邢羅祝 李苗苗

前言

碘伏是在我們?nèi)粘Ｉ钪泻歪t(yī)院常用的一類消毒劑，具有廣譜殺菌作用，可殺滅細(xì)菌繁殖體、真菌、原蟲和部分病毒。一般用于皮膚黏膜的消毒，按不同的濃度可用于燙傷、陰道炎、器械浸泡的消毒等。本次實(shí)驗(yàn)是以碘和C12-18脂肪醇聚氧乙烯醚絡(luò)合物為主要成分的消毒劑，有效碘含量為4.0g/L-5.0g/L。我們采用了懸液定量殺菌法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來觀察本品的殺菌效果，結(jié)果報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1材料

1.1.1材料和設(shè)備 碘伏絡(luò)合劑、中和劑（1%硫代硫酸鈉+1%吐溫-80的TSB溶液）【1】、胰蛋白胨生理鹽水溶液（以下簡稱TPS）、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（以下簡稱TSA）、胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)基（以下簡稱TSB）、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（以下簡稱SDA）、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基（以下簡稱SDB）恒溫水浴鍋、生物安全柜、移液槍

1.1.2 試驗(yàn)菌株大腸埃希菌（CMCC（B）44102）、白色念珠菌（CMCC（F）98001）、金黃色葡萄球菌（CMCC（B）26003）以上菌種均來自北京三藥科技開發(fā)公司。

1.2 方法

1.2.1工作菌液制備 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌凍存菌分別接種到100ml的TSB中，在33℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18h-24h觀察生長狀態(tài);取白色念珠菌凍存菌接種到100ml的SDB中，在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h-36h觀察生長狀態(tài)。生長狀態(tài)良好的菌，放入4℃冰箱中，備用。

1.2.2 試驗(yàn)菌懸液的制備 將備用的工作菌液取出，細(xì)菌接種到100ml的TSB中，在33℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18h-24h;真菌接種到100ml的SDB中，在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h-36h。將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，并用TPS稀釋液稀釋配制成含菌量為1×108～5×108cfu/ml。

1.2.3中和劑鑒定試驗(yàn)【2】 將碘伏消毒劑稀釋到有效碘含量為2.0g/L-2.5g/L。試驗(yàn)菌懸液、培養(yǎng)基（細(xì)菌用TSA培養(yǎng)基、真菌用SDA培養(yǎng)基）、培養(yǎng)時(shí)間不同外，其他試驗(yàn)條件均相同。試驗(yàn)組如下。

試驗(yàn)結(jié)果符合符合以下全部條件，所測(cè)中和劑可判為合格：第1組無試驗(yàn)菌，或僅有極少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長;第2組較第1組為多，但較第3、4、5組為少的試驗(yàn)菌菌落生長。3、4、5 組菌數(shù)在 1×107 ～ 5×107cfu/ml之間，且組間菌數(shù)誤差率≦15%;第6組無菌生長，連續(xù)3次重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果一致，表明使用中和劑及其使用濃度適宜【2】。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

1.2.4懸液定量殺菌試驗(yàn)【2】 取0.5ml菌液加入4.5mlTPS稀釋液中將菌懸液濃度稀釋到1×108 ～ 5×108cfu/ml之間（實(shí)際稀釋到1×107 ～ 5×107cfu/ml）。消毒劑的濃度為2.0g/L-2.5g/L。試驗(yàn)菌懸液、培養(yǎng)基（細(xì)菌用TSA、真菌用SDA）、培養(yǎng)時(shí)間不同外，其他試驗(yàn)條件均相同。實(shí)驗(yàn)分組如下。

（1）取0.5ml試驗(yàn)菌懸液加入4.5ml的碘伏溶液中分別作用30s、60s、90s，取出0.5ml反應(yīng)液加到4.5ml的中和劑中，作用10min，取1.0ml接種培養(yǎng)（細(xì)菌33℃培養(yǎng)18h-24h，真菌25℃培養(yǎng)24h-36h），每個(gè)時(shí)間段平行兩組。

