氨基甲酸酯類農(nóng)藥是人類針對(duì)有機(jī)氯和有機(jī)磷農(nóng)藥的缺點(diǎn)而開發(fā)出的一種新型廣譜殺蟲、殺螨的除草劑，具有高效、低毒、選擇性高和持效期長等特點(diǎn)，主要用于糧食、蔬菜和水果等農(nóng)產(chǎn)品和中藥材栽培中，在我國使用越來越普遍[1-3]。然而，若不對(duì)氨基甲酸酯類農(nóng)藥的使用進(jìn)行監(jiān)控，任其隨意使用，就會(huì)造成人、畜中毒事件，其殘留對(duì)人、畜和環(huán)境都會(huì)產(chǎn)生極大的危害[4]。因此，許多國家和地區(qū)對(duì)這種農(nóng)藥在食物中的殘留量都制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。歐盟規(guī)定蔬菜中克百威的最高殘留量為0.02 mg·kg－1，呋線威的最高殘留量為0.05 mg·kg－1；我國規(guī)定涕滅威(包括涕滅威、涕滅威亞砜和涕滅威砜)在大部分蔬菜中的殘留限量為0.03 mg·kg－1，滅多威在蔬菜中的殘留限量為0.2 mg·kg－1。這就使得氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定倍受關(guān)注[5]。

目前，氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定方法主要有液相色譜-質(zhì)譜法[6-9]、使用柱后衍生-熒光檢測器的高效液相色譜法[10-11]、使用紫外檢測器的高效液相色譜法[12]和氣相色譜-質(zhì)譜法[13]。

由于液相色譜-質(zhì)譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法要用到價(jià)格高昂的測定設(shè)備，一般基層檢測機(jī)構(gòu)難以滿足，而使用紫外檢測器的高效液相色譜法所能測定的氨基甲酸酯類農(nóng)藥的種類偏少。因此，使用柱后衍生-熒光檢測器的高效液相色譜法是基層檢測機(jī)構(gòu)中較常用的測定氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的方法。文獻(xiàn)[4]采用超快速高效液相色譜法測定普通白菜中16種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量；文獻(xiàn)[14]建立了高效液相色譜法(柱后衍生)測定蔬菜、水果中的15種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的方法；文獻(xiàn)[15]建立了測定蔬菜和水果中常見的21種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的液相色譜法(使用柱后衍生-熒光檢測器)，而真正能實(shí)現(xiàn)分離的是18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。所報(bào)道的文獻(xiàn)中，要么對(duì)儀器設(shè)備要求較高，有些還是自制，要么所測定的氨基甲酸酯類農(nóng)藥的種類不夠多。

本工作采用高效液相色譜法測定蔬菜中涕滅威亞砜、涕滅威砜、殺線威、滅多威、3-羥基克百威、涕滅威、速滅威、殘殺威、克百威、甲萘威、滅殺威、乙硫苯威、硫雙威、抗蚜威、異丙威、仲丁威、甲硫威、猛殺威和呋線威等19 種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量，所用到的儀器設(shè)備都是基層檢測機(jī)構(gòu)所能普遍達(dá)到的，為基層檢測機(jī)構(gòu)開展相關(guān)方面的研究提供參考。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 Infinity 型高效液相色譜儀，配G1310B型四元泵、G1329B 型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱、G1321B 型熒光檢測器和PICKERING型柱后衍生裝置；Milli-Q Intrgral型水純化系統(tǒng)；Auto EVA-60型全自動(dòng)平行濃縮儀；B-400型均質(zhì)器；T25 型 高 速 勻 漿 機(jī)；12 位 固 相 萃 取 裝 置；0.22μm 有機(jī)相針式濾膜過濾頭；SPE-NH2固相萃取小柱(500 mg/6 m L)；Qu ECh ERs凈化柱。

殺線威、滅殺威、乙硫苯威、猛殺威和呋線威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:100 mg·L－1。

涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、3-羥基克百威、涕滅威、速滅威、殘殺威、克百威、甲萘威、硫雙威、抗蚜威、異丙威、仲丁威、甲硫威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:1 000 mg·L－1。

19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:10 mg·L－1，分別移取適量的上述19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋混合而成，冷凍避光保存。

