侯 影 張 旭

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，遼寧 沈陽 110032)

木香為菊科植物木香的干燥根，圓柱形或平圓柱形，味辛、苦，性溫，入三焦、脾、胃、膽、大腸經(jīng)。木香乃三焦氣分之藥,是治療胃腸道疾病的常用藥，其生品行氣，止痛，健脾，消食，主要用于脾胃氣滯，胸脅，脘腹脹痛，食積，消化不良，食欲不振等，而煨制木香則可實(shí)腸止瀉，臨床多用于泄瀉腹痛、瀉痢里急后重等[1]。隨著現(xiàn)代人飲食結(jié)構(gòu)的改變，加之社會生活節(jié)奏加快、工作壓力加重，胃腸道疾病的發(fā)病率逐年增高，已對人們正常的工作、生活造成嚴(yán)重影響[2]。乙酰膽堿(ACh)為胃腸道動力的興奮性遞質(zhì)，具有促進(jìn)胃腸道運(yùn)動、加快胃腸道排空的作用。一氧化氮(NO)廣泛分布于胃腸道，是一種抑制性遞質(zhì)，與多種胃腸道疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。兩者的動態(tài)平衡對維持正常的胃腸功能具有重要意義[3]。為進(jìn)一步探討木香治療胃腸道疾病的作用機(jī)制，我們擬通過對木香生品、麩煨品對脾虛模型大鼠血清乙酰膽堿酯酶(AChE)、一氧化氮(NO)及離體十二指腸收縮功能的影響進(jìn)行研究，以期為臨床用藥提供客觀依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 雄性SD大鼠92只，體質(zhì)量(210±20)g，周齡(6±3)周，均由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號:SCXK(遼)2018-0003。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑

1.2.1 木香 木香購自云南省西雙版納傣族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院翟延君教授鑒定為菊科植物木香的干燥根。木香麩煨品的制備；按照100 kg木香飲片加入30 kg麥麩，110～120 ℃煨制10 min即可。然后取木香生品、麩煨品各50 g,粉碎成細(xì)粉，分別倒入大燒杯中，加入300 mL蒸餾水浸泡1 h，加熱沸騰30 min后過濾。剩余藥物再加200 mL蒸餾水煎煮，再加熱沸騰20 min后過濾，合并2次濾液，水浴加熱濃縮為1.0 g/mL。冷卻后再分別將木香生品濾液、麩煨品濾液加水調(diào)制成生藥含量1.0、0.5、0.25 g/mL濃度的藥液。

1.2.2 其他 枸櫞酸莫沙必利分散片(成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20031110，批號100802)；利血平注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H12020905，批號1007013)；AChE檢測試劑盒、NO檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所有限公司)；臺氏液(按照文獻(xiàn)[4]中方法配制)。

1.3 主要儀器 Sunrise酶標(biāo)儀(瑞士TECAN公司)；UV-1800紫外可見分光光度計(jì)[北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))有限責(zé)任公司]；LMS-2A型二道生理記錄儀(成都儀器廠)；YSD-4型藥理生理實(shí)驗(yàn)多用儀、恒溫電熱器、肌肉張力換能器(蚌埠市無線電二廠)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；TGL-16C型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 模型制備及分組 將92只大鼠在室溫25 ℃，相對濕度50%～70%，常規(guī)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，期間可以自由飲水、攝食。然后將92只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、莫沙必利對照組、木香生品高劑量組、木香生品中劑量組、木香生品低劑量組、木香麩煨品高劑量組、木香麩煨品中劑量組及木香麩煨品低劑量組，每組10只，模型對照組12只。除正常對照組外，其余各組大鼠均予利血平注射液0.50 mg/(kg·d)腹腔注射建立脾虛模型[5]，正常對照組大鼠予0.9%氯化鈉注射液0.5 mg/(kg·d)腹腔注射，共注射14 d。

1.4.2 灌胃給藥 各組大鼠(模型對照組取其中10只)在腹腔注射造模的同時(shí)予灌胃給藥。木香生品高、中、低劑量組和木香麩煨品高、中、低劑量組分別按照7.00、3.50、1.75 g/(kg·d)的濃度予相應(yīng)藥液灌胃，莫沙必利對照組按照0.35 mg/(kg·d)予枸櫞酸莫沙必利分散片藥液灌胃，正常對照組及模型對照組分別予0.9%氯化鈉注射液7.00 mg/(kg·d)灌胃，共連續(xù)灌胃14 d。

