鄒天雨，趙宇，馬莉，程為平*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

抑郁癥(Depression)屬于抑郁障礙的亞型之一[1]，以持久而顯著的情緒低沉、興趣缺失為主要特點(diǎn)，長時間心境障礙可伴有軀體癥狀的出現(xiàn)，在我國發(fā)病率已達(dá)到總?cè)藬?shù)的4.2%[2]。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制尚不明確，還停留在假說階段，其中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化被廣泛認(rèn)為是抑郁癥產(chǎn)生和轉(zhuǎn)歸的重要因素[3]，常用的抗抑郁藥物也是以影響神經(jīng)遞質(zhì)含量起效。前額葉皮質(zhì)負(fù)責(zé)調(diào)控情感，海馬負(fù)責(zé)認(rèn)知與記憶功能，應(yīng)激會使這兩個區(qū)域神經(jīng)元結(jié)構(gòu)被破壞，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)功能障礙，就會導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)分泌相對不足，進(jìn)而導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生。針灸治療抑郁癥具有安全、副作用小等特點(diǎn)且療效顯著[4]，而電針可保持持續(xù)的刺激量和作用時間，使神經(jīng)元釋放的神經(jīng)遞質(zhì)增加，以到達(dá)治療抑郁癥的目的。筆者結(jié)合多年臨床實(shí)踐，選用慢性不可預(yù)知溫和刺激(Chronic unpredictable mild stimulation, CUMS)模型，以電針百會及神庭穴為治療方法，檢測模型小鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化，探討其作用機(jī)理，為臨床推廣此方法提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

SPF級ICR小鼠48只，雌性8周齡，體質(zhì)量20～30 g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司。常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按數(shù)字隨機(jī)表將小鼠分為空白組、模型組、對照組(陽性藥物對照)和治療組(電針組)，每組各12只。

1.2 主要器材、試劑和儀器

安迪牌不銹鋼毫針(長25 mm、直徑0.25 mm)；華誼牌電針儀(型號：G6805-2A)；DB018型小鼠開場活動記錄系統(tǒng)(北京智鼠多寶科技)；去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)標(biāo)準(zhǔn)品(美國Sigma公司)；鹽酸氟西汀膠囊(百優(yōu)解，20 mg/粒，禮來蘇州制藥有限公司)；捷盛牌超低溫冰箱(DW-86L80);LICHEN牌臺式高低速離心機(jī)(LC-LX-HL210D);上海精科超高效液相色譜儀 (LC-210)。

1.3 構(gòu)建動物模型

除空白組外，其余3組進(jìn)行CUMS模型構(gòu)建，根據(jù)《神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》[5]中步驟進(jìn)行操作。動物在21 d的時間內(nèi)接受慢性、不可預(yù)知的溫和刺激。日間刺激包括強(qiáng)迫冰水游泳、搖晃鼠籠、束縛管束縛、胡椒粉等氣味刺激；夜間刺激包括持續(xù)燈光照射、鼠墊潮濕處理、傾斜鼠籠、禁食水24 h，每天從日間和夜間刺激方法中各挑選一種刺激對小鼠進(jìn)行處理，順序隨機(jī)，連續(xù)不重復(fù)，使小鼠不能夠預(yù)知刺激的出現(xiàn)。為減少不同應(yīng)激對行為和生化指標(biāo)的影響，測試當(dāng)天所有小鼠都接受相同刺激。

1.4 干預(yù)處理

造模完成后空白組及模型組均進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)。對照組進(jìn)行藥物灌胃，將20 mg的氟西汀研成粉末，加100 mL蒸餾水配制成懸濁液(0.2 mg/mL)，使用灌胃器將藥液由動物口直接注入到胃中，按0.3 mg/kg的劑量，連續(xù)灌服21 d。治療組根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[6]明確小鼠百會穴、神庭穴所處定位，以毫針分別向前平刺，深度約2 mm。采用 G6805 電針儀進(jìn)行電針干預(yù)，針柄末端連接導(dǎo)電線，正極連接百會穴、負(fù)極連接神庭穴，電壓2 V，疏密波，頻率1/20 Hz，每日1次，每次20 min，共治療21 d。

1.5 動物行為學(xué)觀察

記錄造模前、造模第21天及干預(yù)第21天的行為學(xué)數(shù)據(jù)。糖水消耗實(shí)驗(yàn)記錄小鼠禁食禁水24 h后, 給予10 g/L蔗糖水飲用24 h后糖水的消耗量。曠場實(shí)驗(yàn)記錄測定5 min內(nèi)各組小鼠水平運(yùn)動和垂直運(yùn)動的變化，以動物穿越底面的塊數(shù)為水平活動的得分?jǐn)?shù)，以直立次數(shù)為垂直活動的得分?jǐn)?shù)。將小鼠放入曠場箱正中, 以小鼠三足跨入鄰格的次數(shù)為水平活動得分, 以雙足離開底面直立次數(shù)為垂直活動得分。

糖水消耗量(%)=消耗糖水量/糖水總量×100%

1.6 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測定

干預(yù)完成后，取各組模型小鼠, 以4%水合氯醛按0.1 mL/10 g腹腔注射進(jìn)行麻醉，麻醉起效后將小鼠固定于鼠板上。將小鼠斷頭，經(jīng)顱前正中線剪開頭皮暴露顱骨，剪開枕骨，小心撬開顱骨，取出腦組織。冰盤上剝離大鼠腦組織后, 快速剪取前額葉與海馬組織, 稱重后液氮速凍后放入-80 ℃冰箱保存。取小鼠海馬區(qū)及前額葉腦組織，加入二羥基苯甲酸, 冰浴超聲勻漿30 s,13 500 r/min低溫4 ℃離心15 min, 將上清液采用高效液相色譜法測定不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、NE、DA的含量變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠糖水消耗實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

