束 彤，丁麗娜，王 茜，賈彩惠，邱亦亦，阮 暉,3,4,

（1.青海省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院，青海 西寧 810008；2.浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310058；3.浙江省農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310058；4.浙江大學(xué)寧波研究院，浙江 寧波 315100）

黑果枸杞（Lycium ruthenicumMurr.）具有抗氧化、抗疲勞、抗缺氧、輔助降血糖、降血脂、預(yù)防心血管疾病、免疫調(diào)節(jié)、抑菌等功效[1-4]。目前，對(duì)黑果枸杞所含天然產(chǎn)物的提取分離研究較多，例如采用超聲-微波協(xié)同萃取法提取黑果枸杞多糖[5]，采用大孔樹(shù)脂吸附、超聲-微波協(xié)同、超聲輔助雙水相、亞臨界水相等方法提取黑果枸杞色素、黃酮和花青素[6-11]，均獲得了較理想的得率，并且得到的天然產(chǎn)物也適合進(jìn)行微膠囊包埋[12]。對(duì)黑果枸杞所含天然產(chǎn)物定量分析方法包括高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法（定量測(cè)定黑果枸杞果實(shí)中花色苷）[13]、離子色譜法（定量測(cè)定黑果枸杞中甜菜堿）[14]、pH示差法（定量測(cè)定花青素）[15]等。對(duì)黑果枸杞所含天然產(chǎn)物的組分及其性質(zhì)也進(jìn)行了分析。王琪等[16]發(fā)現(xiàn)黑果枸杞干果和鮮果中多酚類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)多于紅枸杞。李進(jìn)等[17]發(fā)現(xiàn)黑果枸杞色素屬于花色苷類(lèi)，并研究了其在pH值、光、氧化劑、還原劑等因素下的穩(wěn)定性。樓舒婷等[18]采用固相微萃取與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合，從新疆枸杞、新疆黑果枸杞和青海黑果枸杞中共鑒定出50 種物質(zhì)，包括酯類(lèi)19 種、酮類(lèi)6 種、烯類(lèi)5 種、芳烴類(lèi)4 種、烷烴類(lèi)2 種、醛類(lèi)8 種、醇類(lèi)2 種、酸類(lèi)3 種和醚類(lèi)1 種。

從黑果枸杞所含天然產(chǎn)物中還分離鑒定出多種功效性物質(zhì)，包括具有強(qiáng)抗氧化性和免疫調(diào)理能力的糖苷和多糖[20-24]，以及種類(lèi)豐富的多酚。Chen Shasha等[25-26]采用超聲輔助從黑枸杞中提取了具有良好抗氧化性的酚類(lèi)物質(zhì)，通過(guò)HPLC識(shí)別出綠原酸、二羥基桂皮酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸5 種物質(zhì)，還發(fā)現(xiàn)黑枸杞中矮牽牛配基衍生物占97%的花青素具有抗氧化、神經(jīng)損傷修復(fù)、改善記憶等功效。Tang Jilong等[27]通過(guò)柱層析純化系統(tǒng)從黑枸杞中獲得矮牽牛配基花青素，顯示其具有抗氧化和保護(hù)PC12細(xì)胞（一種神經(jīng)損傷細(xì)胞模型）功效。Tang Peipei等[28]還發(fā)現(xiàn)，黑枸杞色素中，矮牽牛配基-蕓香葡萄糖苷是最主要的色調(diào)貢獻(xiàn)物質(zhì)，并可在寬泛pH值范圍內(nèi)給出豐富色調(diào)，具有作為天然食用色素的巨大潛力。

