那 亞， 陶 雅， 渠 暉， 格根圖， 孫啟忠， 王加亭

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)草原與資源環(huán)境學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010011；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特010019；3.全國(guó)畜牧總站，北京 100125）

近年來(lái)，飼料資源短缺已成為制約我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展的重要因素(馬健等，2016），對(duì)此，開(kāi)發(fā)人工栽培高產(chǎn)高效、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的飼料作物，同時(shí)利用多種形式的飼草料調(diào)制方式，是解決我國(guó)粗飼料短缺的重要途徑，也符合“十三五”以來(lái)國(guó)家提出的大力發(fā)展“草牧業(yè)”與“糧改飼”等方針戰(zhàn)略。玉米（Zea mays L.）是最主要的青貯飼料，但其蛋白質(zhì)含量較低，粗纖維含量高，適口性差，用作青貯飼料存在一定的不足（王明，2017）。

糯玉米是玉米屬的一個(gè)亞種，具有黏、糯、香、細(xì)、柔的特點(diǎn)，富含淀粉、水溶性多糖和多種維生素，營(yíng)養(yǎng)豐富，與普通玉米相比蛋白質(zhì)、賴(lài)氨酸、色氨酸含量均較高（梁龍金等，2002），而且胚乳淀粉全為支鏈淀粉，使得糯玉米更易被消化吸收，用作畜禽飼料，飼喂轉(zhuǎn)化效率遠(yuǎn)高于普通玉米（陳永欣等，2003）。

鑒于糯玉米與普玉米在蛋白質(zhì)、賴(lài)氨酸、色氨酸等營(yíng)養(yǎng)成分、適口性以及消化率等方面所具有的潛在混貯優(yōu)勢(shì)，本研究以糯玉米與普玉米為原料進(jìn)行混貯處理，通過(guò)化學(xué)分析、青貯發(fā)酵品質(zhì)分析和青貯菌群分析，比較不同比例混貯與單獨(dú)青貯飼料品質(zhì)以及優(yōu)勢(shì)菌群變化之間的關(guān)系，旨在為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用糯玉米與普玉米混貯飼料提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概括 試驗(yàn)地位于內(nèi)蒙古呼和浩特市土左旗中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所農(nóng)牧交錯(cuò)試驗(yàn)基地， 地理位置是北緯 40°34"～ 40°35"，東經(jīng) 111°34"～ 111°47"，大陸性半干旱氣候，年平均氣溫5.9～6.5℃，7月份最高氣溫37.9℃，1月份最低氣溫-30.8℃，年平均降水量為350~450 mm。試驗(yàn)地屬于鹽堿土，pH 8.3，土壤含鹽量0.47% ～0.53%。

1.2 試驗(yàn)材料 青貯原料收獲于2017年7月28日，試驗(yàn)所用材料為稼泰糯玉米和稼泰普玉米，于蠟熟期自試驗(yàn)田取樣（表1）。

表1 糯玉米與普玉米混合青貯原料營(yíng)養(yǎng)成分%DM

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共5個(gè)處理組，每個(gè)組3個(gè)重復(fù)（表2）。

表2 糯玉米與普玉米混合青貯比例設(shè)計(jì)

1.4 青貯調(diào)制 將糯玉米和普玉米切短至2～3 cm，按表2中設(shè)計(jì)的混合青貯重量比例，充分混合均勻，裝入聚乙烯袋，每袋約300 g，設(shè)3次重復(fù)，用真空包裝機(jī)抽真空并封口，室溫條件下發(fā)酵60 d后開(kāi)袋取樣分析。

1.5 營(yíng)養(yǎng)成分分析 原料與青貯樣品均在65℃烘干48 h，分別測(cè)定初水份含量（GB/6435-86），將烘干樣品粉碎并過(guò)1 mm篩備用。干物質(zhì)（DM）采用常規(guī)烘箱烘干法測(cè)定；粗蛋白質(zhì)（CP）測(cè)定采用凱氏定氮法 （GB/T6432-94）；中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維 （ADF）采用范氏（Van Soest）法測(cè)定；可溶性碳水化合物（WSC）采用蒽酮-硫酸比色法測(cè)定。

