進(jìn)行綜合考慮。