綜上所述，黑枸杞具有非常豐富的功效及相關(guān)活性成分，值得采用合適的分離制備與結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)進(jìn)行深入發(fā)掘。超臨界CO2萃取技術(shù)具有低溫提取、無(wú)有毒殘溶和可以選擇性分離等優(yōu)點(diǎn)，特別適合分離提取微量及穩(wěn)定性低的活性組分。目前解析黑枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮組分結(jié)構(gòu)的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究采用超高效液相色譜-質(zhì)譜（ultra-high performance liquid chromatographymass spectrometry，UPLC-MS）聯(lián)用技術(shù)分析單體化合物的質(zhì)譜裂解途徑并進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，借助PeakView軟件對(duì)質(zhì)譜碎片給出候選分子式，再用Chemdraw軟件推測(cè)拼接，推斷出黃酮化合物的結(jié)構(gòu)和裂解途徑，全面解析青海柴達(dá)木地區(qū)黑果枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮類(lèi)天然產(chǎn)物的組成和結(jié)構(gòu)，為黑果枸杞的高值化加工利用提供基礎(chǔ)性資料。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑果枸杞產(chǎn)于青海省柴達(dá)木地區(qū)。

乙醇（一級(jí)色譜純） 天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司；所有黃酮類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品（HPLC≥98%） 北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司；所有分離用有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

HGC-12A氮吹儀 天津恒奧科技發(fā)展有限公司；Centrifuge 5417R高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)艾本德股份公司；SFE-2超臨界CO2萃取儀 美國(guó)ASI公司；I-class UPLC儀 美國(guó)沃特世科技（上海）有限公司；Triple TOF 5600+型飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和PeakView色譜工作站） 美國(guó)AB SCIEX公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品溶液的制備

取適量黑果枸杞干果，置于烘箱中以55 ℃烘干，再用粉碎機(jī)粉碎至粒狀，過(guò)40 目篩，得黑果枸杞粉末。取適量黑果枸杞粉，裝入50 mL提取釜中，設(shè)置提取條件為萃取壓力35 MPa、萃取溫度45 ℃、提取時(shí)間1 h、出口閥溫度110 ℃。待萃取完畢，再以無(wú)水乙醇為夾帶劑，流速0.8 mL/min，按照相同的萃取條件，更換新的萃取瓶收集萃取液。待萃取完畢后，將萃取液溶解、濃縮、冷凍離心至合適濃度，過(guò)0.22 μm濾膜，待用。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備

分別稱(chēng)取槲皮素、二氫槲皮素、山柰酚、橙皮素、異鼠李素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并配制成每個(gè)組分約0.05 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，搖勻，過(guò)0.22 μm濾膜，備用。參考對(duì)照品的質(zhì)譜裂解特征，解析黃酮類(lèi)化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律。

1.3.3 UPLC-MS方法

色譜條件：色譜柱為安捷倫ZORBAX-SBC18（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）；以體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相A，以體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸-乙腈為流動(dòng)相B，線性梯度洗脫，系統(tǒng)程序：0～2 min、5% B，2～25 min、5%～50% B，25～33 min、50%～95% B；流速0.8 mL/min；柱溫35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；進(jìn)樣量5 μL。

質(zhì)譜條件：Triple-TOF 5600+飛行時(shí)間UPLC-MS儀，正負(fù)離子掃描模式；掃描范圍，m/z100～1 500；霧化氣（GS1）55 psi；霧化氣（GS2）55 psi；氣簾氣（CUR）35 psi；離子源溫度600（正）～550 ℃（負(fù)）；離子源電壓5 500（正）～4 500 V（負(fù)）；一級(jí)掃描，去簇電壓100 V，聚焦電壓10 V；二級(jí)掃描，使用TOF MS-Product Ion-IDA模式采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)，二級(jí)質(zhì)譜中的誘導(dǎo)碰撞解離能量為20、40 V和60 V，進(jìn)樣前，用校正泵做質(zhì)量軸校正，使質(zhì)量軸誤差小于2×10-6。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

有關(guān)數(shù)據(jù)及圖表均從測(cè)定儀器中自動(dòng)生成。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑果枸杞超臨界CO2萃取物中組分分離

圖1 黑果枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮的UPLC圖（A）及總離子流圖（B）Fig. 1 UPLC-UV chromatograms (A) and total ion current chromatograms (B) of the supercritical CO2 extract of black Goji fruit

