王文欣 劉永

摘要：目的：觀察復(fù)合應(yīng)激因素刺激對(duì)大鼠行為學(xué)改變的影響，對(duì)CFS動(dòng)物模型的制作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：運(yùn)用情志刺激與過度勞累相結(jié)合的復(fù)合應(yīng)激因素，觀察大鼠在接受刺激后懸掛不動(dòng)和力竭游泳時(shí)間的變化。結(jié)果：造模后大鼠懸掛不動(dòng)時(shí)間明顯增加、力竭游泳時(shí)間明顯減少。結(jié)論：復(fù)合應(yīng)激因素刺激使大鼠體力明顯下降，產(chǎn)生了類似CFS的臨床癥狀。

關(guān)鍵詞：復(fù)合應(yīng)激;大鼠;行為學(xué)能力

慢性疲勞綜合征（Chronic fatigue syndrome，CFS）是人群亞健康的主要表現(xiàn)形式之一，于1988年由美國疾病控制與預(yù)防中心正式確定病名及診斷標(biāo)準(zhǔn)。隨著社會(huì)高速發(fā)展，在快節(jié)奏生活、高壓力工作環(huán)境中，以慢性疲勞為主訴的患者日益增多，CFS已成為當(dāng)今威脅人類健康的重大問題，成為國內(nèi)外醫(yī)者關(guān)注和研究的熱點(diǎn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作為研究CFS的重要途徑，模型制備成功與否對(duì)研究有重大影響。本研究應(yīng)用情志刺激與過度勞累相結(jié)合的復(fù)合應(yīng)激刺激，制作慢性疲勞大鼠模型，并觀察大鼠行為學(xué)的改變，為CFS的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康清潔級(jí)（Ⅱ）雄性Wistar大鼠20只，體重（160±10）g。標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，室溫15～25℃，相對(duì)濕度45%～60%，自由攝食、飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材

硬塑料束縛筒：管狀，長20cm，筒口外徑6cm，內(nèi)徑5.3cm，筒內(nèi)前端置一直徑略小于筒的內(nèi)徑、并可以前后調(diào)節(jié)的無底、圓嘴玻璃瓶，其瓶口為通氣口（距離筒口5cm左右），后端為可開關(guān)閘門。

游泳箱：規(guī)格為185cm×58cm×70cm。

秒表，溫度計(jì)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組方法

20只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為正常組和模型組，每組10只。

2.2 造模方法

采用慢性束縛加強(qiáng)制冷水游泳的復(fù)合應(yīng)激因素刺激制作模型。規(guī)定單號(hào)日期進(jìn)行束縛，雙號(hào)日期進(jìn)行冷水游泳，造模時(shí)間為4周。在造模的整個(gè)過程中，正常組大鼠處于同一環(huán)境中，但不予以進(jìn)食和飲水。

（1）慢性束縛：造模期間，模型組隔日束縛一次，每天束縛時(shí)間不同，隨機(jī)確定。束縛時(shí)，使大鼠鉆進(jìn)束縛筒內(nèi)，并調(diào)節(jié)到不產(chǎn)生強(qiáng)烈反抗的緊張程度，限制其活動(dòng)，1h后取出放回籠中。

（2）強(qiáng)制冷水游泳：隔日令模型組大鼠在不同時(shí)間于冷水（水中置溫度計(jì)，視水溫變化調(diào)節(jié)放入冰塊的數(shù)量，使水溫維持在12℃左右）中游泳，期間防止大鼠團(tuán)抱自救或因力竭沉人水中。每次一組，游泳持續(xù)7分鐘，然后將動(dòng)物撈出，用布擦拭、吹風(fēng)機(jī)吹干皮毛后放回籠中。

2.3 指標(biāo)測定

（1）一般情況觀察

造模期間，每天觀察大鼠的飲水量、進(jìn)食量、體重、糞便、鼠毛色澤、爬行動(dòng)作及對(duì)外界刺激敏感度等情況。

（2）鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)在造模結(jié)束后第2天進(jìn)行。使大鼠呈倒掛狀，大鼠為克服不正常的體位而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一定時(shí)間后，出現(xiàn)間斷性“不動(dòng)”，顯示“失望”狀態(tài)。觀察5min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間（大鼠處于完全靜止不動(dòng)狀態(tài)的總時(shí)間）。

