王仁峰 孫鵬 郝貴亮 溫榮 李俊新 李文杰

2019年12月武漢市陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了多例新型冠狀病毒肺炎患者，隨后研究顯示其為一種新型冠狀病毒（Coronavirus，CoV），于2020年1月7日被世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）臨時命名為2019 新型冠狀病毒（2019-nCoV）[1]。該病毒隨后被重命名為嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2），其引起的疾病被稱為2019 冠狀病毒?。–OVID-19）。SARS-CoV-2 主要經飛沫和接觸傳播，在相對密閉的環(huán)境中長時間暴露于高濃度氣溶膠的情況下存在經氣溶膠傳播的可能[2]，2020年1月20日我國將新型冠狀病毒感染的肺炎納入法定乙類傳染病，并采取甲類傳染病的預防、控制措施[3]。COVID-19 自湖北省武漢市暴發(fā)以來，已蔓延至全國大部分省市[4]。根據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》，發(fā)病早期外周血白細胞總數(shù)正?；蚪档?，淋巴細胞計數(shù)減少，病情嚴重時淋巴細胞數(shù)進行性減少，多數(shù)患者C反應蛋白（CRP）和紅細胞沉降率升高，降鈣素原正常。因疫情爆發(fā)初期感染者以中老年人和合并基礎疾病患者為主，未見兒童患者，專家們曾一度認為兒童對病毒不易感[5]，但隨后不同地區(qū)出現(xiàn)多例兒童感染報道。2020年2月2日國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布了“關于做好兒童和孕產婦新型冠狀病毒感染的肺炎疫情防控工作的通知”[6]，明確指出，兒童和孕產婦是SARS-CoV-2 的易感人群。由于兒童感染數(shù)量不多，其臨床特點及檢驗數(shù)據(jù)報道相對較少，因此本文對本院1例新冠肺炎兒童患者檢驗結果進行梳理總結，以期為一線防疫工作提供素材。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

患兒男，1歲5月，患兒因與COVID-19確診病例密切接觸，于2月4日取咽拭子進行新型冠狀病毒核酸檢測呈陽性，以“新型冠狀病毒感染”收入即墨市人民醫(yī)院住院治療。肺部CT（圖1）顯示雙肺紋理清晰，左肺上葉透光度不均勻減低，右肺下葉見條片狀密度增高影，邊界清，專家會診后確診為COVID-19，于2月12日轉入本院治療?；純鹤云鸩∫詠頍o發(fā)熱、寒戰(zhàn)、抽搐，無咳痰、喘息、憋氣、氣促及呼吸困難，無面色發(fā)紺，無惡心、嘔吐、腹痛及腹瀉，精神可，飲食、睡眠尚可，大、小便正常。本研究遵守國際協(xié)調理事會臨床試驗規(guī)范和赫爾辛基宣言，通過了青島市婦女兒童醫(yī)院臨床研究倫理委員會的批準。

1.2 試劑與儀器

核酸提取試劑盒及及新型冠狀病毒（2019-CoV）ORF1ab/N基因雙重核酸檢測試劑盒均來自中山大學達安基因股份公司，核酸檢測儀為美國Thermo Fisher公司7500型實時熒光PCR 儀。Sysmex XN-1000 全血細胞分析儀購自日本希森美康公司，全自動CRP 分析儀購自上海奧普生物醫(yī)藥有限公司，呼吸道病原體譜抗體IgM 檢測試劑盒（間接免疫熒光法）購自歐蒙醫(yī)學實驗診斷股份公司。

1.3 方法

1.3.1 標本采集

受檢者標本由專業(yè)醫(yī)護人員采集，及時轉運至實驗室檢測。核酸標本檢測前置于56℃滅活30 min。采集患兒靜脈血2 mL 于EDTA-K2 抗凝管進行血常規(guī)及C反應蛋白檢測；采集靜脈血2 mL，置于含分離膠的黃頭真空采血管內，靜置待血液凝固，3 500×g 離心5 min，取血清進行呼吸道病原體譜檢測。

1.3.2 樣本檢測

所有操作均按照儀器及試劑說明書進行。核酸檢測采用實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術，針對2019-nCoV基因組中開放讀碼框1ab（open reading frame 1ab，ORF1ab）和核殼蛋白（nucleocapsid protein，N）進行檢測。如果檢測樣本在FAM和VIC 通道Ct值≤40，且有明顯的擴增曲線，可判定樣本為2019 新型冠狀病毒陽性；如果樣本僅在FAM 或VIC 單通道Ct值≤40，另一通道無擴增曲線，結果需復檢，復檢結果一致可判定樣本2019新型冠狀病毒陽性，復檢結果陰性可判定為未檢測到2019 新型冠狀病毒；如果樣本FAM和VIC通道無擴增曲線或Ct值＞40，且Cy5 通道有擴增曲線，可判定樣本未檢測到2019 新型冠狀病毒。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 19.0 進行數(shù)據(jù)處理。進行描述性分析。