如圖1所示，黑果枸杞的超臨界CO2萃取物中的主要活性成分得到有效分離。黃酮類(lèi)化合物在負(fù)離子模式下干擾較少，也易被離子化，碎片信息更為準(zhǔn)確，故本研究在負(fù)離子模式下，采用電噴霧離子源串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜結(jié)果，解析化合物裂解途徑，確定黑果枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮類(lèi)成分的結(jié)構(gòu)。

2.2 黑果枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮類(lèi)化合物的識(shí)別與結(jié)構(gòu)鑒定

采用PeakView軟件對(duì)質(zhì)譜碎片給出候選分子式，再用Chemdraw軟件推測(cè)拼接，推斷黃酮化合物的裂解途徑，以及與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)出峰時(shí)間（如果有匹配標(biāo)準(zhǔn)品），確定黃酮化合物的結(jié)構(gòu)。

為方便討論黃酮苷元及糖苷質(zhì)譜斷裂形成的碎片離子，本研究對(duì)黃酮類(lèi)化合物裂解后的特征碎片離子進(jìn)行了系統(tǒng)命名。如圖2所示，其中，對(duì)黃酮苷元，i,jA和i,jB分別表示該黃酮苷元的碎片包含A-環(huán)和B-環(huán)，上標(biāo)i和j顯示了C環(huán)上鍵的斷裂位置。對(duì)黃酮苷，k,lXj表示該碎片依然包括了黃酮苷元，下標(biāo)j表示第j個(gè)糖基上鍵的斷裂（從黃酮苷元數(shù)起），上標(biāo)k和l顯示了糖基環(huán)斷裂的位置。

圖2 本研究中裂解途徑所產(chǎn)生碎片的系統(tǒng)命名Fig. 2 Nomenclatures adopted for various retrocyclization fragments observed in this study

共鑒定出13 種黃酮類(lèi)化合物，按其結(jié)構(gòu)類(lèi)型可分為4 類(lèi)，其中包括7 種黃酮醇苷元及黃酮醇苷，3 種二氫黃酮醇苷元，2 種黃酮苷元和1 種二氫黃酮苷元，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黑果枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮類(lèi)化合物的鑒定結(jié)果Table 1 Main flavonoids identified in the supercritical CO2 extract

2.2.1 黃酮醇及其苷類(lèi)

化合物11、12、13、17、21、22、23推測(cè)皆為黃酮醇及其苷類(lèi)。

化合物11通過(guò)和蘆丁標(biāo)品出峰時(shí)間以及二級(jí)質(zhì)譜比對(duì)，確認(rèn)為蘆丁，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C27H30O16，相對(duì)分子質(zhì)量610。在負(fù)離子模式下，蘆丁產(chǎn)生分子離子峰m/z609[M-H]-，m/z609丟失一分子C10H18O8生成碎片m/z343，m/z609丟失C3上所連的糖苷即C12H20O9，得到m/z301，再通過(guò)連續(xù)丟失1 個(gè)H和一分子CHO得到碎片m/z300和m/z271，最后丟失一分子C5O2生成碎片m/z179。

化合物12經(jīng)推斷為槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C21H18O13，相對(duì)分子質(zhì)量為478。在負(fù)離子模式下，除了產(chǎn)生分子離子峰m/z 477外，還通過(guò)丟失葡萄糖醛酸苷得到碎片m/z 301，而碎片301則通過(guò)狄爾斯-阿爾德以應(yīng)（Retro Diels-Alder reaction，RDA）發(fā)生1,4B斷裂和RDA1,3A斷裂生成碎片m/z 179和碎片m/z 151，還可以通過(guò)丟失一分子CH2O2生成碎片m/z 255。二級(jí)質(zhì)譜中的碎片皆可由槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷通過(guò)相應(yīng)的鍵斷裂而得，并且槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷出峰時(shí)間和特征碎片一致。因此，化合物12推測(cè)為槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷。

