郭廷超，孟令波，梁悅，盧永平

（中國醫(yī)科大學(xué) 1.附屬生殖醫(yī)院男科；2.附屬生殖醫(yī)院檢驗(yàn)科；3.國家衛(wèi)健委生殖健康與遺傳醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽 110031）

Y染色體長(zhǎng)臂的微缺失與男性精子生精功能密切有關(guān)。這些微缺失主要發(fā)生在3個(gè)區(qū)域：無精子因子（azoospermia factor，AZF）a區(qū)、AZFb區(qū)和AZFc區(qū)。Y染色體上1個(gè)或多個(gè)AZF區(qū)域的缺失是男性不育最常見的遺傳原因之一，生精功能異常的程度通常取決于缺失的類型（位置）和缺失范圍［1］。本研究回顧性分析5例Y染色體AZFb區(qū)sY1192缺失患者精液常規(guī)、精漿生化、內(nèi)分泌激素、抑制素B、染色體情況，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 臨床資料

患者均是遼寧省計(jì)劃生育科學(xué)研究院門診因不孕不育就診的男性患者。其中1例精液常規(guī)正常；1例少精子癥；3例無精子癥伴內(nèi)分泌異常，其中1例無精子為克氏癥。

（1）精液常規(guī)分析：患者禁欲2～7 d，手淫法取精，患者近期無發(fā)熱、無酗酒，取精完全。少精子檢測(cè)2次間隔1個(gè)月。無精子間隔3周檢測(cè)3次，均離心鏡檢，同時(shí)脫落細(xì)胞染色檢測(cè)。（2）染色體核型分析：采集患者外周血進(jìn)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，G顯帶核型分析。（3）內(nèi)分泌激素檢測(cè)：患者上午8：00～10：00空腹采集靜脈血，化學(xué)發(fā)光法（羅氏發(fā)光儀cobas e602）檢測(cè)。（4）Y染色體微缺失檢測(cè)：采集患者外周血進(jìn)行抗凝處理，采用深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供的DNA提取試劑盒提取 DNA，采用多重 PCR 技術(shù)對(duì)15個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物采用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，5例患者均存在AZFb區(qū)sY1192缺失?；颊?為精液常規(guī)正常，患者2為少精子癥，患者3和4為無精子癥伴內(nèi)分泌異常，患者5為無精子癥伴克氏征。見表1。

3 討論

近年研究［2］發(fā)現(xiàn)Y染色體長(zhǎng)臂上含有與精子發(fā)生密切相關(guān)的基因，根據(jù)其在精子發(fā)生不同階段中的作用將其分為AZFa區(qū)、AZFb區(qū)和AZFc區(qū)。研究［3］表明，這些區(qū)域較易發(fā)生染色體重排，常表現(xiàn)為Y染色體微缺失，可能是由于Y染色體上同源序列較多引起的。Y染色體微缺失可影響生精功能，導(dǎo)致男性不育。生育問題的嚴(yán)重程度通常取決于缺失的類型（位置）和范圍。一般來說，AZFa區(qū)缺失與唯支持細(xì)胞綜合征（sertoli cell only syndrome，SCOS）或生精阻滯相關(guān)，AZFb區(qū)完全缺失與睪丸生精阻滯相關(guān)，而AZFa區(qū)部分缺失、AZFb區(qū)部分缺失和（或）AZFc缺失可導(dǎo)致廣泛的睪丸表型，包括SCOS、精子發(fā)生阻滯或少精子癥，偶見精液正?；颊?。目前，對(duì)于某些 AZF區(qū)部分缺失與生精障礙的相關(guān)性尚有爭(zhēng)論。本研究報(bào)道5例Y染色體AZFb區(qū)sY1192缺失，分別表現(xiàn)為生精正常、少精子和無精子。

表1 5例AZFb區(qū)sY1192缺失患者的臨床檢查結(jié)果

歐洲男科學(xué)會(huì)和歐洲分子遺傳學(xué)質(zhì)量網(wǎng)絡(luò)共識(shí)［4-5］推薦使用6個(gè)STS標(biāo)記檢測(cè)Y染色體微缺失，包括sY84和sY86（AZFa），sY127和sY134（AZFb），sY254和sY255（AZFc），可檢測(cè)臨床相關(guān)和研究報(bào)道的95%缺失類型。另外，采用額外的8個(gè)STS位點(diǎn)可以進(jìn)一步分析AZFa區(qū)和AZFb區(qū)是否發(fā)生區(qū)段的缺失，這些位點(diǎn)包括sY82、sY83或者sY1064（AZFa近端），sY1065、sY1182或 者sY88（AZFa遠(yuǎn) 端）；sY105、sY121或者sY1224（AZFb近端），sY143、sY1192或者sY153（AZFb遠(yuǎn)端）。本研究采用的試劑盒包括推薦的6個(gè)位點(diǎn)、8個(gè)拓展位點(diǎn)及異染色體標(biāo)簽（sY160）、SRY基因，可以提高AZF區(qū)域缺失的檢出率。

