陸宏，陶杰，羅雪婷，黃宏波

昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管外科，云南昆明 650032

心力衰竭是常見的一種危害人類健康的病癥， 心肌細(xì)胞丟失是心力衰竭發(fā)生的根本原因， 這與人類的心肌細(xì)胞的實(shí)質(zhì)有密切的關(guān)系[1]。 心肌細(xì)胞實(shí)質(zhì)上是細(xì)胞的終末分化， 絕大部分人的心肌細(xì)胞在受到損傷后都不能通過迅速地增殖來得到恢復(fù)，因此，心力衰竭危害巨大。 目前治療心力衰竭的最有效辦法就是移植心臟， 但是有效的心源數(shù)量有限[2]。 而近年來，隨著生活方式、環(huán)境等的改變， 因?yàn)樾募〖?xì)胞受損而產(chǎn)生心力衰竭的患者數(shù)量正在急劇上升，心臟短缺的問題成為臨床上的重要研究話題，研究能解決目前心力衰竭治療中存在的問題方法具有重要的意義[3]。 再生醫(yī)學(xué)是近年來新晉的一種醫(yī)學(xué)模式，為心力衰竭患者的治療提供了新的思路。 利用再生醫(yī)學(xué)方法再生受損位置的心肌細(xì)胞成為心力衰竭治療方法的主要研究方向， 是徹底解決心力衰竭患者困難的最有希望的方法[4-5]。 探討心肌細(xì)胞具體的再生機(jī)制，創(chuàng)造出有效的治療心力衰竭的治療方法具有重要的意義， 該文以調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞與成年大鼠心肌細(xì)胞再生的關(guān)系為主題， 進(jìn)行了相關(guān)的研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

該實(shí)驗(yàn)所用的大鼠均為北京市維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。 使用德國(guó)美天旎公司生產(chǎn)的大鼠心臟解離試劑盒，Abcam 生產(chǎn)的Western 印跡中Foxp3 抗體，Sigma 公司生產(chǎn)的Masson 染色試劑盒，R&D Systems 生產(chǎn)的免疫組化Foxp3 抗體， 北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的GAPDH 抗體， BD 生產(chǎn)的高速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)FACSAria II ， Invitrogen 生產(chǎn)的Western 電泳儀，Zeiss生產(chǎn)的共聚焦顯微鏡、全自動(dòng)掃片機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 手術(shù)方法心尖切除手術(shù)： 研究組大鼠進(jìn)行心尖切除術(shù)， 對(duì)照組大鼠進(jìn)行假手術(shù)， 即手術(shù)操作均同研究組大鼠，只是不切除心尖。

1.2.2 測(cè)試法采用Western 印跡檢測(cè)Foxp3， 然后利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠心臟的T reg 細(xì)胞數(shù)目， 主要檢測(cè)CD25+、CD4+的細(xì)胞數(shù)目。 再測(cè)試T reg 細(xì)胞心肌再生能力之間的影響，在研究組大鼠的頸背部注入白喉毒素，連續(xù)為大鼠注射7 d，用免疫熒光染色檢測(cè)法檢測(cè)兩組的抑炎因子（IL-10、IL-13、TGF-α）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-α、IL -1β）、促炎因子（IL-1β、IL-6）數(shù)目。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組術(shù)后14 dFoxp3、CD25+、CD4+數(shù)、 抑炎因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、促炎因子數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t 檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組術(shù)后14 d Foxp3、CD25+、CD4+數(shù)比較

比較兩組手術(shù)后14 d 的Foxp3 和CD25+、CD4+數(shù)，研究組的Foxp3 和CD25+、CD4+數(shù)明顯多于對(duì)照組， 差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組術(shù)后14 d Foxp3、CD25+、CD4+數(shù)比較[（±s），%]Table 1 Comparison of the numbers of Foxp3, CD25+, and CD4+at 14 days after operation between the two groups[(±s)，%]

表1 兩組術(shù)后14 d Foxp3、CD25+、CD4+數(shù)比較[（±s），%]Table 1 Comparison of the numbers of Foxp3, CD25+, and CD4+at 14 days after operation between the two groups[(±s)，%]

組別 Foxp3 CD25+ CD4+研究組（n=20）對(duì)照組（n=20）t 值P 值7.34±1.72 5.34±1.25 3.643 0.001 23.34±2.72 15.34±2.42 8.510 0.001 25.32±2.61 14.32±2.41 11.992 0.001

2.2 兩組抑炎因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、促炎因子比較

比較兩組的抑炎因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、促炎因子，研究組的抑炎因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子明顯降低， 促炎因子明顯上升，治療后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組抑炎因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、促炎因子比較[（±s），pg/mL]Table 2 Comparison of two groups of anti-inflammatory factors,transforming growth factors,and pro-inflammatory factors[（±s），pg/mL]

表2 兩組抑炎因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、促炎因子比較[（±s），pg/mL]Table 2 Comparison of two groups of anti-inflammatory factors,transforming growth factors,and pro-inflammatory factors[（±s），pg/mL]

組別IL-10 IL-13 TGF-α IL-1β IL-6研究組（n=20）對(duì)照組（n=20）t 值P 值114.83±35.49 186.12±31.60 5.810 0.001 132.83±26.34 174.83±35.32 3.692 0.001 6.35±1.12 19.12±2.35 18.999 0.001 23.14±4.12 10.43±1.63 11.110 0.001 135.83±12.32 72.83±15.35 12.397 0.001