化合物13經(jīng)推斷為金絲桃苷，即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C21H20O12，相對(duì)分子質(zhì)量為464。在負(fù)離子模式下，除了產(chǎn)生分子離子峰m/z 463外，還通過(guò)丟失吡喃半乳糖苷得到碎片m/z 301，碎片m/z 301通過(guò)連續(xù)丟失1 個(gè)H和一分子CHO得到碎片m/z 300和m/z 271，而m/z 271分別丟失1 個(gè)O和一分子CO生成碎片m/z 255和碎片m/z 243。二級(jí)質(zhì)譜中的碎片皆可由金絲桃苷通過(guò)相應(yīng)的鍵斷裂而得，并且和金絲桃苷出峰時(shí)間和特征碎片一致。因此，化合物13推測(cè)為金絲桃苷。

化合物17通過(guò)與槲皮素標(biāo)品的出峰時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜對(duì)比，可確定為槲皮素，其分子式為C15H10O7，相對(duì)分子質(zhì)量為302。除了產(chǎn)生分子離子峰m/z 301外，二級(jí)質(zhì)譜上主要的碎片有m/z 201、183等。這也跟其他農(nóng)產(chǎn)品中的槲皮素相關(guān)信息一致。

化合物21通過(guò)與山柰酚標(biāo)品的出峰時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜對(duì)比，可確定為山柰酚，其分子式為C15H10O6，相對(duì)分子質(zhì)量為286。山柰酚二級(jí)碎片較少，主要為m/z 268、239、187，m/z 268和m/z 239分別由m/z 285丟失一分子OH和一分子CH2O2得到，而m/z 187則是由碎片m/z 239丟失一分子C3O得到。

化合物22通過(guò)與異鼠李素標(biāo)品出峰時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜的對(duì)比，可確定為異鼠李素，其分子式為C16H12O7，相對(duì)分子質(zhì)量為316。在負(fù)離子模式下，除了產(chǎn)生分子離子峰m/z 315外，還通過(guò)丟失一分子CH3生成典型二級(jí)碎片m/z 300，再通過(guò)斷裂相應(yīng)的鍵得到碎片m/z 243、227、151等。

化合物23通過(guò)與山柰素標(biāo)品的出峰時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜的對(duì)比，可確定為山柰素，其分子式為C16H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為300。在負(fù)離子模式下，產(chǎn)生分子離子峰m/z 299，還通過(guò)丟失一分子CH3生成典型二級(jí)碎片m/z 284，再通過(guò)斷裂相應(yīng)的鍵得到碎片m/z 255、227、164、151等。

2.2.2 二氫黃酮醇及其苷類(lèi)

化合物14、15、16皆為二氫黃酮醇苷元。

化合物14為二氫槲皮素，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C15H12O7，相對(duì)分子質(zhì)量為304。其裂解途徑如下：分子離子峰m/z 303失去1 個(gè)H2O生成m/z 285；m/z 303失去1分子C3H2O3生成碎片m/z 217；m/z 217失去1 個(gè)H2O生成m/z 199，或丟失一分子C2H4O4生成m/z 125。二級(jí)質(zhì)譜中的碎片皆可由二氫槲皮素通過(guò)相應(yīng)的鍵斷裂而得，并且和之前報(bào)道的沙棘中的二氫槲皮素的出峰時(shí)間和特征碎片一致。因此，化合物14推測(cè)為二氫槲皮素。

化合物15為二氫異鼠李素，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，其分子式為C16H14O7，相對(duì)分子質(zhì)量為318。其裂解規(guī)律具體如下：分子離子峰m/z 317失去1 個(gè)CO生成m/z 289，而m/z 289可以通過(guò)丟失C4H2O2生成m/z 207，再丟失1 個(gè)CO生成m/z 179，或是m/z 179丟失CH2O生成m/z 149，或是丟失C2H2O生成m/z 137；m/z 317失去1 個(gè)CO2生成m/z 273，再連續(xù)丟失一分子C2H2O、C2H7O3生成碎片m/z 231、152；碎片m/z 273也可通過(guò)丟失一分子CH3生成m/z 258，再分別丟失一分子CO和C8H5O2生成碎片m/z 230、125，而碎片m/z 230通過(guò)丟失一分子C2H2O得到m/z 188。二級(jí)質(zhì)譜中的碎片皆可由二氫異鼠李素通過(guò)相應(yīng)的鍵斷裂而得，并且和之前報(bào)道的沙棘中二氫異鼠李素的出峰時(shí)間和特征碎片一致。因此，化合物15推測(cè)為二氫異鼠李素。