1.6 青貯發(fā)酵品質(zhì)分析 青貯開(kāi)袋后稱(chēng)取20 g樣品，加入180 mL去離子水，攪拌均勻，于4℃冰箱中靜置24 h，依次用6層紗布和定性濾紙過(guò)濾，取浸提液，用雷磁PHS-3C pH計(jì)測(cè)定pH；將濾液用0.25μm密粒超強(qiáng)微孔濾膜過(guò)濾到5 mL的離心管中，用于測(cè)定氨態(tài)氮和有機(jī)酸。用高效液相色譜儀（SHIMADZE-10A型）測(cè)定乳酸、乙酸、丙酸和丁酸的含量；氨態(tài)氮的（NH3-N）測(cè)定采用苯酚-次氯酸鈉比色法。

1.7 微生物菌群分析 采用稀釋平板涂布法對(duì)原料新鮮樣品（刈割后裝入無(wú)菌袋，置于4℃保溫箱，并迅速帶回實(shí)驗(yàn)室）和各處理青貯樣品中微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)。在超凈工作臺(tái)上稱(chēng)取5 g待測(cè)樣品，粉碎混勻，放入裝有45 mL無(wú)菌水的三角瓶，用封瓶膜封口，置于180 r/min的搖床振蕩30 min，靜置 10～40 s，接著用槍分別從 10-1、10-3和10-5三個(gè)稀釋中取20μL均勻滴涂在對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基表面的扇形區(qū)域內(nèi)，靜置 20～30 min后倒轉(zhuǎn)，使菌液滲透到培養(yǎng)基內(nèi)，其中，乳酸菌分離選用MRS培養(yǎng)基，大腸桿菌分離選用Blue Light Broth（BLB）培養(yǎng)基，好氧細(xì)菌分離選用Nutrient Agar（NA）培養(yǎng)基，酵母菌和霉菌分離選用Potato Detrose Agar（PDA）培養(yǎng)基。 MRS、NA、PDA 等 3種培養(yǎng)基購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，BLB培養(yǎng)基購(gòu)自日本株式制藥會(huì)社。所有培養(yǎng)基在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后分別進(jìn)行計(jì)數(shù)測(cè)定，其中MRS培養(yǎng)基上的菌落于37℃厭氧條件下培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加普玉米對(duì)糯玉米青貯營(yíng)養(yǎng)成分的影響如表3所示，糯玉米單貯（處理1）的DM和WSC含量顯著低于普玉米單貯（處理5）（P＜0.05），不同比例混貯處理中，隨著普玉米添加量的增加，除了5：5比例混貯處理WSC含量顯著下降 （P＜0.05）外，DM和WSC含量均升高，差異不顯著；糯玉米與普玉米不同比例混貯處理所含CP含量均差異不顯著（P＞0.05）；糯玉米單貯（處理 1）所含 NDF和ADF含量均顯著高于普玉米單貯 （處理5）（P＜0.05）；各比例混貯處理組中，3:7混貯處理組NDF和ADF含量均顯著低于另外兩組處理（P＜0.05）。

表3 糯玉米與普玉米不同比例混合青貯營(yíng)養(yǎng)成分比較

2.2 添加普玉米對(duì)糯玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響由表4可知，糯玉米與普玉米不同比例混貯處理各組pH、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量及氨態(tài)氮/總氮值均差異不顯著。糯玉米單貯（處理1）乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量均高于其他處理組，其中，糯玉米單貯（處理1）乙酸和丁酸含量顯著高于其他處理組（P＜0.05）；糯玉米單貯（處理1）處理組氨態(tài)氮/總氮顯著高于普玉米單貯 （處理5）（P＜0.05），添加不同比例普玉米混貯處理中，氨態(tài)氮/總氮值差異均不顯著（P＞0.05）。

表4 糯玉米與普玉米不同比例混貯發(fā)酵品質(zhì)

