鄭緒恒

（西北政法大學(xué)體育部，陜西 西安 710100）

茶樹(shù)菇（Agrocybe aegerita） 學(xué)名柱狀田頭菇，屬于糞繡傘科（Bolbitiacea） 田頭菇屬（Agrocybe）。野生茶樹(shù)菇一般只生長(zhǎng)在油茶樹(shù)的枯樹(shù)枝干或樹(shù)樁上，因此而得名茶樹(shù)菇[1]。茶樹(shù)菇目前已經(jīng)被人工馴化，一般選用楊樹(shù)、楓樹(shù)、柳樹(shù)等闊葉樹(shù)作栽培材料，也可以用棉籽殼、甘蔗渣等碳源，以米糠、麩皮等作為氮源進(jìn)行人工栽培[2]。茶樹(shù)菇營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，含有豐富的氨基酸、蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)。茶樹(shù)菇還具有補(bǔ)腎利尿、美容保健的功效，民間常見(jiàn)用來(lái)治療腹瀉、尿頻、高血壓和心血管方面的疾病，是一種藥食兼用的食用菌。

茶樹(shù)菇提取物具有很好的抗氧化能力，是天然的抗氧化劑，對(duì)高強(qiáng)度劇烈運(yùn)動(dòng)后所產(chǎn)生的各種氧自由基有很好的清除效果，可以有效緩解高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后所產(chǎn)生的疲勞感；茶樹(shù)菇提取物還可以提高機(jī)體的免疫力，調(diào)節(jié)人體的新陳代謝，具有促進(jìn)運(yùn)動(dòng)疲勞恢復(fù)的功能[3]。其藥理活性和抗疲勞的功效使得茶樹(shù)菇提取物具有了很好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

1 茶樹(shù)菇提取物的分離純化

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)材料與試劑

干茶樹(shù)菇，天津市宏勝源食用菌科技發(fā)展有限公司；大孔吸附樹(shù)脂XDA-8，陜西藍(lán)深特種樹(shù)脂有限公司；無(wú)水乙醇，天津市紅巖化學(xué)試劑廠（分析純）；二苯代苦味酰自由基，濟(jì)寧華凱樹(shù)脂有限公司；磷酸、三氯乙酸、鄰苯三酚、鹽酸，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠（分析純）；50%卵黃鹽水懸液，上海一研生物科技有限公司；硫代巴比妥酸（TBA） 溶液，南京億迅生物科技有限公司；硫酸亞鐵，淄博宏潔化工有限公司；鄰苯三酚，湖北齊飛醫(yī)藥化工有限公司；鹽酸三（羥甲基）氨基甲烷（Tris-HCl）緩沖液，索來(lái)寶科技有限公司。

1.1.2 試驗(yàn)儀器

756PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海天普分析儀器有限公司；AE124型電子天平，上海皓拂儀器儀表有限公司；PHS-3C精密pH計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；FW400A型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)儀器廠；J-HH-6A精密數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海勝衛(wèi)電子科技有限公司；1TDL-5臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；SK-1型快速混勻器，上海向帆儀器有限公司；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱，北京科偉永興儀器有限公司。

1.2 茶樹(shù)菇粗提物的制備

茶樹(shù)菇提取物的制備分2個(gè)步驟：粗茶樹(shù)菇提取物的制備，采用水提和醇提2種方法進(jìn)行提取，然后對(duì)比抗疲勞功效與抗氧化作用，確定粗提取的方法；對(duì)粗提取物進(jìn)行分離純化，進(jìn)行抗疲勞功效與抗氧化作用對(duì)比試驗(yàn)，最終優(yōu)選出分離純化的茶樹(shù)菇提取物。

