趙芳麗

（蘇州市吳江區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，江蘇 蘇州 215200）

苦黃注射液源于張仲景《傷寒論》的“茵陳蒿湯”，通過去梔子，加苦參、柴胡和大青葉改良得到，它是公認的治療濕熱黃疸名方，能清熱利濕，疏肝退黃，主治濕熱型黃疸，臨床上適用于因濕熱內(nèi)運而引起的黃疸型病毒性肝炎患者的退黃。現(xiàn)代藥理學研究表明苦黃注射液具有退黃降酶、利膽保肝作用，并進行了相關(guān)的臨床試驗[1-5]。

然而，由于該方成分復(fù)雜、分析難度大，目前對其化學物質(zhì)基礎(chǔ)和保肝作用機理的研究尚不完全，因此本研究旨在運用網(wǎng)絡(luò)藥理學方法，初步闡述苦黃注射液的保肝作用機理。

1 方法

1.1 提取病毒性肝炎疾病相關(guān)基因

以“viral hepatitis”為關(guān)鍵詞，利用Gene數(shù)據(jù)庫查找病毒性肝炎的相關(guān)基因，并將所得到的基因限定為人源性，以方便后續(xù)研究。將所有檢索到的靶點整合，并去除重復(fù)的基因，作為病毒性肝炎的靶標庫。

1.2 苦黃注射液分子數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建

通過中藥藥理學數(shù)據(jù)庫查詢和大量的文獻挖掘，收集苦黃注射液中五味藥苦參、大黃、茵陳、柴胡、大青葉的不同化合物。

通過PubChem數(shù)據(jù)庫查找苦黃注射液各藥的不同成分相關(guān)分子信息及生物學測試。

1.3 苦黃注射液成分-靶標的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

采用Cytoscape軟件建立多成分-多靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)模型，該網(wǎng)絡(luò)包括活性成分、靶點和疾病三類節(jié)點。

1.4 苦黃注射液靶點關(guān)系分析

通過建立疾病-基因-活性成分連接構(gòu)建完整的復(fù)方網(wǎng)絡(luò)圖，分析苦黃注射液方各味藥活性成分的多靶點作用及其潛在的治療作用。

2 結(jié) 果

2.1 病毒性肝炎相關(guān)基因的信息分析

通過檢索Gene數(shù)據(jù)庫，得到病毒性肝炎相關(guān)基因870個，其中人源性（Human）共597個（截至2019年3月15日）。

2.2 苦黃注射液方主要活性成分及代表成分的篩選

通過中藥藥理學數(shù)據(jù)庫分別檢索苦黃注射液五味藥，選取口服利用度OB≥30%和類藥性DL≥0.1均符合的化合物作為其活性成分，篩選得苦黃注射液近百余種化學成分。其中，大黃主要化學成分是大黃蒽醌類成分及其衍生物，如大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素；苦參主要化學成分是生物堿類成分和黃酮類成分，如木犀草素、槐定堿；茵陳主要有香豆素類、色原酮類、黃酮類等，如槲皮素、茵陳色原酮；柴胡主要化學成分為皂苷類成分，如山柰酚、異甘草素、異鼠李素；大青葉中靛藍和靛玉紅是其主要藥效成分。

選取有關(guān)的保肝利肝活性及疾病靶點連接度高的17個活性成分作為苦黃注射液的代表成分進一步分析，詳細的化合物信息見表1所示。

表1 苦黃注射液中17個代表性成分信息

2.3 苦黃注射液抗病毒性肝炎疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

通過文獻及數(shù)據(jù)庫檢索挖掘（2019年4月20日），并比對病毒性肝炎疾病靶標庫，得出苦黃注射液活性成分對病毒性肝炎的86個靶點有調(diào)控作用（見圖1）。

2.4 苦黃注射液成分-靶點網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將篩選出的17個苦黃注射液代表性成分與其對應(yīng)的70個靶點，通過軟件建立“成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)，以期揭示復(fù)方協(xié)同配伍機制。

圖1 病毒性肝炎疾病網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 苦黃注射液成分-靶點網(wǎng)絡(luò)分析

構(gòu)建的網(wǎng)絡(luò)圖見圖2，該圖包含了87個節(jié)點：菱形節(jié)點代表苦黃注射液的17個代表性成分；圓形節(jié)點代表肝炎靶點，圓形越大代表與這個靶點相關(guān)的代表性化合物越多。圖中包括149條邊，表明共有149對化合物-靶標對信息。

圖2 苦黃注射液“成分-靶標”網(wǎng)絡(luò)圖

以其中的COX-2（環(huán)氧合酶）和細胞腫瘤抗原p53為例，COX（環(huán)氧合酶）是一類含血紅素的糖蛋白，是花生四烯酸（AA）轉(zhuǎn)化為前列腺素（PGs）的關(guān)鍵酶。一般認為，COX-2來源的PGs在炎癥和細胞增殖方面發(fā)揮了重要作用。近年來，在肝硬化動物模型及肝硬化患者的肝組織中COX-2的表達是明顯升高的。COX-2在炎癥因子和/或細胞因子的刺激下大量表達，其中COX-2在肝病特別是內(nèi)毒素LPS損傷性肝病、酒精性肝病和肝細胞癌中可能起到重要作用。許多刺激物，如生長因子、細菌脂多糖及炎性細胞因子等可刺激細胞的COX-2表達，而抗炎細胞因子及糖皮質(zhì)激素則可抑制COX-2的產(chǎn)生。COX-2的局部表達增加與炎癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)作等有關(guān)。研究證實，用乙醇灌胃制備的大鼠酒精性肝病模型中表現(xiàn)有炎癥壞死現(xiàn)象的COX-2表達增加。

大黃中的大黃素、大黃素甲醚，大青葉中的靛玉紅、靛藍，茵陳中的槲皮素、胡蘿卜素、異鼠李素，柴胡中異甘草素、山奈酚等均能與COX-2發(fā)生結(jié)合，可以推測這些活性成分是通過靶向COX-2，減少或抑制COX-2的表達，從而減輕肝損傷。而有關(guān)COX-2在肝硬化、病毒性肝炎等肝病的作用有待進一步研究。由網(wǎng)絡(luò)圖可以看出，槲皮素、大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、亞油酸等均能與p53發(fā)生結(jié)合。

3 討 論

研究發(fā)現(xiàn)，苦黃注射液中含有較多有機酸、香豆素、黃酮類和游離蒽醌化合物。香豆素類成分具有潛在的抗炎和抗肝損傷作用；黃酮類成分對急性肝損傷存在保護作用；蒽醌類成分對肝臟的損傷也能起到一定治療作用。通過對苦黃注射液多成分-靶點網(wǎng)絡(luò)進行分析發(fā)現(xiàn)，方中的五味單味藥所含的幾大類成分分別調(diào)控不通的基因群，各基因群之間又通過共享基因相連，從而顯示了不同成分之間的多靶點協(xié)同作用。近百種活性成分作用多個靶點，呈現(xiàn)出方劑多成分、多靶點、整合調(diào)節(jié)的作用特點，以期虛擬篩選中藥有效物質(zhì)并發(fā)現(xiàn)其作用靶點。