陸奉科，王 健*

（廣西醫(yī)科大學(xué)，廣西 南寧 530021）

乳腺癌目前已經(jīng)成為首要威脅女性健康的惡性腫瘤，近年來(lái)乳腺癌的檢測(cè)診斷技術(shù)和治療方案愈加受到重視。該腫瘤在女性患者中死亡率較高，且發(fā)病年齡越來(lái)越呈現(xiàn)出年輕化趨勢(shì)[1]。免疫組化技術(shù)能較好促進(jìn)病理診斷水平，研究對(duì)象Ki67是一種增殖細(xì)胞核抗原，是與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)，其功能與有絲分裂有關(guān)，是多種惡性腫瘤疾病重要生物標(biāo)志之一[2]，有研究表明，通過(guò)檢測(cè)Ki67抗原，能夠了解惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性，對(duì)疾病診斷治療及預(yù)后評(píng)價(jià)，均有較重要的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2018年6月～2019年6月間就診于柳州某三家醫(yī)院的患者共164例，均為女性，患者年齡（26-78歲）。對(duì)篩選樣本進(jìn)行分組，分組如下，是否浸潤(rùn)：非浸潤(rùn)性癌31例，乳腺浸潤(rùn)性癌133例；組織學(xué)分型：乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅰ級(jí)36例，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)～Ⅲ級(jí)88例；是否轉(zhuǎn)移：有轉(zhuǎn)移的38例；無(wú)轉(zhuǎn)移的126例。根據(jù)Ki67表達(dá)高低分為低表達(dá)組（Ki67＜14%）及高表達(dá)組（Ki67≥14%），其中低表達(dá)組38例，高表達(dá)組126例。

1.2 方法

所有操作步驟均嚴(yán)格遵守SOP文件，石蠟切片脫蠟、水化，自來(lái)水洗并浸泡于水中待用；取適量已稀釋成1:50的EDTA抗原修復(fù)液于高壓鍋進(jìn)行修復(fù)2 min；將切片放入3%過(guò)氧化氫溶液中浸泡10 min，自來(lái)水沖洗干凈；離組織3 mm處用免疫組化油筆畫(huà)圈；組織上加一滴Ki67抗體，室溫下孵育120分鐘或4℃過(guò)夜，PBS沖洗5次；滴加二抗，室溫下孵育20 min，PBS沖洗5次；DAB顯色，鏡下觀看顯色效果并終止反應(yīng)；蘇木素復(fù)染2 min；中性樹(shù)膠封固。

1.3 結(jié)果判定

所有標(biāo)本均由兩位以上經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師進(jìn)行診斷。每張切片取 10 個(gè)具有代表性的高倍視野，Ki67 蛋白陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核，顆粒呈棕黃色。采用相對(duì)定量法：計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比。若＜14%的細(xì)胞表達(dá)Ki-67 為陰性（-）；若≥14% 的細(xì)胞表達(dá) Ki67則為陽(yáng)性（+）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

表1 Ki-67在各型乳腺癌中的陽(yáng)性率比

（1）Ki67 蛋白異常表達(dá)與乳腺癌惡性程度是否浸潤(rùn)比較，P＞0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（2）乳腺癌細(xì)胞核分級(jí)的增加、乳腺癌是否組織轉(zhuǎn)移與Ki67蛋白異常表達(dá)結(jié)果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

隨著臨床上免疫組織化學(xué)技術(shù)得到廣泛應(yīng)用，病理醫(yī)生利用檢測(cè)技術(shù)可以提高診斷的準(zhǔn)確性，并有助于疾病的鑒別診斷。與傳統(tǒng)的病理HE染色技術(shù)相比，免疫組織化學(xué)技術(shù)在形態(tài)學(xué)診斷中更加具有直觀性、簡(jiǎn)便性，提高了診斷的特異性與準(zhǔn)確性，從而提高了診斷的效能。Ki67是一種核蛋白，位于人類Ki67基因定位在第10號(hào)染色體上，其與核糖體RNA轉(zhuǎn)錄有關(guān) ，Ki67的失活使核糖體RNA合成受限。Ki67在細(xì)胞增殖的各期（G1，S，G2和M）中均有表達(dá)，但在細(xì)胞靜止期G0期不表達(dá)，可以作為一個(gè)細(xì)胞增殖的相關(guān)標(biāo)記物。因此，在病理診斷報(bào)告中的指數(shù)高低與許多腫瘤分化程度、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后均有相關(guān)性。由于其主要表達(dá)在活躍的細(xì)胞周期階段，在細(xì)胞核內(nèi)的定位具有一定的特異性，并且隨細(xì)胞周期而改變，能被Ki67單克隆抗體染色的細(xì)胞核只有處于細(xì)胞周期的G1后期及以后的各活躍增殖期細(xì)胞，而處于靜止期的細(xì)胞核不會(huì)被染色，因此，Ki67成為目前非常理想的細(xì)胞增殖標(biāo)記物，更好的作為形態(tài)學(xué)結(jié)果的補(bǔ)充。

本研究結(jié)果顯示，Ki67高表達(dá)組中組織學(xué)分級(jí)Ⅱ、Ⅲ級(jí)的患者比例明顯高于低表達(dá)組，Ki67蛋白在乳腺癌組織轉(zhuǎn)移的樣本中表現(xiàn)為高表達(dá)水平，說(shuō)明患者結(jié)果增殖指數(shù)與腫瘤過(guò)度增殖、腫瘤分化程度較低有關(guān)，增加Ki67等免疫組化指標(biāo)檢測(cè)可以增加病理診斷的客觀性，提高結(jié)果報(bào)告的準(zhǔn)確性和特異性。Ki67表達(dá)高水平，反映腫瘤細(xì)胞增殖快，預(yù)后較差。目前國(guó)內(nèi)有相關(guān)報(bào)道 Ki67 高表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌有相關(guān)性，Ki67 可以在浸潤(rùn)性乳腺癌中作為判斷預(yù)后的指標(biāo)[3]，并有助于治療決策的制定，臨床上對(duì)其進(jìn)行化療后在對(duì)其預(yù)后評(píng)估過(guò)程中可將 Ki67 作為判斷的重要治療 , 進(jìn)而對(duì)化療效果進(jìn)行評(píng)估。但也有研究該指標(biāo)高表達(dá)與浸潤(rùn)性無(wú)明顯特異性相關(guān)性，本研究?jī)H限于單中心的回顧性分析，仍需擴(kuò)大研究范圍，增加研究數(shù)量，尚待更多臨床資料進(jìn)行進(jìn)一步的研究。