化合物16為二氫山柰酚，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C15H12O6，相對(duì)分子質(zhì)量為287。二氫山柰酚的二級(jí)碎片較少，除了分子離子峰m/z 287外，還產(chǎn)生幾個(gè)比較典型的二級(jí)碎片離子，如經(jīng)RDA斷裂生成m/z 151（1,3A），碎片m/z 151再分別丟失一分子H2O和1 個(gè)O生成碎片m/z 133和m/z 135，碎片m/z133通過(guò)丟失一分子C3O2得到碎片m/z 65，碎片m/z 135丟失一分子CO生成碎片m/z 107。二級(jí)質(zhì)譜中的碎片皆可由二氫山柰酚通過(guò)相應(yīng)的鍵斷裂而得，并且和之前報(bào)道的沙棘中的二氫山柰酚的出峰時(shí)間和特征碎片一致。因此，化合物16推測(cè)為二氫山柰酚。

2.2.3 黃酮苷元及其苷類(lèi)

化合物18、20為黃酮苷元。

化合物1 8通過(guò)與芹菜素標(biāo)品的出峰時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜的對(duì)比，可確定為芹菜素，其分子式為C15H10O5，相對(duì)分子質(zhì)量為270。在負(fù)離子模式下，除了產(chǎn)生分子離子峰m/z 269外，還通過(guò)丟失一分子CO2生成碎片m/z 225，丟失一分子H2O生成碎片m/z 149，或通過(guò)其他斷裂方式生成碎片m/z 121、117。

化合物20經(jīng)推測(cè)為苜蓿素，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C17H14O7，相對(duì)分子質(zhì)量為330。在負(fù)離子模式下，除了產(chǎn)生分子離子峰m/z 329外，再通過(guò)丟失一分子C6H8O3生成碎片m/z 201，再丟失一分子H2O生成碎片m/z 183，或分子離子峰直接丟失一分子H2O生成碎片m/z 311。以上之外，m/z 329通過(guò)連續(xù)丟失一分子CH3得到碎片m/z 314和m/z 299，m/z 299又連續(xù)丟失CO和C5H2O4得到碎片m/z271、145。二級(jí)質(zhì)譜中的碎片皆可由苜蓿素通過(guò)相應(yīng)的鍵斷裂而得，因此，化合物20推測(cè)為苜蓿素。

2.2.4 二氫黃酮苷元

化合物19通過(guò)與橙皮素標(biāo)品的出峰時(shí)間和二級(jí)質(zhì)譜的對(duì)比，可確定為成橙皮素，其分子式經(jīng)PeakView色譜工作站模擬，為C16H14O6，相對(duì)分子質(zhì)量為302。在負(fù)離子模式下，除了產(chǎn)生分子離子峰m/z301外，還通過(guò)丟失一分子CH3生成碎片m/z286，發(fā)生RDA以應(yīng)生成碎片151（1,3A）和碎片149（1,3B）；還通過(guò)其他斷裂方式生成碎片m/z201、107等。

2.3 化合物結(jié)構(gòu)圖及相關(guān)裂解途徑

以下是部分代表性化合物（化合物15和19）的二級(jí)質(zhì)譜圖和所推斷的裂解途徑（圖3、4），以及采用PeakView和Chemdraw軟件所繪出的黃酮化合物結(jié)構(gòu)（圖5）。