鄰苯二甲醛(OPA)試劑:將100 mg OPA 和2 g巰基乙醇用適量水溶解后轉(zhuǎn)移至已去氧的OPA稀釋劑中，混合而成。

甲醇、二氯甲烷、乙腈均為色譜純；氯化鈉為分析純；試驗(yàn)用水為超純水(電阻率為18.2 MΩ·cm)。

1.2 儀器工作條件

1)衍生條件 水解試劑流量0.3 m L·min－1，OPA 試劑流量0.3 m L·min－1；水解溫度100 ℃，衍生溫度為室溫。

2)色譜條件 PICKERING Carbamate Analysis-C8色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，柱溫42 ℃；流量0.8 m L·min－1；進(jìn)樣量20μL。流動(dòng)相:A 為甲醇，B為水。梯度洗脫程序:0～12.0 min時(shí)，B 由80%降 至60%；12.0～20.0 min 時(shí)，B 由60%降至50%；20.0～30.0 min時(shí)，B 由50%降至41%，保持5.0 min；35.0～40.0 min時(shí)，B由41%降至0，保持6.0 min；46.0～46.1 min時(shí)，B 由0升至80%，保持5.9 min?？寡镣募ぐl(fā)波長(λex)為339 nm，發(fā)射波長(λem)為392 nm，其余18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的λex為339 nm，λem為445 nm。

1.3 試驗(yàn)方法

樣品經(jīng)均質(zhì)機(jī)均質(zhì)后，稱取約25 g均質(zhì)后樣品于150 m L燒杯中，加入50 m L乙腈提取，高速勻漿機(jī)勻漿2 min，然后經(jīng)快速濾紙過濾到已有5 g氯化鈉的100 m L比色管中，收集濾液。過濾完后，濾液渦旋混勻1 min，靜置分層。取上清液10 m L 置于全自動(dòng)平行濃縮儀中吹至近干。

用6 m L 的1%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲醇-二氯甲烷混合液預(yù)淋洗SPE-NH2固相萃取小柱，用2 m L的1%甲醇-二氯甲烷混合液溶解殘?jiān)?，上樣，再? m L的1%甲醇-二氯甲烷混合液分2次溶解殘?jiān)蠘?，收集洗脫液，氮吹至近干。殘留物?0%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲醇溶液定容至2.5 m L，過0.22μm有機(jī)濾膜后，按儀器工作條件進(jìn)行測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜行為

19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖1。

圖1 19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖Fig.1 Chromatograms of mixed standard solution of 19 carbamate pesticides

2.2 儀器工作條件的選擇

2.2.1 流動(dòng)相

試驗(yàn)采用PICKERING Carbamate Analysis-C8色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)進(jìn)行分離，考察了乙腈-水體系和甲醇-水體系作為流動(dòng)相時(shí)對(duì)19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥測定的影響。結(jié)果表明:乙腈-水體系作為流動(dòng)相時(shí)，19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的熒光值比甲醇-水體系為流動(dòng)相時(shí)19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的熒光值大很多，但是乙腈-水體系作為流動(dòng)相時(shí)，通過不斷改變流動(dòng)相比例，不能很好地分離殘殺威、克百威、甲萘威、滅殺威、乙硫苯威、硫雙威和抗蚜威。因此，試驗(yàn)選用甲醇-水體系作為流動(dòng)相，通過改變流動(dòng)相比例，能夠在46 min內(nèi)將19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行分離，梯度洗脫程序見1.2節(jié)。

2.2.2 流 量

試驗(yàn)考察了流量依次為0.8，1.0 m L·min－1時(shí)對(duì)19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥測定的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):流量為1.0 m L·min－1時(shí)，硫雙威不能與抗蚜威分離開，仲丁威和甲硫威不能達(dá)到基線分離。試驗(yàn)選擇流量為0.8 m L·min－1。

2.2.3 柱 溫

試驗(yàn)考察了柱溫依次為35，42，46℃時(shí)對(duì)19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥測定的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):柱溫為46 ℃時(shí)，殘殺威與克百威、仲丁威與甲硫威不能基線分離，硫雙威與抗蚜威分得較開；柱溫為35℃時(shí)，殘殺威與克百威、仲丁威與甲硫威分得較開，而硫雙威與抗蚜威不能分離，變成了一個(gè)峰。試驗(yàn)選擇柱溫為42 ℃。

