歐陽婷，曾祥盛，羅恒真，廖祝元

(江西青峰藥業(yè)有限公司藥物研發(fā)中心，贛州341000)

為保障藥品安全、有效、質(zhì)量可控，人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議(ICH)對化學藥物中雜質(zhì)元素提出了研究要求與控制策略，從2018 年1 月1日開始正式實施雜質(zhì)元素指導原則(Q3D)，要求已授權(quán)上市及新注冊申請上市的化學藥品必須滿足雜質(zhì)元素限度要求。2017年6月，中國國家食品藥品監(jiān)督管理總局正式成為ICH 成員。因此，我國研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化的化學藥品中雜質(zhì)元素應(yīng)按ICH 相關(guān)指導原則(USP42-NF37)開展研究與質(zhì)量控制[1-3]。

拉考沙胺注射液已在歐洲、美國等地上市，用于治療成人、青少年和4歲以上兒童患者繼發(fā)性或非繼發(fā)性部分發(fā)作型癲癇[4-5]。本工作采用ICH Q3D中方法2a項，明確拉考沙胺注射液中元素每日攝入量的通用允許含量限值，并制定質(zhì)量標準。

本工作在文獻[6-9]的基礎(chǔ)上建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測定拉考沙胺注射液中鋰、釩、鈷、鎳、銅、砷、鎘、銻、汞、鉛等10種雜質(zhì)元素的分析方法，通過對產(chǎn)品中雜質(zhì)元素的定量控制，確保產(chǎn)品中雜質(zhì)元素控制在規(guī)定限度范圍內(nèi)，制定科學的質(zhì)量標準，并將超過雜質(zhì)元素含量限額30%的元素納入藥品質(zhì)量標準進行管控。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7800 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀；Milli-Q 型超純水系統(tǒng)。

砷、鎘、汞、鉛、金標準儲備溶液:1 000 mg·L－1。

釩、鈷、鎳標準儲備溶液:含100 mg·L－1釩、50 mg·L－1鈷、200 mg·L－1鎳。

鋰、銅、銻標準儲備溶液:含550 mg·L－1鋰、3 000 mg·L－1銅、1 200 mg·L－1銻。

金標準溶液:10 mg·L－1，移取1 000 mg·L－1的金標準儲備溶液1 m L置于100 m L容量瓶中，用5%(體積分數(shù)，下同)硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為測定過程中汞元素的穩(wěn)定劑。

稀釋劑:將10 mg·L－1金標準溶液0.5 m L 加入至1 L的5%硝酸溶液中，混勻。

內(nèi)標溶液:含2.5 mg·L－1锝、1.0 mg·L－1鈧、0.5 mg·L－1鍺、0.5 mg·L－1銦、0.5 mg·L－1鉍，以5%硝酸溶液為介質(zhì)。

混合標準溶液:分別移取適量的各元素標準儲備溶液置于100 m L 容量瓶中，用稀釋劑配制成含0.22 mg·L－1鋰、0.04 mg·L－1釩、0.02 mg·L－1鈷、0.08 mg·L－1鎳、1.2 mg·L－1銅、0.06 mg·L－1砷、0.01 mg·L－1鎘、0.48 mg·L－1銻、0.01 mg·L－1汞、0.02 mg·L－1鉛的混合標準溶液。

混合標準溶液系列:分別移取混合標準溶液0，1，2，5，10，20 m L，置于不同的100 m L容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。

陽性對照溶液:移取拉考沙胺注射液樣品1 m L和混合標準溶液5 m L，置于100 m L 容量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液:移取混合標準溶液5 m L，置于100 m L容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。

硝酸為優(yōu)級純；試驗用水為超純水(電阻率大于18 MΩ·cm)。

1.2 儀器工作條件

射頻功率1 550 W；蠕動泵轉(zhuǎn)速0.3 r·s－1；等離子氣流量15 L·min－1，輔助氣流量1 L·min－1，載氣流量1.01 L·min－1；重復3次；掃描100次；樣品提升時間60 s；樣品穩(wěn)定時間55 s。

1.3 試驗方法

每支拉考沙胺注射液凈重20.35 g，規(guī)格為每20 m L 200 mg。

移取拉考沙胺注射液樣品1.0 m L置于100 m L容量瓶中，加入稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液，按儀器工作條件進行測定，目標元素7Li、51V、59Co、60Ni、63Cu、75As、114Cd、121Sb、202Hg、208Pb 對應(yīng)的內(nèi)標同位素依次為45Sc、45Sc、69Ge、69Ge、69Ge、69Ge、115In、127Te、209Bi、209Bi。

