黎飚 李海 陳建海 楊潔 梁倩 方曉燕 顧建忠

(右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000)

隨著年齡增大，卵巢萎縮，分泌功能下降，嚴(yán)重影響需要性激素維持功能的性器官及受性激素影響的其他器官，從而引起相關(guān)疾患〔1～3〕，如卵巢功能退化引起骨質(zhì)流失，老年智力障礙。所有激素在體內(nèi)生理作用的強(qiáng)弱，除了與生物效應(yīng)量呈正比，還受雌激素受體(ER)活性度高低的影響，雌激素也不例外。與雌激素的生理作用密切相關(guān)的ER活性度高低受到其基因多態(tài)性的影響〔4,5〕。通過普查ER-β基因多態(tài)性，找到卵巢功能易退化的相關(guān)基因型，提前做好臨床預(yù)防和治療。

1 材料和方法

1.1研究對象 沒有內(nèi)臟器、內(nèi)分泌臟器和婦產(chǎn)科方面疾患，近6個(gè)月也沒有使用激素(包括性激素類藥物)，祖輩近三代為壯族家族，長期居住在廣西少數(shù)民族地區(qū)40～45歲的壯族絕經(jīng)婦女416例。

1.2實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測測定 常規(guī)處理血液樣本，-20℃下保存待用。黃體生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)均用放免法測定。

1.3測定ER基因分布

1.3.1引物 按文獻(xiàn)〔3〕操作得到Rsa Ⅰ酶切引物：引物①：5′-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3′，引物②：5′-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3′。

1.3.2提取 樣本DNA模板：改良的NaI法提取采集血液標(biāo)本DNA，測定含量，-20℃條件下存放。

1.3.3常規(guī)PCR底物擴(kuò)增 往復(fù)循環(huán)32次，對最后產(chǎn)物進(jìn)行檢查。

1.3.4酶切 用PvuⅡ和XbaⅠ進(jìn)行酶切，對兩個(gè)限切酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳，并觀察、測定電泳膠片圖像結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SSPS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1ER-α 基因型分析 PvuⅡ酶切得到3 種基因：PP 型(1.3 kb 大小的1條帶)；Pp 型(1.3 kb，860 bp，460 bp大小的3條帶)，pp 型(860 bp,460 bp大小的2條帶)，見圖1。XbaⅠ酶切可以區(qū)分出3個(gè)基因型：XX型(1.3 kb大小的1條帶)，Xx 型(1.3 kb，860 bp，380 bp大小3條帶)，xx 型(860 bp,360 bp大小2條帶)，見圖2。

圖1 ER-α基因PvuⅡ多態(tài)性電泳

圖2 ER-α基因XbaⅠ酶切多態(tài)性電泳

2.2ER-α基因PvuⅡ酶切基因與對應(yīng)性激素水平 血清性激素水平中,PP基因型，Pp基因型,pp基因型,p基因型之間相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而P基因型血清E2、P水平明顯低于其他4個(gè)基因型(P<0.05)；但FSH和LH水平明顯高于其他4基因型組(P<0.01)，見表1。

表1 ER-α基因PvuⅡ酶切基因與對應(yīng)性激素水平

與其他4個(gè)基因型比較：1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

2.3ER-α 基因XbaⅠ酶切基因與對應(yīng)性激素水平 XX，xx,x,X基因型組之間性激素水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Xx基因型E2、P明顯高于其他4個(gè)基因型(P<0.05)，LH、FSH明顯低于其他4個(gè)基因型組(P<0.01)，見表2。

表2 ER-α 基因XbaⅠ酶切基因與對應(yīng)性激素水平

3 討 論

人體衰老是由器官退化引起的，卵巢是女性重要生殖和內(nèi)分泌器官，卵巢衰老退化引起包括子宮、乳腺等一系列性器官衰老退化。絕經(jīng)是卵巢衰老退化最明顯、最典型的表現(xiàn)。卵巢分泌女性激素水平下降，導(dǎo)致絕經(jīng)和更年期綜合征。其影響到心血管系統(tǒng)，神經(jīng)、內(nèi)分泌等系統(tǒng)功能狀態(tài)。雌孕激素對神經(jīng)的保護(hù)作用，表現(xiàn)在增加神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌、改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)血液循環(huán)及提供神經(jīng)組織抗氧化功能，減少中樞神經(jīng)細(xì)胞退化引起阿爾茨海默病。雌激素對骨組織也有保護(hù)作用，雌激素促進(jìn)成骨細(xì)胞骨質(zhì)合成和鈣化。卵巢衰老退化，雌孕激素分泌減少所致破骨細(xì)胞成熟、泌酸和溶骨而引起的骨質(zhì)流失〔6,7〕。臨床流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，同一雌孕雌孕激素水平，有不同臨床表現(xiàn)，這就說明雌激素的生理效應(yīng)，除了與雌孕激素的量有關(guān)，還與其受體的生物活性度密切有關(guān)，而受體的生物活性度又與其遺傳基因多態(tài)性密不可分〔8〕。本研究結(jié)果表明P基因人群在相同年齡的情況下，其卵巢衰老更快，其功能退化更為明顯。反作用于腺垂體，腺垂體減少促卵泡素分泌〔9,10〕。因此，ER-αP基因型絕經(jīng)的人群，卵巢功能退化更早，雌激素分泌更少，更容易患雌孕激素缺乏疾病，該提前防治。本研究表明Xx基因型壯族婦女人群，卵巢功能退化相對較慢。而Xx基因型樣本血清雌孕激素水平升高，反饋?zhàn)饔糜谥渎殉驳拇贵w分泌促進(jìn)卵巢分泌減素減少。ER-α Xx基因型人群，卵巢功能不易退化，分泌雌激素多，不易患性激素減少性疾病〔10,11〕。