2.2.4 測定波長

試驗(yàn)考察了λex＝330 nm，λem＝465 nm 和λex＝339 nm，λem＝445 nm 時(shí)對(duì)19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥測定的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):在λex＝339 nm，λem＝445 nm 時(shí)，19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的熒光值比在λex＝330 nm，λem＝465 nm 時(shí)的19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的熒光值大。因此，試驗(yàn)選擇測定波長為λex＝339 nm，λem＝445 nm。然而在試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，抗蚜威在此測定波長下熒光值較低。文獻(xiàn)[16]中，抗蚜威的最佳測定波長為λex＝317 nm，λem＝392 nm，然而在λex＝317 nm，λem＝392 nm 下，其他氨基甲酸酯類農(nóng)藥的熒光值很低。為了確定最佳的測定波長，試驗(yàn)采用多發(fā)射方案。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):抗蚜威在λex＝339 nm，λem＝392 nm 下的熒光值比在λex＝339 nm，λem＝445 nm 下的熒光值大了3 倍左右。試驗(yàn)中抗蚜威選擇λex＝339 nm，λem＝392 nm，其余18種氨基甲酸酯類農(nóng)藥選擇λex＝339 nm，λem＝445 nm。

2.3 樣品前處理方法

試驗(yàn)考察了SPE-NH2固相萃取小柱凈化和Qu ECh ERs凈化對(duì)19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥測定的影響。SPE-NH2固相萃取小柱的凈化方法見1.3節(jié)。Qu ECh ERs 凈 化 方 法 按 以 下 來 操 作:將10 m L乙腈提取液倒入Qu ECh ERs凈化包中，渦旋混勻1 min，以5 000 r·min－1轉(zhuǎn)速離心，移取6 m L上清液，氮吹至近干，用60% 甲醇溶液定容至1.5 m L，過0.22μm 有機(jī)濾膜，按儀器工作條件進(jìn)行測定。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SPE-NH2固相萃取小柱凈化的回收率要明顯高于Qu ECh ERs凈化的回收率。試驗(yàn)選用傳統(tǒng)的SPE-NH2固相萃取小柱凈化。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

用60%甲醇溶液將10 mg·L－1的19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋成0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1.0 mg·L－1的 混 合 標(biāo) 準(zhǔn) 溶液系列。按試驗(yàn)方法對(duì)上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行測定，以19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的線性范圍、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表1。

以3倍信噪比計(jì)算方法的檢出限(3S/N)，結(jié)果見表1。

表1 線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Tab.1 Linearity ranges，linear regression equations，correlation coefficients and detection limits

表1(續(xù))

2.5 回收試驗(yàn)

按試驗(yàn)方法對(duì)空白花菜樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，平行測定6次，計(jì)算回收率和測定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見表2。

表2 回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)Tab.2 Results of test for recovery(n＝6)

表2(續(xù))

由表2可知:回收率為47.7%～110%，RSD 為1.0%～12%。本方法能滿足蔬菜中19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定要求，其中乙硫苯威的回收率普遍偏低，主要原因是乙硫苯威在前處理過程中，容易轉(zhuǎn)變成另外一個(gè)未知物質(zhì)，該物質(zhì)有待進(jìn)一步研究。

空白花菜樣品加標(biāo)前后的色譜圖見圖2。

圖2 空白花菜樣品加標(biāo)前后的色譜圖Fig.2 Chromatograms of blank cauliflower sample before and after addition of standard

2.6 樣品分析

按試驗(yàn)方法對(duì)菠菜、生菜、蒲瓜、甘薯、韭菜、大白菜、黃瓜、四季豆、彩椒、辣椒、苦瓜、荷蘭豆、皇帝菜等樣品進(jìn)行分析，均未檢出19 種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

本工作以乙腈為提取溶劑，選用SPE-NH2固相萃取小柱凈化，采用高效液相色譜法測定蔬菜中19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。本方法測定范圍廣、分離度高、簡便、靈敏、高效，可滿足蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定需求。