圖3 化合物15二氫異鼠李素的裂解途徑Fig. 3 Fragmentation pathway of dihydroisorhamnetin

圖4 化合物19橙皮素的裂解途徑Fig. 4 Fragmentation pathway of hesperetin

圖5 黑枸杞超臨界CO2萃取物中黃酮化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig. 5 Chemical structures of flavonoids identified in the supercritical CO2 extract

3 討論與結(jié)論

多酚（包括黃酮）是黑果枸杞所含天然產(chǎn)物中最重要的一類(lèi)。Zheng Jie等[29]在黑果枸杞甲醇提取物中識(shí)別出11 種花青素：矮牽牛素-3-O-半乳糖苷-5-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷、飛燕草素-3-O-蕓香糖苷、(順式對(duì)香豆酰基)-5-O-葡糖苷、飛燕草素-3-O-蕓香糖苷(以式對(duì)香豆酰基)-5-O-葡糖苷、矮牽牛素-3-O-蕓香糖苷(咖啡?；?-5-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-蕓香糖苷(順式對(duì)香豆?；?-5-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-蕓香糖苷(以式對(duì)香豆?；?-5-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷(蘋(píng)果?；?-5-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷(阿魏?；?-5-O-葡萄糖苷、錦葵素-3-O-蕓香糖苷(順式對(duì)香豆?；?-5-O-葡萄糖苷；Tian Zhihao等[30]在黑果枸杞中識(shí)別出9 種花青素：天竺葵素-3-O-半乳糖苷、天竺葵素-3-O-二葡萄糖苷、矢車(chē)菊素-3-O-半乳糖苷、矢車(chē)菊素-3,5-O-二葡萄糖苷、矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-(6-對(duì)香豆?；?-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-蕓香糖苷(以式-對(duì)香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷和矮牽牛素-3-O-蕓香糖苷(以式-對(duì)香豆?；?-5-O-葡萄糖苷；有研究者[31-32]在黑果枸杞乙醇提取物中識(shí)別出18 種多酚，包括2 種黃酮（兒茶素和柚皮素），7 種酚酸（沒(méi)食子酸、香草酸、2,4-二羥基苯甲酸、藜蘆酸、苯甲酸、鞣花酸和水楊酸），并且根皮素與原兒茶酸也被準(zhǔn)確測(cè)定，還在黑果枸杞中識(shí)別10 種花青素組分（飛燕草素-3-葡萄糖苷、矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷、錦葵素-3-葡萄糖苷、飛燕草素、矢車(chē)菊素、矮牽牛素、天竺葵素和錦葵素），其中矮牽牛素-3-葡萄糖苷占比最大，并發(fā)現(xiàn)黑果枸杞花青素提取物和矮牽牛素-3-葡萄糖苷在谷氨酸鈉誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)中發(fā)揮抗炎作用。在化學(xué)物數(shù)據(jù)庫(kù)Reaxys（https://www.reaxys.com）中，目前僅收錄4 種黑枸杞黃酮，即胡椒皮黃酮、山柰酚、山柰酚（蕓香苷）、二羥基桂皮酸。

本研究在黑果枸杞超臨界CO2萃取物中共識(shí)別出13 種黃酮化合物（7 種黃酮醇苷元及黃酮醇苷、3 種二氫黃酮醇苷元及黃酮醇苷、2 種黃酮苷元及黃酮苷和1 種二氫黃酮醇苷元，包括蘆丁、槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷、二氫槲皮素、二氫異鼠李素、二氫山柰酚、槲皮素、芹菜素、橙皮素、苜蓿素、山柰酚、異鼠李素、山柰素），與以往研究相比，組分譜有一定差異，特別是橙皮素和苜蓿素之前在之前對(duì)黑果枸杞的研究中還未被發(fā)現(xiàn)過(guò)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑果枸杞超臨界CO2萃取物中的黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行較全面地分析，綜合以往研究中采用其他提取媒介和分析手段所得出的研究結(jié)果，可以更加全面地詮釋黑果枸杞中的黃酮組分與結(jié)構(gòu)。