李成賢 曹洪志

宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川宜賓 644003

艾葉是一種菊科多年生灌木狀草本植物艾的葉片，是常用中藥，因其具有藥源豐富、價格低廉、副作用小、安全性高等特點而被廣泛使用。目前，艾葉的應(yīng)用采用湯劑、灸劑等傳統(tǒng)劑型較多，艾葉揮發(fā)油為艾葉的主要有效成分。為了更好地開發(fā)艾葉新產(chǎn)品，本試驗采用超聲波萃取方式提取艾葉揮發(fā)油，探討艾葉揮發(fā)油對大腸桿菌、雞白痢沙門氏桿菌體外抑菌效果，為艾葉在臨床上的抗菌作用提供一定的研究基礎(chǔ)[1]。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)專業(yè)畜產(chǎn)品安全檢測實驗室提取的河南蘄艾艾葉揮發(fā)油。

2）選擇供試菌種和培養(yǎng)基：大腸桿菌、雞白痢沙門氏桿菌由宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)專業(yè)微生物實驗室提供。

1.2 試驗主要儀器

無菌工作室、電子天平、離心機(jī)、無菌移液槍、培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈、培養(yǎng)皿、鑷子、無菌濾紙、打孔機(jī)2-HOLE PUNCH、量筒、燒杯、直尺、剪刀、玻璃棒。

1.3 試驗主要試劑

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、慶大霉素藥敏紙片、氟苯尼考藥敏紙片藥片（杭州微生物試劑有限公司提供）。

1.4 試驗方法

1）培養(yǎng)基及供試菌液的準(zhǔn)備。制作供藥敏試驗用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；分別用麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、HE 瓊脂培養(yǎng)基及營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)，并將復(fù)蘇后的菌種接種營養(yǎng)肉湯于37 ℃振蕩培養(yǎng)箱中進(jìn)行4 h 增菌培養(yǎng)。

2）藥敏試驗。在無菌工作臺上用滅菌移液管吸取菌液2 mL 到營養(yǎng)瓊脂平板上，小心來回傾斜平板，使菌液均勻覆蓋過平板表面，然后傾斜平板，用移液管吸去多余菌液。在平板中貼3 張彼此有一定間距的濾紙紙片（Φ：5 mm），使3 張紙片的連線接近等邊三角形，然后在每張紙片中央用微量移液器加上等量艾葉提取物，置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（每種菌做6 個梯度，每個梯度做3 個重復(fù)，并做相應(yīng)對照，詳見表1）。

2 結(jié)果與分析

培養(yǎng)結(jié)束后，用直尺測定大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌在加入艾葉提取物后抑菌圈的大小。

2.1 不同濃度艾葉提取物對大腸桿菌組抑菌作用的影響

從表2可以看出，大腸桿菌組抑菌圈大小隨艾葉提取物濃度的增加，抑菌圈呈增大的趨勢，5.00 μL/L 組抑菌圈大小平均為1.20 cm，2.50 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.90 cm、1.25 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.73 cm、0.60 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.60 cm，空白、0.30、0.15 μL/L 組均未見抑菌圈，說明艾葉提取物抑菌效果隨濃度增加抑菌效果越明顯，量少沒有抑菌作用。與對照組中氟苯尼考抑菌圈（3.96 cm）、慶大霉素抑菌圈（2.13 cm）相比，5.00 μL/L 艾葉提取物抑菌的效果較弱。

2.2 不同濃度艾葉提取物對雞白痢沙門氏菌抑菌作用的影響

從表3可以看出，雞白痢沙門氏菌組抑菌圈大小隨艾葉提取物濃度的增加，抑菌圈呈增大的趨勢，5.00 μL/L 組抑菌圈大小平均為0.90 cm，2.50 μL/L組抑菌圈大小平均為0.70 cm，1.25 μL/L 組、0.60 μL/L組、空白、0.30 μL/L 組、0.15 μL/L 組均未見抑菌圈，說明艾葉提取物抑菌效果隨濃度增加抑菌效果越明顯，量少沒有抑菌作用。與對照組中氟苯尼考抑菌圈（0.73 cm）相比，5.00 μL/L 組抑菌效果較好，氟苯尼考抑菌圈大小同2.50 μL/L 組相當(dāng)。與慶大霉素抑菌圈（2.13 cm）相比，5.00 μL/L 艾葉提取物抑菌的效果較弱。