將干茶樹(shù)菇洗凈、晾干，在60℃下烘箱中烘干60 min后，上粉碎機(jī)制成茶樹(shù)菇粗粉，過(guò)80目篩。將水和80%乙醇分別按照1∶10的料液比與茶樹(shù)菇粉末混合均勻，在60℃恒溫水浴鍋中水浴60 min，浸提3次后合并濾液，上離心機(jī)，2 500 r·min-1離心15 min后取上清液即得茶樹(shù)菇葉粗提溶液。將茶樹(shù)菇粗提液在60℃下烘箱中烘干濃縮，得干燥粉末即可分別得到水提茶樹(shù)菇粗提物（1號(hào)樣品） 和醇提茶樹(shù)菇粗提物（2號(hào)樣品）。

1.3 茶樹(shù)菇分離純化提取物的制備

使用XDA-8大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行分離純化。將1號(hào)樣品和2號(hào)樣品粉末分別配置成200 mg·mL-1濃度的吸附液，將吸附液作為上柱液，以1 BV·h-1的流速流入層析柱，上柱液全部流入層析柱樹(shù)脂吸附飽和后，靜置12 h進(jìn)行靜態(tài)吸附，先用蒸餾水沖洗樹(shù)脂直到出口流出的水變?yōu)闊o(wú)色透明，然后再以1 BV·h-1的流速用80%的乙醇溶液洗脫2 h，乙醇溶液體積為200 mL。收集洗脫液進(jìn)行干燥處理，在60℃下烘箱中烘干1 h，最終分別可得2種茶樹(shù)菇分離純化提取物，即水提茶樹(shù)菇分離純化提取物干燥粉末（3號(hào)樣品）、醇提茶樹(shù)菇分離純化提取物干燥粉末（4號(hào)樣品）。

2 茶樹(shù)菇提取物的抗氧化試驗(yàn)

2.1 茶樹(shù)菇提取物的抗氧化試驗(yàn)原理

人體內(nèi)的自由基過(guò)多會(huì)與正常的人體細(xì)胞搶奪電子，破壞正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而引起人體細(xì)胞的變異，導(dǎo)致癌癥、腫瘤、心血管等多種疾病[6]。采用體外抗氧化性試驗(yàn)來(lái)對(duì)茶樹(shù)菇提取物對(duì)自由基的清除能力進(jìn)行檢測(cè)，在不同條件下茶樹(shù)菇提取物的抗氧化活性進(jìn)行研究，以研究茶樹(shù)菇提取物對(duì)運(yùn)動(dòng)抗疲勞程度和影響。具體試驗(yàn)分別采用了二苯代苦味酰自由基體系、超氧陰離子自由基體系，對(duì)茶樹(shù)菇提取物的抗氧化能力進(jìn)行全面考察[4]。

2.2 清除率的計(jì)算

清除率（E，%） 計(jì)算公式為：

式中：A0為空白的平均吸光度；A1為試樣的平均吸光度。

2.3 對(duì)二苯代苦味酰自由基體系清除作用的試驗(yàn)方法

二苯代苦味酰自由基試驗(yàn)是一種用以評(píng)價(jià)天然抗氧化劑抗氧化活性的快速、簡(jiǎn)便、靈敏可行的方法。首先，精密稱取二苯代苦味酰自由基0.02 g，用無(wú)水乙醇定容至100 mL，配成0.02%的二苯代苦味酰自由基無(wú)水乙醇溶液，避光保存；將上面制備的1號(hào)～4號(hào)茶樹(shù)菇提取物樣品粉末分別用蒸餾水溶解成0.2 g·mL-1的樣品提取液，然后分別取1 mL樣品提取液；再取5支刻度試管，各加1.0 mL二苯代苦味酰自由基無(wú)水乙醇溶液，其中4支作為測(cè)定管，分別加入1號(hào)～4號(hào)樣品提取液各3 mL，另1支作為空白管對(duì)照管加3 mL蒸餾水；在室溫下避光保存30 min后，在517 nm吸收峰下用分光光度計(jì)測(cè)吸光度值。