各組小鼠造模前糖水消耗無明顯差異(P>0.05)。造模第21天，模型組、對照組、治療組同空白組相比，糖水消耗量明顯下降(P<0.05)。干預(yù)第21天，對照組、治療組與模型組相比，糖水消耗量明顯升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠不同時期糖水消耗量比較

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

2.2 各組小鼠曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

各組小鼠造模前曠場實(shí)驗(yàn)水平及垂直運(yùn)動次數(shù)無明顯差異(P>0.05)。造模第21天，模型組、對照組、治療組同空白組相比，曠場實(shí)驗(yàn)水平及垂直運(yùn)動次數(shù)明顯下降(P<0.05)。干預(yù)第21天，對照組、治療組與模型組相比，曠場實(shí)驗(yàn)水平及垂直運(yùn)動次數(shù)明顯升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2和表3。

表2 各組小鼠不同時期曠場實(shí)驗(yàn)水平運(yùn)動次數(shù)比較次)

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

表3 各組小鼠不同時期曠場實(shí)驗(yàn)垂直運(yùn)動次數(shù)比較次)

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

2.3 各組小鼠前額葉皮質(zhì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化

與空白組對比，模型組小鼠前額葉皮質(zhì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量較少(P<0.05)，對照組、治療組與模型組相比，小鼠前額葉皮質(zhì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 各組小鼠前額葉皮質(zhì)神經(jīng)遞質(zhì)含量比較

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

2.4 各組小鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化

與空白組對比，模型組小鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量較少(P<0.05)，對照組、治療組與模型組相比，小鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 各組小鼠海馬區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)含量比較

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

3 討論

針刺治療抑郁癥的方法眾多且療效確切[7]。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，選用了電針百會及神庭穴的方法，以CUMS模型驗(yàn)證此方法有效性并探討可能的作用機(jī)制。根據(jù)實(shí)驗(yàn)中行為學(xué)結(jié)果顯示，CUMS模型降低了小鼠的糖水消耗量，而且減少了小鼠的自發(fā)運(yùn)動，貼近人類抑郁情緒下快感缺失和意志活動減弱的癥狀。對照組和治療組在干預(yù)后的數(shù)據(jù)變化，說明電針百會及神庭穴可以明顯改善抑郁小鼠的動物行為學(xué)。

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說被認(rèn)為是抑郁癥發(fā)生的最直接機(jī)制之一[8]，神經(jīng)信號的傳遞依賴于突觸間神經(jīng)遞質(zhì)的功能和含量，如果含量減少則會導(dǎo)致情緒調(diào)節(jié)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)被抑制，產(chǎn)生抑郁情緒[9]。5-HT可以調(diào)節(jié)人類情緒，DA與人的精神狀態(tài)有關(guān)，NE可以影響人類快樂感覺及應(yīng)激性反應(yīng)功能[10]。目前，包括氟西汀在內(nèi)的臨床常用藥物，大多是以突觸間隙中5-HT等遞質(zhì)含量增加為作用目的。所以理論上，任何增加腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的治療方法都可以起到一定的治療作用。對照組和治療組的小鼠腦內(nèi)5-HT、NE、DA含量明顯高于模型組，表明電針百會及神庭穴治療抑郁癥的作用機(jī)制之一，就是可以提高前額葉和海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量。前額葉皮質(zhì)是調(diào)控人類情緒的重要區(qū)域，海馬區(qū)與人類的認(rèn)知和記憶密切相關(guān)[11]。研究表明，抑郁癥患者的前額葉與海馬區(qū)呈現(xiàn)萎縮狀態(tài)，而經(jīng)過治療后可得到明顯改善[12]。

百會穴為諸陽之會，開竅醒神，振奮陽氣；神庭穴清散頭風(fēng)，鎮(zhèn)靜安神；此二穴皆屬督脈，提升陽氣。抑郁癥患者病初多氣滯實(shí)火之證，病久則陽郁神疲，由實(shí)轉(zhuǎn)虛，陽氣不足則腦神失養(yǎng)而發(fā)病。本實(shí)驗(yàn)以迎隨補(bǔ)瀉之補(bǔ)法刺入，電針連接以百會為正神庭為負(fù)，電流由百會穴流向神庭穴為補(bǔ)法，可激發(fā)陽氣，安神定志。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，腦的網(wǎng)絡(luò)功能也越來越清晰。有研究指出抑郁癥患者中央執(zhí)行網(wǎng)絡(luò)的功能連接異常，對情緒和認(rèn)知信息的加工和處理能力會下降[13]。中央執(zhí)行網(wǎng)絡(luò)主要包括前額葉、后頂葉等部分皮層[14]。根據(jù)解剖位置，百會與神庭穴分別位于后頂葉和前額葉的投射區(qū)，鐘慧[15]研究發(fā)現(xiàn)，針刺這兩個穴位會引起頂下小葉、額中回、額下回的腦功能活動活躍。陳華德等[16]發(fā)現(xiàn)針刺百會后海馬及海馬旁回信號增強(qiáng)。通過陳苑[17]的研究，可以說明5-HT與抑郁癥腦網(wǎng)絡(luò)的功能連接關(guān)系密切，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)可能是腦網(wǎng)絡(luò)功能連接的物質(zhì)基礎(chǔ)。電針百會及神庭穴很可能是通過提高腦功能區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)含量，繼而加強(qiáng)了中央執(zhí)行網(wǎng)絡(luò)等腦網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的連接。未來將進(jìn)一步探討抑郁癥患者腦網(wǎng)絡(luò)功能與針刺選穴的關(guān)系，驗(yàn)證電針百會及神庭穴的作用機(jī)制，為臨床治療此類疾病提供新的思路與方法。