（2）陽性對(duì)照組：用TPS稀釋液代替碘伏消毒劑，進(jìn)行平行試驗(yàn)，平行兩組。

（3）取0.5ml試驗(yàn)菌液于平皿中，倒入同批次的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，觀察菌落生長狀態(tài)。

（4）取0.5ml試驗(yàn)菌液到4.5ml的中和劑中，混勻。取1.0ml接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察中和劑中的生長狀態(tài)。

（5）大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌在33℃培養(yǎng)18h-24h觀察;白色念珠菌在25℃培養(yǎng)24h-36h觀察。

（6）計(jì)算各組的活菌濃度（cfu/ml），換算為對(duì)數(shù)值（N），并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：

殺滅對(duì)數(shù)值（KL）=對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（No）-實(shí)驗(yàn)組活菌濃度的對(duì)數(shù)值（Nx）

試驗(yàn)結(jié)果見表2。

2.結(jié)果

2.1中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果

中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用含有1%的硫代硫酸鈉、1%的吐溫-80的TSB溶液做中和劑，其結(jié)果符合中和劑的測(cè)試結(jié)果判定：1組無菌生長;2組生長菌落遠(yuǎn)高于1組菌落;3組，4組，5組間菌數(shù)誤差率等于11.95%。所以可用1%的硫代硫酸鈉、1%的吐溫-80的TSB溶液做中和劑來進(jìn)行定量殺菌試驗(yàn)。

2.2 ?懸液定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，用含有效碘4.0g/L-5.0g/L的碘伏消毒液對(duì)懸液內(nèi)大腸埃希菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌不同作用時(shí)間的平均殺滅對(duì)數(shù)分別為7.26，6.05，7.23。

3. 討論

消毒是切斷傳染病和感染性疾病傳播途徑的重要手段，其中化學(xué)消毒劑的使用是最簡便、最普遍、也是最有效的方法之一，但每次重大傳染病流行期間化學(xué)消毒劑是使用最多的，很多人對(duì)于消毒劑的選擇也是盲目的。林立旺等提出疫情防控的消毒劑應(yīng)具備有效、供應(yīng)量大、廉價(jià)、使用方便、相對(duì)毒性較小等特點(diǎn)，不具有這些特點(diǎn)的可不予考慮。符合這些特點(diǎn)的消毒劑一般有過氧乙酸、過氧化氫、二氧化氯、含氯消毒劑和酒精，但是酒精可以用于局部消毒，因?qū)儆谝兹家妆圆豢梢源竺娣e噴灑，也不建議用于口罩表面消毒，會(huì)導(dǎo)致口罩降低或喪失過濾效果，碘類消毒劑則更多用于皮膚黏膜的消毒【5】。

碘伏是一種碘與表面活性劑為載體和助溶劑而形成的不定型絡(luò)合物，單方碘類消毒劑主要有聚醇醚碘和聚維酮碘兩大類為主。聚維酮碘是聚乙烯吡咯烷酮與碘的絡(luò)合物，聚維酮碘是唯一被中國、英國、美國和日本等國藥典收載，并準(zhǔn)許用于醫(yī)療衛(wèi)生和人體消毒的碘伏。聚維酮碘對(duì)皮膚刺激性小，毒性低，作用持久，使用安全簡便。聚醇醚碘是以壬基酚聚氧乙烯醚或脂肪醇聚氧乙烯醚作為載體與碘絡(luò)合而成的碘伏消毒液。試驗(yàn)證明，聚醇醚碘的化學(xué)穩(wěn)定性優(yōu)于聚維酮碘【6】。

在本次實(shí)驗(yàn)中的碘伏為碘和C12-18脂肪醇聚氧乙烯醚絡(luò)合物為主要有效成分的消毒液，在實(shí)驗(yàn)中該碘伏在30s和90s對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌的殺滅效果無差異。實(shí)驗(yàn)得出該碘伏對(duì)細(xì)菌和真菌都具有較強(qiáng)的殺滅能力。

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