男性不育與Y染色體微缺失之間的聯(lián)系已明確，但Y染色體微缺失導(dǎo)致男性不育是否存在個(gè)體差異以及其作用機(jī)制尚未完全清楚。男性生精功能可能受Y染色體上特殊基因點(diǎn)突變、微重排和缺失等影響。由于Y染色體是以單倍體形式存在的，基因缺失有可能產(chǎn)生明顯的生物學(xué)效應(yīng)［6］。目前研究報(bào)道Y染色體部分缺失而臨床表型不一致患者，可能存在以下2種原因：（1）2個(gè)或多個(gè)STS位點(diǎn)可以判斷相應(yīng)AZF區(qū)的微缺失，而單獨(dú)1個(gè)STS位點(diǎn)缺失由于其斷裂點(diǎn)的不同存在多種可能性，與生精功能相關(guān)基因有可能并未缺失或者部分缺失，通過擴(kuò)展體系STS標(biāo)記，可以進(jìn)一步分析確認(rèn)缺失的存在和程度；（2）精子發(fā)生是多基因時(shí)序調(diào)控過程，除少量 Y染色體基因單獨(dú)缺失或突變能引起明顯效應(yīng)外，其他基因單獨(dú)缺失時(shí)并不會(huì)表現(xiàn)出明顯的表型效應(yīng)。另外，有研究［7］報(bào)道由于下游引物存在單核苷酸多態(tài)性，可能會(huì)造成部分缺失假陽性結(jié)果（亞洲人群特有）。

有研究［8］報(bào)道AZFb區(qū)部分缺失也可表現(xiàn)少精子癥，并且隨著年齡增加精子密度逐年降低。STOUFFS等［1］報(bào)道2例重度少精患者AZFb區(qū)大部缺失，僅sY1192位點(diǎn)保留，認(rèn)為sY1192位點(diǎn)可以作為睪丸活檢取精的重要標(biāo)志物。本研究患者1精液常規(guī)檢測(cè)正常，患者2表現(xiàn)為少精子癥，雖然都是sY1192位點(diǎn)缺失，但是可能缺失的范圍較小，精子發(fā)生相關(guān)的基因仍全部或者部分保留。而患者3、4、5表現(xiàn)為無精子癥，推測(cè)相關(guān)生精基因完全缺失，僅保留了相鄰的STS位點(diǎn)。另外，患者1和患者2不排除由于AZFb區(qū)sY1192的缺失而導(dǎo)致年齡依賴性、精子逐漸惡化的可能性。因而需要觀察診治過程中精液變化，有惡化趨勢(shì)可考慮進(jìn)行輔助生殖或冷凍精子。此外，建議AZF區(qū)缺失患者的兒子在青春期接受Y染色體微缺失檢測(cè)，并可能在成年早期冷凍精液［9］。

研究［10］表明，部分AZF缺失患者會(huì)出現(xiàn)內(nèi)分泌異常，表現(xiàn)為卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）增高、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）正?；蛏摺⒉G酮（testosterone，T）正?；蚪档?，精液表現(xiàn)為少精或無精。本研究無精子、少精子患者均表現(xiàn)T下降，F(xiàn)SH增高、LH正常或相應(yīng)不同程度的增高。與以往研究結(jié)果相近。這可能是Y染色體微缺失導(dǎo)致睪丸功能受損，反饋下丘腦-垂體-性腺軸，導(dǎo)致FSH、LH、T異常表現(xiàn)［11］。

綜上所述，本研究5例Y染色體AZFb區(qū)sY1192缺失患者臨床表現(xiàn)差異較大。Y染色體部分缺失與精子發(fā)生關(guān)系有待進(jìn)一步研究，需要大量臨床資料證實(shí)和長(zhǎng)期隨訪觀察。高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展推動(dòng)了男性不育相關(guān)基因研究，更多AZF缺失類型及其相關(guān)的其他基因突變將被發(fā)現(xiàn)［12］，為Y染色體微缺失與男性不育的研究、診療帶來更為精準(zhǔn)依據(jù)和指導(dǎo)。