馮雪，李帥，李野，曹宇，楊紅育

（長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，吉林長春 130012）

注射用重組人干擾素α2b是由高效表達(dá)該干擾素基因的大腸桿菌經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人干擾素α2b凍干制成，含適宜穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素[1]。水分是注射用重組人干擾素α2b的一項(xiàng)重要指標(biāo)，需要對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。測(cè)定水分的方法有很多，卡爾·費(fèi)休法自Karl Fischer于1935年發(fā)明后，已成為世界公認(rèn)的水分測(cè)定的經(jīng)典方法之一[2-5]。有文獻(xiàn)表明[6-8]，卡爾·費(fèi)休容量滴定法的影響因素較多，其中環(huán)境濕度是導(dǎo)致費(fèi)休氏法滴定出現(xiàn)誤差的常見因素之一。當(dāng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境中空氣相對(duì)濕度低于40%時(shí)，水分測(cè)定儀漂移值基本穩(wěn)定，但隨著實(shí)驗(yàn)環(huán)境中空氣濕度的不斷增大，測(cè)定結(jié)果也隨之增大。注射用重組人干擾素α2b為水溶性凍干制劑，在測(cè)定水分過程中，樣品的前處理過程也會(huì)受到環(huán)境濕度的影響。本文通過稱量法和卡爾·費(fèi)休容量滴定法測(cè)定該藥品在不同相對(duì)濕度下增的水分含量，對(duì)該藥品水分測(cè)定過程中空氣相對(duì)濕度的影響進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

乙酸鉀（分析純；含量≥92.0%）、氯化鎂（分析純；含量≥98.0%）、碳酸鉀（分析純；含量≥99.0%）、溴化鈉（分析純；含量≥99.0%）、氯化鈉（分析純；含量≥99.5%）均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

XS205型電子天平、V30水分測(cè)定儀和Stromboli卡氏干燥爐均購自梅特勒-托利多。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品

注射用重組人干擾素α2b由長春生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為B20190501、B20190502、B20190503。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 稱量法

取5個(gè)玻璃干燥器，配制5種無機(jī)鹽的飽和溶液[9-10]，鹽的種類及其在25 ℃和30 ℃下的濕度見表1。為避免卡氏樣品瓶在實(shí)驗(yàn)過程中吸濕對(duì)測(cè)定產(chǎn)生影響，放置樣品前先將卡氏樣品瓶分別放入干燥器中干燥至恒重。

將樣品搗碎，倒入已恒重的卡氏樣品瓶中，精密稱量（精確至0.01 mg），記錄樣品和卡氏樣品瓶的總質(zhì)量。再將其分別放置于上述干燥器中10 min，精密稱定（精確至0.01mg），記錄總質(zhì)量。兩次稱量之差即為樣品增加的水含量。

表1 飽和無機(jī)鹽溶液濕度對(duì)照表

1.3.2 卡爾·費(fèi)休容量滴定法

1.3.2.1 操作條件

卡氏干燥爐加熱溫度：（150±2）℃；卡氏干燥爐加熱時(shí)間：10 min；費(fèi)休氏試液滴定度：1 mg/mL；載氣：高純氮。

1.3.2.2 測(cè)定方法

分別在環(huán)境濕度為27%及42%條件下測(cè)定樣品，每批樣品連續(xù)測(cè)定6次。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濕度下稱量法測(cè)定樣品增加水含量的差異

如圖1所示，通過測(cè)定不同相對(duì)濕度下樣品增加的水含量，觀察到樣品在飽和溴化鈉溶液（55.6%～58.0%）和飽和氯化鈉溶液（74.9%～75.5%）中水含量增加較多，在飽和乙酸鉀溶液（21.0%～22.9%）中增加最少，在飽和氯化鎂溶液（32.2%～33.0%）及飽和碳酸鉀溶液（42.7%～43.6%）中增加量幾乎相同。樣品水分含量隨著空氣濕度的增大而增大。

圖1 不同相對(duì)濕度下稱量法測(cè)定樣品增加的水含量

2.2 不同濕度下卡爾·費(fèi)休容量滴定法測(cè)定樣品水分的差異

如表2所示，通過平均值比較，同一批號(hào)的樣品采用卡爾·費(fèi)休容量滴定法在環(huán)境濕度為27%及42%條件下，測(cè)得水分含量無顯著差異，這說明環(huán)境濕度對(duì)卡爾·費(fèi)休容量滴定法測(cè)定樣品水分沒有明顯影響。

3 結(jié)論

采用稱量法和卡爾·費(fèi)休法測(cè)定不同濕度條件下注射用重組人干擾素α2b樣品中的水分含量。發(fā)現(xiàn)使用稱量法時(shí)，隨著空氣濕度的增大，樣品含水量也隨之增大，空氣濕度對(duì)水分含量的影響較大；使用卡爾·費(fèi)休法時(shí)，不同濕度條件下測(cè)得的水分含量無明顯差別。說明卡爾·費(fèi)休法可以更為準(zhǔn)確地測(cè)定重組人干擾素α2b樣品中的水分含量。

表2 不同環(huán)境濕度下卡爾·費(fèi)休容量法測(cè)定樣品水分含量