黎敏 葉麗君 喻長(zhǎng)法 傅攀 薛玉峰

[摘要] 目的 探討血清磷酸化Tau蛋白（ P-tau-181）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和尿液中阿爾茨海默?。ˋD）相關(guān)神經(jīng)絲蛋白（AD7c-NTP）在AD患者中的表達(dá)及其臨床意義。 方法 選取 2017年1月～2019年6月在浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的76例AD患者為AD組，按照臨床癡呆量表評(píng)分將其分為輕度組26例，中度組29例，重度組21例。另選同期體檢的健康者35名設(shè)為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清中P-tau-181、IL-1β和尿液中的AD7c-NTP，比較各組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)水平，分析P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP對(duì)AD的診斷效能。 結(jié)果 AD組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量高于對(duì)照組（均P < 0.05）;重度組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量高于中度組、輕度組，中度組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量高于輕度組（均P < 0.05）;P-tau-181對(duì)AD的診斷曲線下面積（AUC）為0.898，IL-1β的AUC為0.851，AD7c-NTP的AUC為0.847，均具有較高的診斷價(jià)值。 結(jié)論 AD患者P-tau181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量升高，可作為AD臨床診斷的檢測(cè)指標(biāo)，同時(shí)還能對(duì)病變的嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)，具有重要的臨床意義。

[關(guān)鍵詞] 阿爾茨海默病;磷酸化Tau蛋白;白細(xì)胞介素-1β;阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白

[中圖分類號(hào)] R749.16 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2020）04（b）-0116-04

Expression and significance of P-tau-181， IL-1β and AD7c-NTP in patients with Alzheimer′s disease

LI Min1 ? YE Lijun2 ? YU Changfa3 ? FU Pan1 ? XUE Yufeng1▲

1.Department of Neurology， the First People′s Hospital of Taizhou， Zhejiang Province， Taizhou ? 318020， China; 2.Department of Blood Transfusion， the First People′s Hospital of Taizhou， Zhejiang Province， Taizhou ? 318020， China; 3.Department of Laboratory， the First People′s Hospital of Taizhou， Zhejiang Province， Taizhou ? 318020， China

[Abstract] Objective To explore the expression and clinical significance of serum phosphorylated tau protein （P-tau-181）， interleukin-1β （IL-1β） and urinary Alzheimer′s disease （AD） associated neurofilament protein （AD7c-NTP） in patients with AD. Methods A total of 76 patients with AD were selected as the AD group who were hospitalized in the Department of Neurology， Taizhou First People′s Hospital from January 2017 to June 2019. According to the clinical dementia scale score， they were divided into 26 cases in mild group， 29 cases in moderate group and 21 cases in severe group. A total of 35 healthy people who underwent physical examination at the same time were selected as the control group. Serum P-tau-181， IL-1β and AD7c-NTP in urine were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. The expression levels of P-tau-181， IL-1β and AD7c-NTP were compared in each group， and the diagnostic efficacy of P-tau-181， IL-1β and AD7c-NTP in AD were analyzed. Results The expressions of P-tau-181， IL-1β， and AD7c-NTP in AD group were higher than those in control group （all P < 0.05）. The expression levels of P-tau-181， IL-1β， and AD7c-NTP in the severe group were higher than those in the moderate and mild groups. The expression levels of P-tau-181， IL-1β， and AD7c-NTP in the moderate group were higher than those in the mild group （all P < 0.05）. The area under curve （AUC） of P-tau181 in the diagnosis of AD was 0.898， the AUC of IL-1β was 0.851， and the AUC of AD7c-NTP was 0.847. Conclusion The expression of P-tau-181， IL-1β and AD7c-NTP in AD patients is elevated， which can be used as a detection index for clinical diagnosis of AD， and it can also classify the severity of lesions， which has important clinical significance.