（3）力竭游泳實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)在造模結(jié)束后第2天進(jìn)行。游泳時(shí)水深為5Ocm，水溫為室溫。將事先標(biāo)記好的大鼠同時(shí)置入游泳池，記錄大鼠從入水到游泳至力竭（頭部沉入水中10秒中不能浮出水面為力竭標(biāo)準(zhǔn)）的時(shí)間。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，各組數(shù)據(jù)均以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）”的形式表示，采用單因素方差分析法進(jìn)行組間比較。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 一般情況觀察

造模前，各組大鼠的飲水量、進(jìn)食量、體重、大鼠糞便、皮毛色澤、瞇眼等均無明顯差異。隨著造模時(shí)間的推移，正常組大鼠神態(tài)安靜，時(shí)而活潑好動(dòng)，皮毛光潔整齊，眼睛有神，體重正常增長;模型組大鼠飲水量、進(jìn)食量略有減少，體型瘦弱，體重增加不明顯，精神倦怠，皮毛失去光澤、稀疏，眼神黯淡無光，活動(dòng)減少，瞇眼明顯，糞便稀，愛扎堆，反應(yīng)力降低。

4.2 鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn)時(shí)間測定

結(jié)果顯示：模型組大鼠懸尾后不動(dòng)時(shí)間明顯長于正常組，具有顯著差異（P<0.05），表明復(fù)合應(yīng)激因素刺激導(dǎo)致大鼠體力明顯下降，有“抑郁”情緒傾向，具有軀體和心理疲勞。

4.3 力竭游泳實(shí)驗(yàn)測定

結(jié)果顯示，模型組大鼠游泳至力竭的時(shí)間低于正常組，具有極顯著差異，表明復(fù)合應(yīng)激因素刺激導(dǎo)致大鼠體力明顯下降，力竭游泳時(shí)間明顯減少，具有軀體疲勞。

5 討論

本研究通過慢性束縛和冷水游泳相結(jié)合的方法建立CFS模型，模仿人類因長期心理應(yīng)激和軀體應(yīng)激而誘發(fā)產(chǎn)生的煩躁、絕望以及免疫功能低下等CFS癥狀。在實(shí)驗(yàn)中，大鼠在束縛筒中所產(chǎn)生的煩躁、絕望等狀態(tài)與人類抑郁、心理壓力增大等精神狀態(tài)很相似。同時(shí)，根據(jù)大鼠游泳喜歡溫水的習(xí)慣，選擇冷水游泳，既是對(duì)大鼠體力的巨大消耗，也對(duì)大鼠精神狀態(tài)造成一定壓力。造模結(jié)束后，模型組大鼠身體消瘦，體重增加不明顯，反映雙重刺激引起大鼠產(chǎn)生CFS的相應(yīng)癥狀，導(dǎo)致大鼠體力和精神狀態(tài)下降。我們還選擇了比較經(jīng)典的鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn)和力竭游泳實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)其行為學(xué)能力。通過測定發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠懸掛不動(dòng)時(shí)間明顯增加、力竭游泳時(shí)間明顯減少，說明復(fù)合應(yīng)激因素刺激使大鼠體力明顯下降，其表現(xiàn)出的與人類CFS類似的“抑郁”、“失望”情緒明顯增加。

綜上所述，本研究中的慢性復(fù)合刺激所引起的體力和精神損害與臨床的CFS癥狀相似，故認(rèn)為本模型是可行的。

參考文獻(xiàn)：

[1] Holmes GP，，Kaplan JE，，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：a working case definition[J].Ann Intern Med，1988（10）.

[2] 王天芳，劉雁峰，楊維益，等.消疲怡神口服液治療慢性疲勞綜合征的臨床研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1999（04）.