2 結(jié)果與討論

2.1 待測元素之間的干擾

按照儀器工作條件對空白溶液、對照品溶液、樣品溶液、陽性對照溶液進行測定，考察待測元素之間的干擾情況，結(jié)果見表1，回收率為陽性對照溶液的響應(yīng)值與樣品溶液響應(yīng)值的差值除以對照品溶液響應(yīng)值，再乘以100%。

表1 待測元素之間的干擾情況Tab.1 Interference among the elements to be determined

由表1可知:各待測元素之間均無干擾。

2.2 標準曲線和檢出限

按儀器工作條件對加入內(nèi)標的混合標準溶液系列進行測定，并繪制標準曲線。10種元素的線性范圍、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。

連續(xù)測定11次空白溶液，以3倍標準偏差除以標準曲線斜率計算方法的檢出限(3s/k)，以10倍標準偏差除以標準曲線斜率計算方法的測定下限(10s/k)，結(jié)果見表2。

表2 線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和測定下限Tab.2 Linearity ranges，linear regression equations，correlation coefficients，detection limits and lower limits of determination

2.3 準確度和精密度

按試驗方法對空白拉考沙胺注射液樣品進行加標回收試驗，計算回收率和測定值的相對標準偏差(RSD)，結(jié)果見表3。

表3 準確度和精密度試驗結(jié)果(n＝6)Tab.3 Results of tests for accuracy and precision(n＝6)

由表3可知:回收率為95.2%～124%，RSD 為1.0%～2.5%。

2.4 樣品分析

按試驗方法對6批次商業(yè)拉考沙胺注射液樣品進行分析，結(jié)果見表4。

表4 樣品分析結(jié)果Tab.4 Analytical results of the samples μg·L－1

由表4可知:在多批次拉考沙胺注射液中，除鉛外，其余雜質(zhì)元素水平均低于雜質(zhì)元素含量限度的30%；砷在某些批次樣品中的含量接近其含量限度的30%。為確保用藥安全，將砷與鉛含量一并訂入拉考沙胺注射液質(zhì)量標準，限度分別定為80，40μg·L－1。低于含量限度30%的雜質(zhì)元素，可不列入質(zhì)量標準。

2.5 風險評估與質(zhì)量控制

歐洲、美國的藥品說明書中適應(yīng)癥患者的拉考沙胺注射液每日最大推薦劑量分別為600，400 mg。為控制用藥安全風險，采用歐洲藥品說明書中的每日最大推薦劑量。

從催化劑及無機試劑、原料藥、輔料、生產(chǎn)工藝及設(shè)備、容器及密閉系統(tǒng)、工藝用水等6個方面，對拉考沙胺注射液中雜質(zhì)元素的來源進行風險評估，風險評估結(jié)果見表5。

通過風險評估和每日最大推薦劑量，重點關(guān)注由容器及密閉系統(tǒng)引入的潛在雜質(zhì)元素砷和鉛，結(jié)合Q3D 要求，確定拉考沙胺注射液中各雜質(zhì)元素的每日允許暴露量與各雜質(zhì)元素含量限度，見表6。

拉考沙胺注射液為注射劑，在質(zhì)量控制及臨床應(yīng)用過程中，應(yīng)密切關(guān)注其中的雜質(zhì)元素在人體內(nèi)富集所導致的潛在性風險，并對多種雜質(zhì)元素潛在的來源實施過程控制。如果在藥品生命周期中發(fā)生原料藥合成路線、輔料供應(yīng)商、制劑工藝、設(shè)備、容器密封系統(tǒng)或設(shè)施等變更，藥品或組分的變更(這些變更可能潛在地影響拉考沙胺注射液中雜質(zhì)元素的含量)，應(yīng)對風險評估進行重新評價，已建立的雜質(zhì)元素控制方法也需重新確定。

表5 拉考沙胺注射液中雜質(zhì)元素來源的風險評估結(jié)果Tab.5 Results of risk assessment of the source of impurity elements in Lacosamide injection

表6 每日允許暴露量與含量限度Tab.6 Daily permissible exposure and limit of content

本工作采用ICP-MS 測定拉考沙胺注射液中10種雜質(zhì)元素的含量。本方法結(jié)合生產(chǎn)過程中雜質(zhì)元素控制策略，并通過藥品質(zhì)量生命周期管理，可從源頭控制產(chǎn)品中的雜質(zhì)元素，提高用藥安全水平。