2.3 相同濃度的艾葉提取物對不同菌種的抑菌作用

艾葉提取物5.00、2.50、1.25 μL/L 對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌2 種菌抑菌圈大小可見圖1～圖3。從圖中可以看出，艾葉提取物5.00、2.50 μL/L對大腸桿菌的作用較好、對雞白痢沙門氏菌次之。艾葉提取物1.25 μL/L 對雞白痢沙門氏菌沒有抑菌作用。

圖1 艾葉提取物5.00 μL/L 組對2 種菌的抑菌作用

表1 藥敏試驗處理

表2 大腸桿菌組抑菌圈大小

表3 雞白痢沙門氏菌組抑菌圈大小

圖2 艾葉提取物2.50 μL/L 組對2 種菌的抑菌作用

圖3 艾葉提取物1.25 μL/L 組對2 種菌的抑菌作用

2.4 對照組對不同菌種的抑菌作用

試驗過程中，大腸桿菌組、雞白痢沙門氏菌組選擇氟苯尼考和慶大霉素作對照，從圖4可以看出，氟苯尼考對大腸桿菌的作用較雞白痢沙門氏菌強(qiáng)；慶大霉素對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌作用相當(dāng)；氟苯尼考對大腸桿菌的作用比慶大霉素好，慶大霉素對雞白痢沙門氏菌比氟苯尼考好。

圖4 對照組對2 種菌的抑菌作用

3 討 論

艾葉揮發(fā)油為艾葉的主要有效成分，研究發(fā)現(xiàn)，艾葉在體外對炭疽桿菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、白喉桿菌、肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌等均有抑制作用。李建明等[2]研究證實，艾葉提取物對黃瓜的保鮮作用有良好的抑菌效果。Ahameethuni-sa 等[3]研究發(fā)現(xiàn)，艾草提取物對大腸桿菌有抑制效果，而對金黃色葡萄球菌和糞腸球菌沒有作用。運用超聲波法提取艾葉的有效成分，能夠?qū)ΤＲ姴≡瘘S色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大腸桿菌有較好的抑菌效果[4-5]。劉巍等[6]將艾葉用水提取，用其水提取液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌的體外抗菌效果進(jìn)行試驗研究，結(jié)果證明艾葉水煎液對這5 種致病菌均有明顯的抗菌作用。游思湘等[1]2011年采用水蒸汽蒸餾提取艾葉揮發(fā)油，得到淡黃色艾葉揮發(fā)油，提取率為0.65%。體外抑菌試驗結(jié)果表明，艾葉揮發(fā)油對炭疽桿菌抑制作用最強(qiáng)，對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌也有較強(qiáng)的抑菌作用，但對巴氏桿菌、鏈球菌、沙門氏菌的抑菌效果不明顯；盧學(xué)根[7]以自來水作溶劑得到艾葉提取液，該提取液對細(xì)菌的抑制效果較好，尤其對金黃色葡萄球菌的效果最好，對酵母菌的效果一般，對霉菌的效果不明顯。此外，該提取液MIC 為50%，在酸性環(huán)境中（pH 3～6）作用較好，但熱穩(wěn)定性不好，經(jīng)90 ℃以上、15 min 處理其抑菌作用不明顯。

本試驗也證實艾葉揮發(fā)性提取物體外對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌均有抑菌作用，提取物濃度越高，抑菌作用越明顯。但與慶大霉素、氟苯尼考對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌抑菌作用相比，最大濃度5.00 μL/L 組的效果均不如慶大霉素、氟苯尼考的效果好。

4 小 結(jié)

本試驗對艾葉提取物抑菌作用進(jìn)行研究，艾葉提取物對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌均有抑菌作用，對大腸桿菌的效果比對雞白痢沙門氏菌效果好。5.00 μL/L 組效果最好、2.50 μL/L 組次之，1.25、0.60 μL/L 組對大腸桿菌有抑菌作用，但對雞白痢沙門氏菌無抑菌作用，0.60 μL/L 以下濃度對大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌均無抑菌作用。提取物濃度越高，抑菌作用越明顯，低濃度無抑菌作用。