2 結果

2.1 患兒血常規(guī)、C反應蛋白、呼吸道病原體譜結果

患兒入院以來血常規(guī)、CRP 檢測結果見表1。血常規(guī)結果顯示，患兒發(fā)病初期，白細胞及淋巴細胞在相對正常水平，隨后淋巴細胞水平有較明顯升高，CRP 結果正常?；純鹤≡浩陂g分別于2月13日、25日進行呼吸道病原體（包括呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團菌）檢測，兩次檢測均呈現(xiàn)甲型流感病毒、乙型流感病毒、肺炎支原體IgM 陽性反應，提示呼吸道病原體合并感染見表1。

表1 患兒SARS-CoV-2 感染后臨床檢驗結果Table1 Clinical results of children with SARS-CoV-2 infection

2.2 多樣本核酸檢測結果

患兒入院以來多次新型冠狀病毒核酸檢測結果見圖2。通過實時熒光定量PCR 對患兒多樣本進行新型冠狀病毒核酸檢測（圖2），結果顯示，患兒鼻拭子、咽拭子、肛拭子及糞便新型冠狀病毒核酸檢測均呈陽性，且在肛拭子和糞便中檢出病毒核酸持續(xù)時間更長，而在其他樣本中則為陰性（血液、尿液等）。

3 討論

COVID-19 疫情在中國持續(xù)向好，國外還處于爆發(fā)大流行上升階段，及時、正確了解新型冠狀病毒相關特征是診斷及治療的重要環(huán)節(jié)，也是疫情防控工作中的重要環(huán)節(jié)。SARS-CoV-2是繼α-冠狀病毒屬的HCoV-229E、HCoV-NL63，β-冠狀病毒屬的HCoV-HKU1、MERS-CoV、SARS-CoV 之后的第七個可以感染人類的冠狀病毒[7-8]。數(shù)據(jù)研究表明，SARS-CoV-2 的傳播能力與SARS 冠狀病毒相似，其繁殖數(shù)（reproduction number，R0）分別為1.4～5.5，2.0～5.0[9-10]。由于免疫系統(tǒng)不成熟，兒童是該疾病的易感人群。盡管目前兒童確診病例數(shù)占比相對較小，但隨著更多地區(qū)開展病原學檢測，兒童感染病例數(shù)有增加的趨勢，應予以高度重視。但現(xiàn)階段相關研究報道較少，因此準確掌握檢驗結果動態(tài)變化對兒童病例的診療具有重要意義。

本文報道的確診病例無明顯發(fā)熱及明顯呼吸道癥狀，均因與確診患者密切接觸而入院就診，通過核酸檢測確診。通過多次對患兒多樣本核酸檢測發(fā)現(xiàn)，除在鼻咽拭子中發(fā)現(xiàn)SARS-CoV-2 的存在，在其大便及肛拭子也檢測到病毒核酸，且持續(xù)時間較長，特別是當鼻咽拭子轉陰后，大便核酸陽性仍可持續(xù)1 周以上，在其他體液中（血液、眼淚）未檢測到病毒核酸。根據(jù)《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》[2]，新冠肺炎患者出院應連續(xù)兩次呼吸道標本核酸檢測陰性（采樣時間至少間隔24 h），但此時患者大便病毒核酸可能依然呈陽性，存在潛在傳染風險。因此患者出院后建議妥善處理其大便等分泌物，同時進行相應隔離措施，以防再次出現(xiàn)感染情況。進一步分析發(fā)現(xiàn)患兒發(fā)病初期鼻咽拭子核酸檢測呈陽性，此時淋巴細胞計數(shù)處于相對正常水平；隨后鼻咽拭子持續(xù)轉陰，患兒淋巴細胞水平逐步升高，并維持在較高水平，直至2月18日鼻咽拭子再次陽性，其之后的血常規(guī)結果顯示白細胞及淋巴細胞均有明顯升高；2月28日糞便病毒核酸轉陰后，淋巴細胞計數(shù)又恢復相對正常水平。上述結果分析顯示，淋巴細胞水平與病毒核酸結果存在一定相關性，通過其聯(lián)合檢測對兒童COVID-19 診療效果觀察具有重要意義。另外，呼吸道病原體譜檢測發(fā)現(xiàn)，患兒甲型流感病毒、乙型流感病毒、肺炎支原體IgM 抗體持續(xù)陽性，是否SARS-CoV-2 對已感染呼吸道病原體的患者更加易感，或易與呼吸道病原體合并感染有待進一步的探討，這為以后的研究及診療提供了新的方向。

由于只有1例兒童確診病例的檢測結果，存在一定局限性，希望能給臨床抗疫一線提供一定的參考，期待更多的臨床研究報道，為更好的診療、控制疫情提供基礎。