劉 虎

（黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 開封 475000）

食用菌中含有許多生物活性肽，按其對(duì)人體的功效可分為降壓、降血糖的活性肽，抗氧化、抗凝血、抗病毒的活性肽等多種類型[1]。目前食用菌生物活性肽對(duì)運(yùn)動(dòng)人群的影響研究較少[2]。故對(duì)高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)和耐力訓(xùn)練中，生物活性肽調(diào)節(jié)機(jī)體生化指標(biāo)的機(jī)理展開了試驗(yàn)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

供試材料：鹽酸二甲雙胍片，中美上海施貴寶制藥有限公司；靈芝肽、姬松茸肽粉，扶風(fēng)斯諾生物科技有限公司；茶樹菇多肽、雙孢菇肽粉，蘭州沃特萊斯生物科技有限公司提供；云芝肽粉，寧陜國(guó)圣生物科技有限公司；四氧嘧啶，上海晶抗生物工程有限公司；鹽酸苯乙雙胍，濟(jì)南勝瑞祥醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司；蒸餾水（分析純），濟(jì)南青玉元商貿(mào)有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選用健康4周齡昆明二級(jí)雄性小白鼠，體重為（20±2） g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物研究中心提供。對(duì)小鼠進(jìn)行分籠飼養(yǎng)，每籠10只。飼養(yǎng)條件為標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料喂養(yǎng)，自由飲食和飲水，飼養(yǎng)溫度25℃，相對(duì)濕度50%，室內(nèi)照明12 h/12 h光暗交替周期，小鼠試驗(yàn)前均適用性喂養(yǎng)1周。

1.3 試驗(yàn)藥品與儀器

BS-300全自動(dòng)生化分析儀，深圳邁瑞公司；高速離心機(jī)，廣州市正一科技有限公司；血糖試紙（葡萄糖脫氫酶法），雅培糖尿病護(hù)理有限公司；YJ超凈工作臺(tái)，蘇州市蘇凈集團(tuán)安泰公司；BIOICE01-冰浴器，明日百傲（北京） 科技有限公司；BSZ10S分析天平，北京賽多利斯天平有限公司。

2 試驗(yàn)方法

2.1 食用菌生物活性肽降血糖試驗(yàn)

小鼠適用性喂養(yǎng)1周最后一次喂食2 h后，用葡萄糖試紙測(cè)量小鼠的尿糖，挑選試紙為淺藍(lán)色陰性的小鼠20只為一組，作為陰性對(duì)照組。

小鼠適用性喂養(yǎng)1周，最后一次喂食后禁食24 h。給小鼠腹腔注射配置好的四氧嘧啶注射液100 mg·kg-1，3 d后，測(cè)量小鼠的尿糖[3]，選取定性測(cè)定尿糖含量值為“+++”的小鼠分5組，每組20只，分別為陽(yáng)性對(duì)照組、西藥對(duì)照組、活性肽高劑量組、活性肽中劑量組和活性肽低劑量組。

尿糖陰性對(duì)照組（第1組），灌胃20 mL·kg-1的生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組（第2組），即四氧嘧啶糖尿病模型對(duì)照組，灌胃20 mL·kg-1生理鹽水；西藥對(duì)照組（第3組），灌胃20 mL·kg-1鹽酸苯乙雙胍水溶液；活性肽高劑量組（第4組），灌胃400 mL·kg-1活性肽溶液；活性肽中劑量組（第5組），灌胃200 mL·kg-1活性肽溶液；活性肽低劑量組（第6組），灌胃100 mL·kg-1活性肽溶液。

以上6組小鼠均持續(xù)給藥14 d，正常飼養(yǎng)投喂飼料、自由飲水進(jìn)食。第7天最后一次給藥后進(jìn)行稱重，隨機(jī)挑選10只小鼠禁食12 h，采用斷頸法處死小鼠，立即摘取眼球取血，測(cè)量小鼠血糖含量[5]；第14天最后1次給藥后，將每組剩余的10只小鼠也采用同樣的方法禁食12 h，測(cè)量小鼠血糖含量。通過與陰性對(duì)照組的比較，評(píng)價(jià)血糖指標(biāo)的高低；通過與陽(yáng)性對(duì)照組的比較，評(píng)價(jià)降血糖的效果的優(yōu)劣。

2.2 食用菌生物活性肽對(duì)小鼠體重和負(fù)重游泳耐力影響的試驗(yàn)

小鼠適用性喂養(yǎng)1周后，選用健康小鼠60只，分成6組。靈芝肽、姬松茸肽、茶樹菇肽、雙孢菇肽、云芝肽粉末，分別按1∶1加蒸餾水混合均勻，得5種生物活性肽樣品溶液，每日定時(shí)經(jīng)口灌胃樣品溶液1次，劑量為1 g·kg-1；對(duì)照組（CK） 每日定時(shí)經(jīng)口灌胃1次同樣體積的蒸餾水。每日上午定時(shí)對(duì)每只小鼠進(jìn)行稱重記錄體重，并進(jìn)行2次游泳訓(xùn)練，每次15 min，下午定時(shí)進(jìn)行小鼠灌胃，連續(xù)30 d，期間正常飼養(yǎng)小鼠。最后一次灌胃1 h后，取各組小鼠10只進(jìn)行負(fù)重游泳試驗(yàn)[4]，在小鼠尾部系體重5%的鉛皮，將小鼠放置于水箱，水溫為（25.0±2.0） ℃，記錄小鼠從入水至全部身體沉入水中的時(shí)間作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