1.5 觀察指標(biāo)及方法

1.5.1 血樣采集及處理 各組大鼠灌胃14 d后禁食不禁水12 h，然后通過眼眶靜脈叢采血2 mL，于室溫靜置1 h，再以3 500 r/min離心15 min，收集上清液，將血清標(biāo)本放于-20 ℃保存。

1.5.2 血清NO測定 采用化學(xué)比色法檢測各組大鼠血清NO含量。具體操作如下：雙蒸餾水0.1 mL加入空白管，標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(100 μmol/L)0.1 mL加入標(biāo)準(zhǔn)管，血清樣本0.1 mL加入測定管，各管分別加入混合試劑0.4 mL，混勻，37 ℃水浴60 min，分別加入試劑三0.2 mL、試劑四0.1 mL(詳見說明書)，充分混勻30 s，室溫下靜置40 min，以3 500 r/min離心10 min，取0.5 mL上清液，再各加入0.6 mL顯色劑，混勻，靜置10 min，使用蒸餾水調(diào)整零度。波長550 nm、0.5 cm光徑，測定各組光密度(OD)值，并計(jì)算NO含量。計(jì)算公式：NO含量=[(測定管OD值-空白管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)]×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×樣品測試前稀釋倍數(shù)。

1.5.3 血清AChE測定 采用化學(xué)比色法檢測各組大鼠血清AChE含量。具體操作如下：測定管加入血清樣本0.05 mL、8 μmol/L ACh應(yīng)用液0.25 mL，對照管加入蒸餾水0.05 mL、8 μmol/L ACh應(yīng)用液0.25 mL，空白管加入蒸餾水0.30 mL，3個(gè)管再分別加入試劑一0.5 mL，混合均勻，37 ℃水浴靜置20 min，然后依次加入試劑三應(yīng)用液1.0 mL、試劑四0.5 mL、試劑五0.25 mL、試劑六0.5 mL(詳見說明書)，混勻，以3 000 r/min離心10 min，取上清，空白調(diào)整零度。波長520 nm，1 cm光徑測定各試管OD值，并計(jì)算血清AChE含量。計(jì)算公式：AChE含量=[(對照管OD值-測定管OD值)/對照管OD值]×[標(biāo)準(zhǔn)品濃度/8 μmol/L]×[1/取樣量]。

1.5.4 離體十二指腸收縮情況 將模型對照組剩余2只大鼠采用脫頸法處死，解剖后將十二指腸取出，剝離腸系膜，置于盛有臺氏液的培養(yǎng)皿中，并用臺氏液將腸內(nèi)容物沖洗干凈，然后用手術(shù)剪將腸管剪成數(shù)小段，每段約2 cm，放入離體腸管活動生理記錄裝置中，一端系于肌肉張力換能器上，另一端系于吊鉤上,懸掛于恒溫水浴鍋內(nèi)。通入混合氣體(5%二氧化碳與95%氧氣)，控制水浴恒溫(37±0.5)℃，首先加入20 mL臺氏液，待腸管的收縮運(yùn)動狀況穩(wěn)定后，記錄其收縮曲線，并計(jì)算平均振幅。然后依次加入木香生品和木香麩煨品高、中、低密度(1.0、0.5、0.25 g/mL)藥液，每個(gè)濃度加藥50 μL,給藥后觀察5 min，分別記錄每組胸管的收縮曲線。每次觀察完畢后用生化液沖洗腸管3次，待腸管恢復(fù)收縮后再進(jìn)行下一種藥物實(shí)驗(yàn)。以給藥前腸管的平均振幅為標(biāo)準(zhǔn)，給藥后各組收縮振幅與其相比得到相對收縮振幅，進(jìn)行比較。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠灌胃后血清NO含量比較 見表1。