3 討論

探討解決心力衰竭的方法一直是醫(yī)學(xué)界的重點(diǎn)話題，而再生醫(yī)學(xué)的出現(xiàn)與繼續(xù)研究為其提供了新的思路，該文立足這一點(diǎn)對(duì)這一問題進(jìn)行了探討。 根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，低等級(jí)的脊椎動(dòng)物具有強(qiáng)大的心肌再生功能，如斑馬魚在切除20%的心尖組織后， 經(jīng)過2 個(gè)月的時(shí)間就可以保證心肌功能恢復(fù)到原來的正常水平， 此后有研究報(bào)道，老鼠具有更快的心肌恢復(fù)功能，成為開展心肌再生研究的理想模型[5-6]。 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞免疫抑制炎癥的功能在防治心血管方面疾病中有著重要的作用，有研究報(bào)道[7]，T細(xì)胞能增殖心肌細(xì)胞的再生功能， 能促進(jìn)胚胎心肌細(xì)胞的增殖，在女性懷孕期間也能有同樣的作用。 但是目前對(duì)于T 細(xì)胞和心肌再生功能方面的研究報(bào)道較少。 該文以這一問題為切入點(diǎn)， 研究T 細(xì)胞在心肌再生功能方面的作用。 該文以成年大鼠構(gòu)建成年大鼠心尖切除再生型，進(jìn)行了心肌細(xì)胞的再生功能和調(diào)節(jié)T 細(xì)胞的關(guān)系研究。

該文首先對(duì)研究組和對(duì)照組患者的T 細(xì)胞含量進(jìn)行了比較， 研究組患者的Foxp3、CD25+、CD4+含量分別為（7.34±1.72）、（23.34±2.72）、（25.32±2.61），而對(duì)照組相應(yīng)指標(biāo)含量分別為（5.34±1.25）、（15.34±2.42）、（14.32±2.41），這證明T 細(xì)胞和大鼠的心肌再生功能緊密相關(guān)，T 細(xì)胞能增殖心肌細(xì)胞的再生功能，能促進(jìn)胚胎心肌細(xì)胞的增殖，在王睿琪等[8]研究者的研究中，敲除TLR4 后，WT-control 組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等值依次為 （25.3±0.8）%、（17.8±0.8）%、（1.43±0.06）%，WT-ISO 組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+值依次為（29.1±1.0）%、（11.7 ±0.4%）、（2.49 ±0.11）%；WTISO-rHMGB1 組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+值依次為 （33.3±0.8）%、（10.3 ±0.4）%、（3.22 ±0.13）， 表明T 細(xì)胞和心肌再生功能存在緊密聯(lián)系，和該文研究結(jié)果相似。

研究者在調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞對(duì)心肌再生功能的研究中的研究結(jié)果相似。 而后，為了進(jìn)一步的明確T 細(xì)胞參與了心肌細(xì)胞的再生功能，該研究利用白喉毒素敲除了T 細(xì)胞，研 究 組IL-10、IL-13TGF-α、IL-1β、IL-6 含 量 分 別 為（114.83 ±35.49）pg/mL、 （132.83 ±26.34）pg/mL、 （6.35 ±1.12）pg/mL、（23.14±4.12）pg/mL、（135.83±12.32）pg/mL，對(duì)照 組 相 關(guān) 含 量 分 別 為 （186.12±31.60）pg/mL、（174.83±35.32）pg/mL、 （19.12 ±2.35）pg/mL、 （10.43 ±1.63）pg/mL、（72.83±15.35）pg/mL， 研究組的大鼠抑炎因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子明顯降低，促炎因子明顯上升，證明T 細(xì)胞功能缺失后，成年大鼠的炎癥反應(yīng)更為劇烈，心肌細(xì)胞的增殖功能受到明顯抑制， 最終結(jié)局將是導(dǎo)致成年大鼠丟失心肌再生功能， 由此證明，T 細(xì)胞和心肌再生功能存在密切聯(lián)系[9]。調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞以Foxp3、CD25、CD4 為表型特征，是一組具有免疫抑制功能的T 細(xì)胞亞群，包括Treg 細(xì)胞、T 輔助細(xì)胞，與人體的免疫調(diào)節(jié)功能存在密切的關(guān)系。 可以通過IL -10、IL-35、TGF-β 等因子，抑制T 細(xì)胞活化[10-11]。此外，還能通過對(duì)IL-2 受體產(chǎn)生作用，增殖T 細(xì)胞的活化。 當(dāng)敲除T 細(xì)胞后， 研究組的心肌增殖功能明顯受限則證明了這一點(diǎn)，這和王睿琪等[8]研究者認(rèn)為的T 細(xì)胞可調(diào)節(jié)心肌功能結(jié)果一致。

綜上所述， 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞與成年大鼠的心肌細(xì)胞再生功能存在密切的聯(lián)系， 對(duì)成年大鼠的心肌細(xì)胞有調(diào)控作用，能促進(jìn)心肌細(xì)胞快速增殖，促進(jìn)心臟修復(fù)，其細(xì)胞的數(shù)量和功能的強(qiáng)弱與成年大鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)呈反比，其調(diào)節(jié)功能減弱，大鼠體內(nèi)的抑炎因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子將明顯降低，促炎因子將明顯上升，炎癥反應(yīng)加劇，最終導(dǎo)致大鼠的心肌細(xì)胞再生能力缺失。