徐笑天，王宇暉

（桂林醫(yī)學院，廣西 桂林 5410049）

0 引言

PPARγ 是一種可調(diào)節(jié)脂肪酸儲存和葡萄糖代謝的配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子，在多種癌細胞的增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移中有著重要作用[1-2]。PPARγ 激動劑羅格列酮及吡格列酮經(jīng)過多項研究發(fā)現(xiàn)它們作為癌細胞的抗轉(zhuǎn)移藥物有著巨大的潛力，然而長期使用羅格列酮會引起一些不良反應，例如體重增加，體液潴留和患心臟病的風險增加。本團隊合成一種新型的PPARγ 激動劑，有望成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的創(chuàng)新性藥物。

1 材料與方法

1.1 儀器。Prominence UFLC+ LCMS -2020 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本Shimadzu 島津有限公司）XS105DU 電子天平（瑞士METTLERTOLEDO 梅特勒托利有限公司）；GENEX 單道可調(diào)移液器（上海寶予德科學儀器有限公司）；Medium-S800UVF 實驗室純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）

1.2 試劑。所有化學品和溶劑（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）均為試劑級，并在使用前通過標準方法純化。

1.3 合成路線。合成路線如圖1 所示。

圖1 VSP-17 的合成路徑

1.3.1 1-對三氟甲基苯甲烷-吲哚-5-羧酸甲酯（3）的合成：在0℃下將NaH（60%礦物油分散體，11.0 mmol）分批加入1H-吲哚-5-羧酸甲酯（1）（1.89 g，10.0 mmol）的無水DMF（10mL）溶液中，在0℃下邊加邊攪拌，30 分鐘后，加入1-溴甲基-4-三氟甲基苯（2）（2.88 g，12.0 mmol），在室溫下攪拌24 小時后，待反應混合物冷卻至室溫，將其倒入100 mLH2O 中并用100 mLEtOAc 進行萃取。有機相用無水Na2SO4干燥，減壓蒸發(fā)溶劑后，用EtOAc/石油醚（1:9）在硅膠柱上純化粗產(chǎn)物，得到白色純凈固體1-對三氟甲基苯甲烷-吲哚-5-羧酸甲酯（3）（2.94g，80%）[3]。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ8.29（d，J=1.6 Hz，1H），7.76-7.65（m，4 H），7.55（d，J=8.7 Hz，1 H），7.36（d，J=7.9 Hz，2H），6.74-6.66（m，1 H），5.60（s，2H），3.83（s，3 H）。1.3.2 1-對三氟甲基苯甲烷-吲哚-5-羧酸（4）的合成：將（3）（1.67g，5.0 mmol）和5MNaOH 溶液（5mL）加入20 mLTHF 懸浮液中，在50℃下攪拌至原料耗盡，在其達到室溫后，加入2MHCl，用50 mLEtOAc 稀釋并用鹽水洗滌。用無水Na2SO4干燥合并后的有機相。減壓蒸發(fā)溶劑后，在快速色譜上純化粗產(chǎn)物，得到白色固體產(chǎn)物（4）（1.41 g，88%）[4]。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ12.47（s，1H）），8.26（s，1 H），7.76-7.66（m，3 H），7.65（d，J=3.2 Hz，1 H），7.51（d，J=8.6 Hz，1 H），7.36（d，J=8.1 Hz，2 H），6.68（d，J=3.1 Hz，1 H），5.60（s，2H），1.39（s，2H）。

1.3.3 VSP-17 的 合 成：在0 ℃下 向 產(chǎn) 物（4）（1.60 g，5.0 mmol）的無水DMF（20 mL）溶液中加入2.0 當量的DMAP（1.22 g，10 mmol）和2.0 當 量 的BOP（4.42 g，10 mmol），冰浴條件下攪拌0.5 小時后，加入1.2 當量的吡啶-4-甲基甲胺5（0.65 g，6.0 mmol），攪拌反應直至所有原料耗盡，然后將混合物倒入10%HCl 水溶液中，用EtOAc萃取水相2 次，用無水Na2SO4干燥合并的有機相并真空濃縮，用快速色譜（硅膠，己烷/乙酸乙酯=2/1）純化得到所需無色固體產(chǎn)物VSP-17（1.64 g，80%）[5-7]。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ8.59-8.51（m，2 H），7.83-7.77（m，2H），7.65（d，J=8.1 Hz，2 H），7.58-7.52（m，2 H），7.25-7.22（m，2 H），7.04-6.96（m，2H），6.63（t，J=6.0 Hz，1H），5.17（s，2 H），4.64（d，J=6.0 Hz，2 H）。HRMS（ESI）m/z[M+H]+的計算值為：410.1480，實測值為：410.1478[M+H]+。

1.4 TR-FRET 測試。TR-FRET 測試結(jié)果如圖2 所示。

2 結(jié)果

2.1 合成。通過酰胺化和芐基化兩步反應所得到的化合物產(chǎn)率和純度（純度≥98%）較高。

2.2 生物活性。如圖2 所示，TR-FRET 測定結(jié)果證明GVS-12 與PPARγ 結(jié)合的動力學抑制常數(shù)（Kinet icinhibition constant，Ki） 為0.27μM， 表 明VSP-17 可 以 激 活PPARγ。

圖2 利用Cos-7 細胞進行熒光素酶報告基因測試VSP-17 的PPARγ 激活作用（n=3，）

3 結(jié)論

化合物VSP-17 的合成原料簡單易得，終產(chǎn)物產(chǎn)率、純度高，TR-FRET 測定結(jié)果也證明VSP-17 可以激活PPARγ。

4 討論

我們結(jié)合了羅格列酮以及新型PPARγ 調(diào)控劑SR1664的結(jié)構(gòu)特點，并且根據(jù)它們與PPARγLBD 晶體復合物作用形式，規(guī)避產(chǎn)生副作用的結(jié)合位點，設計合成具有全新母核的化合物VSP-17，為后期順利開展全面的動物活性、毒理、藥代等臨床前評價提供保障[8]。