由表1可見，與正常對照組比較，模型對照組灌胃后血清NO含量明顯升高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較，僅莫沙必利對照組灌胃后血清NO含量明顯下降，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，木香生品和木香麩煨品高、中、低劑量組與模型對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組 別nNO正常對照組1030.06±3.20模型對照組1035.26±5.24?莫沙必利對照組1022.84±2.57△木香生品高劑量組1034.86±9.82木香生品中劑量組1033.49±4.89木香生品低劑量組1032.42±6.51木香麩煨品高劑量組1026.51±4.38木香麩煨品中劑量組1029.94±6.13木香麩煨品低劑量組1033.86±12.91

與正常對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，△P<0.05

2.2 各組大鼠灌胃后血清AChE含量比較 見表2。

組 別nAChE正常對照組10128.09±40.92模型對照組1088.89±10.20?莫沙必利對照組10126.84±11.83△木香生品高劑量組10118.13±24.54△木香生品中劑量組10109.56±21.31△木香生品低劑量組10105.96±21.16木香麩煨品高劑量組1085.42±39.26木香麩煨品中劑量組10113.60±36.14木香麩煨品低劑量組10110.04±32.73

與正常對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，△P<0.05

由表2可見，與正常對照組比較，模型對照組灌胃后血清AChE含量明顯下降，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較，莫沙必利對照組、木香生品高劑量組和木香生品中劑量組灌胃后血清AChE含量明顯升高，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但木香生品低劑量組和木香麩煨品高劑量組、木香麩煨品中劑量組、木香麩煨品低劑量組與模型對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 各組大鼠離體十二指腸相對收縮振幅比較 見表3。

組 別n相對收縮振幅模型對照組2100.0±11.6木香生品高劑量組2130.0±10.5?木香生品中劑量組2125.0±17.0木香生品低劑量組2119.0±15.1木香麩煨品高劑量組2123.0±18.1木香麩煨品中劑量組2120.0±9.7木香麩煨品低劑量組2115.0±10.1

與模型對照組比較，*P<0.05

由表3可見，與模型對照組比較，木香生品高劑量組大鼠離體十二指腸相對收縮振幅明顯增強(qiáng)，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。木香生品中劑量組、木香生品低劑量組和木香麩煨品高劑量組、木香麩煨品中劑量組、木香麩煨品低劑量組大鼠離體十二指腸相對收縮振幅與模型對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