2.4 對(duì)超氧陰離子自由基體系清除作用的試驗(yàn)方法

首先將制備的1號(hào)～4號(hào)茶樹(shù)菇提取物樣品粉末分別用蒸餾水溶解成0.2 g·mL-1的樣品提取液；然后精密稱取 0.05 mol·L-1的 Tris-HCl緩沖溶液 4.5 mL，于25℃預(yù)熱20 min。然后取5支刻度試管，各加25 mmol·L-1鄰苯三酚0.4 mL，其中4支作為測(cè)定管，各加1 mL的1號(hào)～4號(hào)樣品提取液，另1支作為空白加1 mL蒸餾水；最后再加入8 mol·L-1HCl溶液終止反應(yīng)。在299 nm吸收峰下用分光光度計(jì)測(cè)吸光度值。

3 試驗(yàn)結(jié)果及分析

1號(hào)樣品：水提茶樹(shù)菇粗提物；2號(hào)樣品：醇提茶樹(shù)菇粗提物；3號(hào)樣品：水提茶樹(shù)菇分離純化提取物；4號(hào)樣品：醇提茶樹(shù)菇分離純化提取物。將這4種樣品所測(cè)定的吸光度值分別代入清除率公式，計(jì)算出每一種樣品對(duì)不同抗氧化劑的清除率，同類進(jìn)行比較分析。

3.1 對(duì)二苯代苦味酰自由基的清除作用

樣品對(duì)二苯代苦味酰自由基的清除作用試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

如圖1所示，1號(hào)～4號(hào)樣品提取液對(duì)二苯代苦味酰自由基均有較好的清除作用，平均清除率達(dá)55.13%，其中4號(hào)樣品的清除率最高64.80%；2種水提法的茶樹(shù)菇提取物（1號(hào)、3號(hào)樣品）對(duì)二苯代苦味酰自由基的清除能力均低于醇提法提取物（2號(hào)、4號(hào)樣品），說(shuō)明通過(guò)醇提法提取的茶樹(shù)菇提取物的抗氧化能力更強(qiáng)；而茶樹(shù)菇粗提取物（1號(hào)、2號(hào)樣品）對(duì)二苯代苦味酰自由基的清除能力均低于分離純化后的提取物（2號(hào)、4號(hào)樣品），說(shuō)明分離純化后的茶樹(shù)菇提取物對(duì)二苯代苦味酰自由基清除效果更好，其抗氧化能力也更強(qiáng)。

3.2 對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

4種樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，1號(hào)～4號(hào)樣品提取液對(duì)超氧陰離子自由基均有較好的清除效果，平均清除率達(dá)62.55%，其中4號(hào)樣品的清除率最高73.80%；2種茶樹(shù)菇的粗提取物（1號(hào)、2號(hào)樣品）平均清除率為62.50%，2種茶樹(shù)菇的分離純化提取物（3號(hào)、4號(hào)樣品）平均清除率為62.60%，說(shuō)明這一次提取和二次提取對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果相當(dāng)。但同一類提取物中，水提法提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果均低于醇提法（2號(hào)＞1號(hào)樣品，4號(hào)＞3號(hào)樣品），說(shuō)明醇提法茶樹(shù)菇提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果更好，抗氧化能力也更高。

4 討論

可以看出，1號(hào)～4號(hào)茶樹(shù)菇提取物樣品對(duì)二苯代苦味酰自由基、超氧陰離子自由基均有一定的抑制作用。從總體清除率上比較，分離純化后的提取物清除效果要好于粗提取物，可能的原因是二次提純后的提取物中，多糖、多酚和黃酮類物質(zhì)濃度更高，推測(cè)這些物質(zhì)是茶樹(shù)菇粗提物表現(xiàn)出抗氧化、抗疲勞功效的主要成分，而且隨著濃度的增加，抗氧化抗疲勞效果會(huì)增強(qiáng)[5]。

茶樹(shù)菇提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除效果較好，分析其主要原因可能是，超氧陰離子自由基是人體內(nèi)活躍的自由基，其氧化活性要高于其它自由基，即超氧陰離子自由基更加不穩(wěn)定，更容易和多糖的大分子發(fā)生一系列的自由基反應(yīng)，可以更快地打斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而減少這類自由基的生成；也可能是由于茶樹(shù)菇提取物中的黃酮、多酚等抗氧化成分所表現(xiàn)出的抗疲勞功效和抗氧化作用。