[Key words] Alzheimer′s disease; Phosphorylated tau protein; Interleukin-1β; Alzheimer′s disease-associated neurofilament protein

阿爾茨海默病（AD）是以進(jìn)行性加重的智力衰退為臨床表現(xiàn)的神經(jīng)病變疾病，是老年性癡呆發(fā)生的最主要原因[1]。AD致病的主要原因是大腦中Tau蛋白過(guò)度磷酸化導(dǎo)致神經(jīng)元纏結(jié)和大腦中β淀粉樣蛋白大量沉積構(gòu)成老年斑，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)元功能異常[2]。現(xiàn)有的AD診斷方法主要是核磁共振成像（MRI）、遺傳檢測(cè)一些蛋白質(zhì)的功能或其他病理檢測(cè)。這些方法費(fèi)用高，且不適合早期和大量人群篩查。隨著AD病因研究的不斷深入，侵入性較小、成本較低和高通量篩選人群患AD的風(fēng)險(xiǎn)的方法顯得尤為迫切[3]。本研究旨在研究血清磷酸化Tau蛋白（P-tau-181）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和尿液中AD相關(guān)神經(jīng)絲蛋白（AD7c-NTP）在AD患者中的表達(dá)及其臨床意義，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月～2019年6月在浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）神經(jīng)內(nèi)科住院的76例AD患者為AD組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①AD患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《精神病診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)》[4]中的標(biāo)準(zhǔn);②年齡≥60歲;③記憶能力或認(rèn)知功能下降≥6個(gè)月;④與研究對(duì)象簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①腦血管病史;②既往具有精神疾病病史;③聽(tīng)說(shuō)功能障礙;④合并嚴(yán)重的肝腎功能疾病、免疫性疾病、感染性疾病等。其中男40例，女36例;年齡60～88歲，平均（75.0±12.0）歲。按照臨床癡呆量表[5]評(píng)分將其分為輕度組26例，中度組29例，重度組21例。另選同期的健康體檢者35名設(shè)為對(duì)照組，其中男19名，女16名;年齡60～87歲，平均（73.5±11.5）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

清晨空腹采集靜脈血5 mL，3000 r/min（離心半徑8 cm）離心10 min，取上清液;尿液5 mL，3000 r/min離心10 min，取上清液，-80℃冰箱保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定血清中P-tau-181和IL-1β、尿液中AD7c-NTP。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)量資料以例數(shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡、受教育年限、高血壓、吸煙史和空腹血糖比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表1。

表1 ? 兩組一般資料比較（x±s）

2.2 兩組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量比較

AD組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量高于對(duì)照組（均P < 0.05）。見(jiàn)表2。

表2 ? 兩組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)比較（ng/L，x±s）

注：P-tau-181：磷酸化Tau蛋白;IL-1β：白細(xì)胞介素-1β;AD7c-NTP：阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白;AD：阿爾茨海默病

2.3不同程度AD患者P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量比較

重度組P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量高于中度組、輕度組，中度組P-tau181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)量高于輕度組（均P < 0.05）。見(jiàn)表3。

表3 ? 不同程度AD患者P-tau181、IL-1β

和AD7c-NTP表達(dá)量比較（ng/L，x±s）

注：輕度組比較，aP < 0.05;與中度組比較，bP < 0.05。P-tau-181：磷酸化Tau蛋白;IL-1β：白細(xì)胞介素-1β;AD7c-NTP：阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白;AD：阿爾茨海默病

2.4 P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP對(duì)AD的診斷效能評(píng)價(jià)

P-tau-181對(duì)AD的診斷曲線下面積（AUC）為0.898，IL-1β的AUC為0.851，AD7c-NTP的AUC為0.847，均具有較高的診斷價(jià)值。見(jiàn)表4和圖1。

3討論

隨著人口老齡化的加速，AD的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，目前進(jìn)行性癡呆影響著全球3560萬(wàn)人，預(yù)計(jì)到2050年將增長(zhǎng)兩倍多，AD已經(jīng)成為全球公共衛(wèi)生問(wèn)題[6]。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷，爭(zhēng)取更多治療或干預(yù)時(shí)間延緩AD的進(jìn)展十分關(guān)鍵。

