胡家碩 上?？_(dá)生物科技有限公司 上海市 200030

1 材料和方法

1.1 樣品

由上海崴環(huán)進(jìn)出口有限公司提供。人體口服推薦量為每日3次，每次1 粒，成人體重按60kg計(jì)算，折合劑量為0.013g/kg●bw。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及環(huán)境條件

SPF級(jí)雄性SD大鼠50只及飼料由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(湘)2009-0012。實(shí)驗(yàn)條件為屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度22°C～24°C,濕度50%～56%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK(湘)2010-0011 o

1.3 主要儀器與試劑

Beckman-Coulter au680全自動(dòng)生化分析儀；血清總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）試劑盒從上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)有限公司購(gòu)買(mǎi)；HDL-C和LDL-C試劑盒從寧波美康生物技術(shù)有限公司購(gòu)買(mǎi)。

1.4 模型飼料

在維持飼料中添加20.%蔗糖、15%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸 鈉，適量的酪蛋白等。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

釆用混合型高脂血癥動(dòng)物模型：

（1）劑量分組及受試樣品給予時(shí)間：設(shè)全葡萄提取物（含白藜蘆醇）三個(gè)劑量組分別為 0.065g/kg ●bw^ 0.130g/kg ●bw、0.390g/kg●bw (分 別 相 當(dāng)于人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍)，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組和模型對(duì)照組。低、中、高劑量受試液配制時(shí)，分別取樣品1.30g、2.60g、7.80g加蒸餡水定容至200ml,空白對(duì)照、模型對(duì)照組給予等體積蒸餡水，分別給予受試動(dòng)物灌胃，灌胃體積為1.0ml/100g.bw,每日一次，連續(xù)30 天；

（2）實(shí)驗(yàn)步驟：于屏障系統(tǒng)下大鼠喂飼維持飼料觀察5至7天，適應(yīng)期結(jié)束時(shí)，體重 達(dá)180g～220g,按體重隨機(jī)分成2兩組，10只大鼠給予維持飼料作為空白對(duì)照組，40 只給予模型飼料作為模型組。每周稱(chēng)體重一次。一周后,不禁食取尾血，用BECKMAN COULTER AU680全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TC、TG、HDL-C、LDL-C。根據(jù)TC水平將模型組動(dòng)物隨機(jī)分為四組即模型對(duì)照組和三個(gè)劑量組。分組后，空白對(duì)照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對(duì)照組及三個(gè)劑量組繼續(xù)給予模型飼料，同時(shí)按1.5.1劑量設(shè)計(jì)給各組受試動(dòng)物灌胃；

（3）指標(biāo)測(cè)定：每周稱(chēng)體重一次，于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)不禁食釆血，測(cè)定血清TC、TG、 HDL-C＞LDL-C 水平。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)由Excel和SPSS軟件提供分析了。首先，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，如果方差是齊次的，則采用單變量方差分析進(jìn)行總體比較。然后用Dunnett法計(jì)算多劑量組和模型對(duì)照組的平均值比較。如果方差不是齊次的，原始數(shù)據(jù)應(yīng)作相應(yīng)的變換。方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；如果變量轉(zhuǎn)換后的方差齊性目的沒(méi)有達(dá)到，則采用區(qū)間匯總檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)量，用T檢驗(yàn)比較模型控制組和盲稅組。

1.7 結(jié)果判定

（1）輔助降血脂功能結(jié)果判定：①各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，且任一劑量組血清甘油三酯降低，差異均有顯著性。②同時(shí)各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品輔助降低血脂功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

（2）輔助降低甘油三酯結(jié)果判定：①各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清甘油三酯降低，差異均有顯著性，②同時(shí)各劑量組血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對(duì)照組，血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對(duì)照組，可判定該受試樣品輔助降低甘油三酯功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

（3）輔助降低血清總膽固醇結(jié)果判定：①各劑量組與模型對(duì)照組比較，任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低，差異均有顯著性，②同時(shí)各劑量組血清 甘油三酯不顯著高于模型對(duì)照組，各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模 型對(duì)照組，可判定該受試樣品輔助降低膽固醇功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 樣品對(duì)大鼠體重的影響

見(jiàn)表1所列，實(shí)驗(yàn)后模型對(duì)照組動(dòng)物增重明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05),各劑量組動(dòng)物初、中、末期體重及增重與模型對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

表1 樣品對(duì)大鼠體重的影響

表3 實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠血清TG水平

表4 實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠血膏HDL-C水平

表 5 實(shí) 驗(yàn) 前 后各 組 大鼠 血 清 LDL-C水平

2.2 樣品對(duì)大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的影響

見(jiàn)表2～5所列，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，血清甘油三酯、血清總膽固醇及低 密度脂蛋白膽固醇明顯升高，差異均有顯著性(P＜0.05)，表明造模成功。實(shí)驗(yàn)后， 高劑量組大鼠血清甘油三酯和總膽固醇水平顯著低于模型對(duì)照組（P＜0.05），各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平與模型對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

3 結(jié)語(yǔ)

本 實(shí) 驗(yàn) 室 條 件 下，以0.065g/kg●bw＞0.130g/kg●bw、0.390g/kg,bw劑量的全葡萄提取物（含白藜蘆醇）給飼模型飼料的SD大鼠灌胃30天，與模型對(duì)照組比較，0.390g/kg●b、w劑量組大鼠血清甘油三酯和總膽固醇水平顯著降低（P＜0.05），但對(duì)血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平無(wú)明顯影響（P＞0.05），提示全葡萄提取物（含白藜蘆醇）對(duì)動(dòng)物具有輔助降血脂功能。