張益，王琳，鄭佳鈮，王云冰*，洪莉，董軍

(1.臺(tái)州科技職業(yè)學(xué)院 農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院，浙江 臺(tái)州 318020； 2.臺(tái)州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 果樹研究所，浙江 臺(tái)州 371000)

甜櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)產(chǎn)自德國，是酸櫻桃與灰毛葉櫻桃雜交培育的品種。吉塞拉系列甜櫻桃砧木適應(yīng)性廣，矮化性強(qiáng)，表現(xiàn)突出，抗病能力強(qiáng)[1-2]，但南方甜櫻桃對(duì)氣候有極其嚴(yán)格的要求，常規(guī)種植方式育苗速度慢，生長狀況不夠理想，難以滿足市場需求。采用組織培養(yǎng)技術(shù)可有效解決育苗難的問題，已經(jīng)有大量的櫻桃或櫻桃砧木建立了組培體系[3-5]。南方地區(qū)缺乏甜櫻桃育苗技術(shù)，制約了甜櫻桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展的問題，為滿足南方地區(qū)對(duì)甜櫻桃種苗的迫切需求，本研究建立了一套適宜南方甜櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)組織培養(yǎng)快繁體系，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料為臺(tái)州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院的櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)，取其幼芽為外植體，幼芽取材時(shí)間為3月。

1.2 處理設(shè)計(jì)

1.2.1 外植體消毒

選晴朗天氣摘取生長健壯、無病蟲害的新生櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)的幼芽，采用1 000倍多菌靈溶液處理，并套袋保護(hù)15 d，剪下幼芽備用。選取飽滿幼芽，在肥皂水中清理干凈，用流水沖洗30 min以上；隨后在無菌條件下，用75%乙醇溶液浸沒幼芽，均勻晃動(dòng)進(jìn)行消毒，無菌水沖洗3～4次，每次約1 min，然后用0.1%的HgCl2溶液浸沒幼芽均勻晃動(dòng)進(jìn)行消毒，再用無菌水沖洗3～4次，瀝干備用。其中75%乙醇處理時(shí)間分別為30、45 s，0.1%的HgCl2溶液處理時(shí)間分別是6、8、10 min，具體處理為：T1，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl26 min；T2，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl28 min；T3，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl210 min；T4，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl26 min；T5，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl28 min；T6，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl210 min。

所有處理的外植體接種于MS+0.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂培養(yǎng)基上。每種處理15瓶，每瓶接種3株。10 d后統(tǒng)計(jì)污染率、褐化率和成活率。

1.2.2 培養(yǎng)基篩選

增殖培養(yǎng)以MS+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)以1/2MS+蔗糖30 g·L-1+6 g·L-1瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，pH值為5.8，在不同生長時(shí)期添加不同含量的激素。

增殖培養(yǎng)：選取健壯、生長勢良好的分化苗，接種到含不同激素的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。試驗(yàn)共設(shè)置6種增殖培養(yǎng)基，標(biāo)記為T7～T12。各培養(yǎng)基均以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，每個(gè)處理中NAA均為0.1 mg·L-1，T7～T9中KT為0 mg·L-1，6-BA分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1；T10～T12中，6-BA為0 mg·L-1，KT分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1。每種處理接種15瓶，每瓶接種3株。繼代培養(yǎng)30 d，統(tǒng)計(jì)分化苗的增殖率、株高和生長狀況。

生根培養(yǎng)：將株高約1.5～3.0 cm的健壯繼代增殖苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，試驗(yàn)設(shè)置6種生根培養(yǎng)基，標(biāo)記為T13～T18。各培養(yǎng)基均以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，每個(gè)處理中IAA均為0.1 mg·L-1，T13～T15中IBA為0 mg·L-1，NAA分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1；T16～T18中NAA為0 mg·L-1，IBA分別為0.3、0.5、0.8 mg·L-1。每種處理接種15瓶，每瓶接種3株，放置培養(yǎng)室進(jìn)行生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)30 d，統(tǒng)計(jì)瓶苗的生根長度、生根率和生長狀況。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒處理方式的影響

消毒劑對(duì)植物試驗(yàn)材料有一定程度的傷害，消毒時(shí)間長，雖然污染率會(huì)降低，但是褐化率會(huì)升高。由表1可知，同種消毒劑消毒不同時(shí)間對(duì)吉塞拉6號(hào)生長影響也不同。75%乙醇溶液消毒45 s，吉塞拉6號(hào)的成活率低于消毒30 s；隨著HgCl2處理時(shí)間的延長，污染率逐漸下降，成活率呈先增高后下降的趨勢。綜合考慮，以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min的消毒處理效果較好，成活率達(dá)90%。

表1 消毒方式對(duì)外植體消毒效果的影響

2.2 增殖培養(yǎng)基的影響

表2數(shù)據(jù)表明：吉塞拉6號(hào)在T7、T12培養(yǎng)基中增殖率均較高，分別為90%、95%；T12培養(yǎng)基中的苗生長旺盛，葉片嫩綠；T9培養(yǎng)基的分化苗增殖率最低，且葉片生長不良，生長速度慢，還有過度水化現(xiàn)象發(fā)生，玻璃化比較嚴(yán)重。表明6-BA明顯影響櫻桃砧木的增殖，易導(dǎo)致培養(yǎng)材料玻璃化，KT不易產(chǎn)生玻璃化，是良好的替代品。綜合考慮，增殖培養(yǎng)基以MS+0.8 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA為宜。

表2 不同增殖培養(yǎng)基對(duì)櫻桃生長的影響

2.3 生根培養(yǎng)基的影響

表3表明，吉塞拉6號(hào)在T17、T18培養(yǎng)基中生根率較高，分別達(dá)93%和91%，T17培養(yǎng)基內(nèi)的增殖苗生根速度快，一般7 d左右就有根長出，根長適宜，根系生長狀況良好，粗細(xì)適中，根系白，須根較多；T14培養(yǎng)基生根率最低，長根速度慢甚至不長根。IBA比NAA生根效果略好，綜合考慮，生根培養(yǎng)基以1/2MS+0.1 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1IBA為宜。

表3 不同生根培養(yǎng)基對(duì)櫻桃生長的影響

3 小結(jié)

以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min消毒處理為宜，誘導(dǎo)成活率可達(dá)90%，且生長良好；增殖培養(yǎng)基以MS+0.8 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA為宜，增殖率達(dá)95%，該培養(yǎng)基內(nèi)生長的分化苗健壯，生長旺盛；生根培養(yǎng)基以1/2MS+0.1 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1IBA為宜，生根率達(dá)93%。

消毒處理環(huán)節(jié)的消毒劑含量越高，污染率越低，褐化率越高，成活率越低。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，增殖培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素6-BA含量越高，分化苗玻璃化程度越高，達(dá)到0.8 mg·L-1就會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象；同時(shí)加入KT，玻璃化癥狀消失，這與組培中植物激素種類影響玻璃化發(fā)生的理論基本一致。在生根試驗(yàn)中，各個(gè)激素的種類和配比至關(guān)重要，是影響植株能否成活的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)分化苗的須根不多，這還要考慮到各方面因素，如基礎(chǔ)培養(yǎng)基的影響、是否需要添加活性炭和有機(jī)物、苗的生理狀態(tài)，以及培養(yǎng)的環(huán)境條件等因素。