3 試驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 四氧嘧啶對(duì)小鼠血糖和體重指標(biāo)的影響

四氧嘧啶對(duì)小鼠體重的影響見表1。

表1 四氧嘧啶對(duì)小鼠體重的影響Tab.1 Effects of different component on body weight of mice

由表1可知，在本次試驗(yàn)中，第2組的小鼠體重有明顯減輕，較第1組正常對(duì)照組小鼠體重第一周后平均減少 14.86%，第二周后平均減少達(dá)40.16%。同時(shí)，試驗(yàn)中觀察到第2組小鼠發(fā)現(xiàn)有活動(dòng)異常現(xiàn)象，出現(xiàn)飲水和排尿頻率增加和多次進(jìn)食的現(xiàn)象，觀察毛色變暗、有掉毛情況，與糖尿病表現(xiàn)一致。

3.2 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果

6組小鼠的負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表2 不同組分對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響Tab.2 Effects of different component on burden swimming time of mice

由表2可知，5種食用菌生物活性肽與對(duì)照組相比，小鼠的游泳時(shí)間都有增加，平均負(fù)重游泳時(shí)間為109.73 min，其中茶樹菇肽對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的影響最大，與對(duì)照組相比提升了74.51%，效果顯著，說明對(duì)運(yùn)動(dòng)耐力的增強(qiáng)效果良好。

3.3 灌胃不同劑量食用菌生物活性肽對(duì)小鼠體重和運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的影響

試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

由圖1可知，陽(yáng)性對(duì)照組小鼠出現(xiàn)了多飲、多食、消瘦的狀況，血糖值明顯升高。試驗(yàn)初期，各小組的小鼠體重仍呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，從給藥第6天開始，各試驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，小鼠的攝食頻率、飲水頻率和數(shù)量均明顯減少，體重也趨于平緩，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，體重有所回升?？梢?種食用菌生物活性肽大劑量（400 mg·kg-1）能明顯減緩糖尿病小鼠體重下降的癥狀，在一定程度上可促進(jìn)其體重恢復(fù)。分析其原因可能是由于食用菌生物活性肽對(duì)小鼠的肌肉蛋白質(zhì)具有的生化活性，能夠補(bǔ)充小鼠肌肉蛋白質(zhì)的消耗，幫助肌肉更快地合成優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，從而促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)質(zhì)量、提高肌肉生長(zhǎng)速度，增加肌肉的運(yùn)動(dòng)耐力。

3.4 灌胃不同劑量藥品對(duì)小鼠血糖的影響

灌胃不同劑量藥品對(duì)小鼠血糖的影響試驗(yàn)結(jié)果見表3。

分別對(duì)靈芝肽、姬松茸肽、茶樹菇肽、雙孢菇肽、云芝肽5種食用菌生物活性肽進(jìn)行試驗(yàn)，分別取5種活性肽的高劑量、中劑量、低劑量3個(gè)組血糖值的平均值。試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

表3 各試驗(yàn)組小鼠血糖值Tab.3 The blood sugar of experiment groups

觀察試驗(yàn)過程發(fā)現(xiàn)，高劑量、中劑量、低劑量3個(gè)組的食用菌生物活性肽均能顯著改善糖尿病小鼠的多飲、多食、消瘦癥狀。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，正常陰性組的空腹血糖值7.38，組內(nèi)極差為2.90；陽(yáng)性組的血糖值為38.74，組內(nèi)極差為11.69，陽(yáng)性組血糖值與正常陰性組差異較大說明小鼠的糖尿病癥狀比較明顯，陽(yáng)性組的極差較大說明小鼠個(gè)體間的差異很大，組內(nèi)個(gè)體血糖值差異顯著，糖尿病病情因個(gè)體因素變化較大。西藥組的血糖平均值為22.13，極差值為28.86，差異也較大，說明小鼠血糖值因使用了降糖西藥，雖然有所降低，但由于小鼠個(gè)體間的差異性，用藥后的效果差異也比較大，糖尿病的治療效果和病情并不穩(wěn)定。高、中、低三個(gè)劑量實(shí)驗(yàn)組的血糖平均值依次為 16.76、14.48 和 14.28，極差分別為 6.04、6.12 和 2.63，說明 3 個(gè)試驗(yàn)組均有降低小鼠血糖值的效果，即糖尿病得到了一定的控制；同時(shí)高劑量和中劑量2個(gè)試驗(yàn)組的極差幾乎相同，低劑量實(shí)驗(yàn)組的極差很小，整體極差也相對(duì)較小，說明小鼠個(gè)體間的治療效果差異較小，病情控制的效果比較穩(wěn)定。

4 結(jié)論

對(duì)靈芝肽、姬松茸肽、茶樹菇肽、雙孢菇肽、云芝肽5種食用菌生物活性肽進(jìn)行了降血糖試驗(yàn)，對(duì)血糖生化指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)分析，并進(jìn)行了食用菌生物活性肽對(duì)小鼠體重和負(fù)重游泳耐力的影響試驗(yàn)。證明食用菌生物活性肽對(duì)小鼠的肌肉生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)耐力有一定的促進(jìn)作用，能夠降低小鼠的血糖生化指標(biāo)，高劑量的食用菌生物活性肽對(duì)血糖指標(biāo)的控制作用更加明顯。