2.3 不同比例糯玉米和普玉米混貯培養(yǎng)基微生物計(jì)數(shù) 如圖1所示，糯玉米和普玉米附著的乳酸菌數(shù)量分別為 1.54×106、9.35×105cfu/g FM，大腸桿菌的數(shù)量分別為4.62×106、1.23×107cfu/g FM，好氧細(xì)菌的數(shù)量分別為5.78×107、2.26×108cfu/g FM，酵母菌的數(shù)量均為4.67×104cfu/g FM，霉菌的數(shù)量分別為 5.33×104、1.83×104cfu/g FM。 附著微生物中數(shù)量最多的是好氧細(xì)菌，其次是大腸桿菌，之后是乳酸菌，酵母菌和霉菌的數(shù)量較少。

如圖2所示，發(fā)酵后附著的乳酸菌數(shù)量增加為 1.85×107～ 1.35×1010cfu/g FM， 大腸桿菌的數(shù)量為2.5×107cfu/g FM，好氧細(xì)菌的數(shù)量有所減少，為 1.73×107～ 3.55×108cfu/g FM，酵母菌和霉菌的數(shù)量有所增加，分別為1.03×107～8.55×109cfu/g FM和2.05×107～5.66×109cfu/g FM。 附著微生物中數(shù)量最多的是乳酸菌，其次是酵母菌，之后是霉菌，大腸桿菌數(shù)量最少。

3 討論

青貯是一種簡(jiǎn)便的飼料調(diào)制和保存方式，可最大限度的保存飼料原料原有的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值 （益蕊，2015）以及青鮮狀態(tài)，還能夠提高適口性（薛艷林等，2014）和消化率（孫小凡，2003）。糯玉米與普玉米不同比例混合青貯樣品營(yíng)養(yǎng)成分中，DM含量和WSC含量分別為25.38%～37.85%和2.70%～8.38%，隨著普玉米添加量的增加，除5：5比例混貯處理WSC含量顯著下降外（P＜0.05），不同比例混貯中DM和WSC含量逐漸增加，CP、ADF、NDF含量和氨態(tài)氮/總氮逐漸下降。這證明糯玉米鮮樣的水分含量較高，WSC含量低，缺乏供乳酸菌發(fā)酵的底物，不利于乳酸菌的大量繁殖，隨著普玉米添加量的逐漸增加，其發(fā)酵底物WSC含量逐漸增加，有機(jī)酸含量也隨之增加，形成較好的酸性環(huán)境；氨態(tài)氮/總氮逐漸下降是因?yàn)镃P含量減少，使不良的粗蛋白質(zhì)降解減少。NDF和ADF是表示飼料中纖維成分的兩個(gè)重要指標(biāo)，能夠反映纖維質(zhì)量好壞和飼料的有效能值，進(jìn)而影響飼料的消化率（司丙文，2012）。ADF、NDF含量的下降，可使青貯樣品的消化率得到有效的改善。

青貯飼料是在厭氧條件下利用青貯原料上的乳酸菌發(fā)酵作用，促進(jìn)或抑制微生物發(fā)酵，使pH下降而保存的飼料（玉柱等，2010）。在乳酸菌的發(fā)酵作用下，生成大量有機(jī)酸，進(jìn)而抑制在酸環(huán)境中不能繁殖的其他有害微生物（馬棟梁，2009）。本試驗(yàn)中，各處理乳酸含量均高于80%，因此可認(rèn)為各處理青貯樣品均以同型乳酸發(fā)酵為主。本試驗(yàn)中，青貯原料附著微生物數(shù)量最多的是乳酸菌，但是酵母菌的數(shù)量也很多，這可能是由于測(cè)定時(shí)存在取樣不當(dāng)，造成有氧發(fā)酵。酵母菌是一種兼性細(xì)菌，與空氣接觸后生長(zhǎng)迅速，會(huì)使pH升高，適口性變差，消化率降低，造成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及能量損失，青貯過(guò)程中可通過(guò)厭氧管理和添加乳酸菌的方式避免酵母菌等有害微生物的滋生（司丙文，2012）。

4 結(jié)論

糯玉米單獨(dú)青貯效果較差，通過(guò)添加普玉米可顯著降低糯玉米青貯飼料中NDF、ADF以及丁酸含量和氨態(tài)氮/總氮的比值，同時(shí)增加DM和WSC含量，當(dāng)糯玉米和普玉米按3:7混貯時(shí)，效果最佳。