董福昌

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病的主要誘因是人類乳頭瘤病毒（HPV）感染。有研究顯示美國50 歲以上的婦女80%會(huì)感染一次乳頭瘤病毒感染。不同類別的HPV感染其致病性存在顯著差異[1]。早診斷HPV感染有助于宮頸上皮內(nèi)瘤病變進(jìn)一步惡化，因此是醫(yī)學(xué)研究的關(guān)鍵[2]。目前國內(nèi)檢測HPV-DNA的方法是PCR-熒光法與PCR-膜雜交法[3]。文章探索PCR-熒光法與 PCR-膜雜交法在檢測HPV-DNA中的應(yīng)用對比研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年8 月-2019 年8 月收集送至本醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的208 例標(biāo)本，患者年齡22～65 歲，平均年齡（38.32 ±5.6）歲，患者均接受HPV和組織學(xué)檢測。采集受檢者的宮頸口鱗、柱狀上皮交界處，采用專用脫落細(xì)胞采集器進(jìn)行采集，并進(jìn)行細(xì)胞組織學(xué)檢測。

1.2 方法 ①PCR-熒光法：取2 uL的待測DNA加入到試劑盒的反應(yīng)管中，在同一PCR反應(yīng)中檢測宮頸脫落細(xì)胞中的13 種高危型HPV-DNA包括：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、58、59、68。反應(yīng)溫度50 ℃，2 min，95 ℃，10 min。循環(huán)40個(gè)。使用熒光PCR檢測儀并且記錄熒光標(biāo)記探針在分子雜交時(shí)的熒光能量變化。采用自動(dòng)記錄熒光值變化并轉(zhuǎn)換成DNA模板量，判斷檢測結(jié)果。全程設(shè)置HPV陰性對照和臨界陽性對照，從而控制質(zhì)量。②PCR-膜雜交法：采用反向點(diǎn)雜交檢測擴(kuò)增產(chǎn)物和包被有型特異性探針膜雜交結(jié)果，再進(jìn)行定性檢測，對21 種HPV基因型：HPV 6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68進(jìn)行分型檢測。標(biāo)本采集，按比例將PCR Mix、Taq酶和DNA模板混勻。擴(kuò)增溫度：95 ℃，9 min，循環(huán)40 個(gè)。陽性結(jié)果顯色為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn)。設(shè)置陰、陽性對照，從而控制質(zhì)量。

1.3 細(xì)胞學(xué)檢查 按照細(xì)胞組織學(xué)診斷分為惡性病變、非典型鱗狀上皮細(xì)胞增生、鱗狀上皮細(xì)胞病變，宮頸鱗癌。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]的形式表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PCR-熒光法與 PCR-膜雜交法在細(xì)胞組織學(xué)分組中的檢測陽性情況 208 例標(biāo)本，采用PCR熒光法檢測HPV-DNA陽性率（34.62%）低于PCR-膜雜交法檢測陽性率（46.63%）；其中細(xì)胞組織學(xué)診斷的異常細(xì)胞154例中PCR-熒光法檢測陽性率（14.29%）低于PCR-膜雜交法檢測的陽性率（28.57%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；54例細(xì)胞異?；颊叩腜CR-熒光法和PCR-膜雜交法的檢測比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 PCR-熒光法與 PCR-膜雜交法在細(xì)胞組織學(xué)分組中的檢測陽性情況 例(%)

2.2 惡性病變組和細(xì)胞異常組的患者采用兩種方法檢測的情況比較 惡性病變組分別采用PCR-熒光法和PCR-膜雜交法檢測陽性率分別為14.29%、28.57%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；細(xì)胞異常組分別采用PCR-熒光法和PCR-膜雜交法檢測陽性率分別為92.59%、98.15%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩組患者采用兩種方法的檢測情況比較 例(%)

3 討 論

PCR-膜雜交法是通過檢測位點(diǎn)是否出現(xiàn)出現(xiàn)信號判斷，而信號點(diǎn)的強(qiáng)弱反映定量信息。當(dāng)PC位點(diǎn)外膜條上各檢測位點(diǎn)有信號，還能分辨混合型感染[4]。PCR-熒光法能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測熒光擴(kuò)增過程，能夠進(jìn)行準(zhǔn)確的半定量分析，有助于篩查高危HPV亞型的患者，具有操作簡單、快速省時(shí)、分析準(zhǔn)確、成本低、適用樣本類型多等優(yōu)點(diǎn)，是HPV檢測的優(yōu)選方法[5]。

本文結(jié)果顯示送至本醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的208例標(biāo)本，采用PCR熒光法檢測陽性72 例，陰性136例，陽性率是34.62%，采用PCR-膜雜交法檢測陽性97 例，陰性111 例，陽性率是46.63%。說明兩種方法檢測不同細(xì)胞組織學(xué)分類中陽性比例不同。通過細(xì)胞組織學(xué)診斷的異常細(xì)胞54 例，比例是25.96%，惡性病變組的患者分別采用PCR-熒光法和PCR-膜雜交法的檢測HPV-DNA的陽性率是14.29%、28.57%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。原因是PCR熒光法的檢測人群僅限于13 種類型的高危HPV。細(xì)胞異常組的患者分別采用PCR-熒光法和PCR-膜雜交法的檢測HPVDNA的陽性率是92.59%、98.15%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明HPV感染與宮頸癌的病變具有顯著的相關(guān)性。

綜上所述，PCR-熒光法在臨床診療篩查中應(yīng)用效果很好，PCR-膜雜交法在非高危性HPV的檢測中應(yīng)用效果較好，PCR檢測HPV-DNA具有很高的特異性和敏感性。