P-tau-181蛋白是Tau蛋白磷酸化過(guò)程產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，當(dāng)Tau蛋白被過(guò)度磷酸化，喪失維持微管運(yùn)輸?shù)墓δ?，并形成神?jīng)纖維纏結(jié)，導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞受損，使患者出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙[7]。許多學(xué)者[8-11]認(rèn)為，腦脊液P-tau-181可作為AD患者診斷的標(biāo)志物。但腦脊液采集時(shí)對(duì)患者的損傷太大，有些患者不愿意配合。Shekhar等[12]采用等離了共振技術(shù)，檢測(cè)患者血清中P-tau-181的水平，證實(shí)AD患者P-tau-181濃度比對(duì)照組更高。Tatebe等[13]用ELISA測(cè)定AD患者血漿中的P-tau-181，AD患者P-tau-181顯著高于對(duì)照組，血漿P-tau-181的水平與腦脊液P-tau-181的水平顯著相關(guān)，提示血漿P-tau-181是腦AD病理學(xué)的有前途的生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，輕度組、中度組及重度組血清中P-tau-181蛋白的水平依次升高（P < 0.05），血清中P-tau-181蛋白的濃度異常情況與AD的嚴(yán)重程度有關(guān)，與郝建華等[14]報(bào)道一致。

IL-1β是一種常見(jiàn)的多功能免疫調(diào)節(jié)因子，在多種細(xì)胞中存在，對(duì)其他炎癥因子的表達(dá)起到誘導(dǎo)作用。對(duì)AD患者腦中IL-1β表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn)，AD患者腦內(nèi)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌出的IL-1β可以達(dá)到同齡健康對(duì)照組的30倍[15]。IL-1β結(jié)構(gòu)上包含了多個(gè)巰基結(jié)構(gòu)，在結(jié)合腦組織細(xì)胞膜糖蛋白表面受體的同時(shí)，促進(jìn)了自身免疫復(fù)合物沉積導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬作用，加劇病情進(jìn)展[16]。AD患者IL-1β血清水平顯著上調(diào)，炎癥在AD整個(gè)疾病過(guò)程中變得很明顯[17]。吳瓊等[18]研究結(jié)果顯示，AD患者血清中IL-1β水平顯著高于對(duì)照組，與其發(fā)病有密切的關(guān)系，是其對(duì)應(yīng)的致病因子。IL-1β過(guò)度表達(dá)可激活絲裂原活化蛋白激酶-P38信號(hào)通路和糖原合成激酶3，進(jìn)而誘導(dǎo)Tau蛋白異常磷酸化和合成神經(jīng)原纖維纏結(jié)[19-22]。

AD7c-NTP屬神經(jīng)絲蛋白家族的一個(gè)成員，是由375個(gè)氨基酸組成的基因序列，大小為41 kD，在神經(jīng)元中表達(dá)，定位于神經(jīng)細(xì)胞軸突，參與腦神經(jīng)元的修補(bǔ)、再生和凋亡等[23]。Wang等[24]建立人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型認(rèn)為AD7c-NTP對(duì)于早期診斷具有臨床價(jià)值，具有較高的準(zhǔn)確性和診斷效率，可以作為一種低成本、實(shí)用的大量人群AD篩查和診斷工具。AD患者AD7c-NTP表達(dá)水平的增加可能與其介導(dǎo)AD神經(jīng)退行性變化中細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān)，腦組織中AD7c-NTP的免疫反應(yīng)主要發(fā)生在退行性神經(jīng)元、營(yíng)養(yǎng)不良的軸突和神經(jīng)纖維網(wǎng)等磷酸化Tau蛋白呈陽(yáng)性的區(qū)域，其可能參與了Tau蛋白的累計(jì)過(guò)程，引起細(xì)胞骨架損傷進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)炎的發(fā)生和腦細(xì)胞的凋亡[25-26]。

綜上所述，AD患者P-tau-181、IL-1β和AD7c-NTP表達(dá)明顯升高，可作為AD臨床診斷的檢測(cè)指標(biāo)，同時(shí)還能對(duì)病變的嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)，具有重要的臨床意義。

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