胃腸道運(yùn)動是消化系統(tǒng)最基礎(chǔ)的生理功能，其調(diào)節(jié)機(jī)制主要包括腸神經(jīng)系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)調(diào)節(jié)和胃腸激素的體液調(diào)節(jié)[6]。胃腸動力障礙性疾病是臨床常見的胃腸道疾病，主要包括功能性消化不良、胃食管反流、腸易激綜合征、慢性便秘等，主要表現(xiàn)腹脹、腹痛、惡心、嘔吐、腹瀉、便秘等[7]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，胃腸動力障礙的發(fā)生與神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂、免疫因素、胃腸激素、胃腸道炎癥、內(nèi)臟高敏感狀態(tài)等多種因素相關(guān)，臨床多以對癥治療為主[8]。NO屬于細(xì)胞外信息分子，廣泛分布于胃腸道，是胃腸道中一種新型的生物信息抑制性遞質(zhì)，與胃腸道生理、病理活動具有密切關(guān)系，此外對神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)也具有調(diào)節(jié)作用[9-10]。在一氧化氮合酶(NOS)的作用下，體內(nèi)多種細(xì)胞均可以生成NO，效應(yīng)細(xì)胞在NO及其他相關(guān)信號分子的作用下，可促進(jìn)環(huán)磷鳥嘌呤核苷(cGMP)及環(huán)磷酸腺苷(cAMP)濃度升高，產(chǎn)生超極化作用的平滑肌細(xì)胞，進(jìn)而減少鈣離子的內(nèi)流，增加鈣離子在肌質(zhì)網(wǎng)的攝取,起到舒張消化道平滑肌的作用，另外NO還可直接作用于肌細(xì)胞抑制胃動素及ACh的釋放，松弛平滑肌，減弱胃腸蠕動，且對胃腸移行性復(fù)合運(yùn)動也有抑制作用[11-13]。ACh是一種神經(jīng)遞質(zhì)，主要存在于膽堿能神經(jīng)末梢突觸間隙，運(yùn)動神經(jīng)終板突觸后膜的皺褶中聚集較多，能特異性地作用于各類膽堿受體，可與胃腸道平滑肌表面的M受體結(jié)合，引起胃腸道平滑肌收縮，從而促進(jìn)胃及十二指腸運(yùn)動，加快胃排空[14-15]。AChE是ACh的水解酶，可在膽堿能突觸間對ACh進(jìn)行降解，進(jìn)而終止神經(jīng)遞質(zhì)對突觸后膜的興奮作用，避免受體細(xì)胞膜持續(xù)去極化而造成的傳導(dǎo)阻滯，保證神經(jīng)信號傳遞，臨床上常通過檢測AChE水平變化來反映ACh水平變化情況，其含量與ACh呈正相關(guān)[16-17]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，胃腸動力障礙性疾病屬脾胃病范疇，基本病機(jī)為脾胃失調(diào)，氣機(jī)失常，采用相應(yīng)的中醫(yī)藥治療療效確切，具有副作用小、選擇面廣等優(yōu)點(diǎn)[18]。木香是臨床常用的傳統(tǒng)中藥材，具有行氣止痛、調(diào)中導(dǎo)滯、健脾消食的功效，《本草綱目》言其“主心腹一切滯氣。和胃氣,泄肺氣,行肝氣。凡氣郁而不舒者,宜用之”?，F(xiàn)代藥理研究表明，木香對胃腸道運(yùn)動具有興奮和抑制的雙向調(diào)節(jié)作用，不同的給藥劑量、不同的提取部位都可產(chǎn)生不同的藥理作用，在某一劑量范圍內(nèi)能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動物的胃腸運(yùn)動，另一劑量范圍又會產(chǎn)生抑制胃腸運(yùn)動的作用[19]。脾虛證是指脾氣虛損引起的一系列脾胃功能失常的表現(xiàn)。相關(guān)研究表明，脾虛模型動物的胃腸道運(yùn)動明顯減弱[20]，因此我們通過建立脾虛模型進(jìn)一步研究木香生品和麩煨品對胃腸運(yùn)動的影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型對照組造模后血清NO含量較正常對照組明顯升高(P<0.05)，AChE含量明顯降低(P<0.05)，表明脾虛大鼠的胃腸活動功能受到抑制，胃腸活動明顯減弱。與模型對照組比較，陽性藥物莫沙必利對照組大鼠血清NO含量明顯下降(P<0.05)，AChE含量明顯升高(P<0.05)，而木香生品和麩煨品高、中、低劑量各組中僅木香生品高、中劑量組血清AChE含量明顯升高(P<0.05)，提示木香生品高、中劑量組對胃腸運(yùn)動有興奮作用。

研究表明，胃腸道的平滑肌具有自動節(jié)律性收縮的功能，但作用不規(guī)則且收縮緩慢。正常的胃腸道運(yùn)動還需要受到外來神經(jīng)和內(nèi)在神經(jīng)系統(tǒng)的共同支配，這些神經(jīng)系統(tǒng)對控制胃腸道運(yùn)動具有關(guān)鍵性作用[21]。外來神經(jīng)主要為交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)，內(nèi)在神經(jīng)主要為黏膜下神經(jīng)叢和肋間神經(jīng)叢，各個(gè)系統(tǒng)相互關(guān)聯(lián)、相互聯(lián)系，進(jìn)而共同調(diào)節(jié)胃腸道平滑肌的腺體分泌和運(yùn)動[22]。在適宜的條件下，即使已經(jīng)脫離外來神經(jīng)的支配，離體腸管仍然具有壁內(nèi)神經(jīng)叢及平滑肌收縮的作用，溫度、化學(xué)物質(zhì)、牽張刺激等均可對其運(yùn)動產(chǎn)生影響，可以很好地反映出不同藥物對離體腸管的直接作用[23]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對照組比較，木香生品高劑量組離體腸管的相對收縮振幅明顯更高(P<0.05)，說明高劑量木香生品可促進(jìn)離體腸管收縮，其余各組也有升高趨勢，但比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

綜上所述，木香對胃腸運(yùn)動具有興奮作用，可明顯促進(jìn)胃腸道運(yùn)動，其中以木香生品高劑量組的效果最明顯，這也是木香理氣作用的體現(xiàn)，其作用機(jī)制可能與升高ACh水平有關(guān)，但對NO作用不明顯，為木香臨床的合理應(yīng)用提供了參考。