袁瑞玲， 鄭傳偉， 馮 丹， 王藝璇， 和秋菊， 陳 鵬*

(1.云南省森林植物培育與開發(fā)利用重點實驗室, 云南 昆明 650201； 2.云南省林業(yè)和草原科學院，云南 昆明 650201； 3.西南林業(yè)大學，云南 昆明 650224)

桔小實蠅[Bactroceradorsalis(Hendel)]又名東方果實蠅，屬雙翅目(Diptera)實蠅科(Trypetidea)果實蠅屬(Bactrocera)，廣泛分布于環(huán)太平洋的各個國家，可危害40多個科的300余種水果和蔬菜[1-3]，是我國南方熱帶和亞熱帶地區(qū)嚴重危害果蔬生產(chǎn)的重要害蟲之一，一直是國際重要檢疫對象[4-5]。由于桔小實蠅對農(nóng)林生產(chǎn)的危害性及其潛在的爆發(fā)威脅，國內外對其研究也在不斷深入。然而，研究過程中需要大量發(fā)育正常的試驗種群，受氣候條件等因素的限制，從野外采集的蟲源很難供試驗需要。因此，室內飼養(yǎng)桔小實蠅尤為重要，同時也是認識其生物學、生理學、行為學、遺傳學、生態(tài)學等特性，探索其防治方法的有效手段[6-9]。

根據(jù)國內外報道的昆蟲常用飼養(yǎng)配方以及桔小實蠅人工幼蟲飼料、成蟲飼料及飼養(yǎng)方法[10-16]，筆者在前人研究基礎上進行桔小實蠅飼養(yǎng)箱結構和空間、產(chǎn)卵引誘器、幼蟲飼養(yǎng)裝置、幼蟲和成蟲飼料優(yōu)化、飼養(yǎng)環(huán)境優(yōu)化調控等研究，以期簡化桔小實蠅的飼養(yǎng)過程，降低飼養(yǎng)成本，為科研試驗提供數(shù)量大、發(fā)育整齊、生理狀況穩(wěn)定一致的桔小實蠅試驗材料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 新型實蠅多蟲態(tài)養(yǎng)蟲箱 新型實蠅多蟲態(tài)養(yǎng)蟲箱為筆者所在的研究團隊設計制作(專利號：ZL201721137479.9)，規(guī)格為60 cm×60 cm×60 cm的矩形箱體。養(yǎng)蟲箱特點：箱體頂側、底側以及后側采用不銹鋼紗網(wǎng)，左右兩側采用玻璃板，玻璃板上部設置通孔，箱體內設置貫穿玻璃板的喂料管，喂料管上方開口，喂料管一端設置直徑大于通孔的固定蓋，另一端設置水平向上的投料口；箱體內中部兩側設置支架，支架上放置物料盤；箱體前側上部采用紗布，紗布中央設置紗網(wǎng)袖，紗布通過外緣設置的粘扣帶與箱體連接；箱體前側中部采用不銹鋼紗網(wǎng)，箱體前側下部設置抽屜式底托，底托內可鋪設細沙[17]。

1.1.2 蟲源 桔小實蠅幼蟲采自云南省元江縣植保站火龍果果園，取蟲果在室內飼養(yǎng)至成蟲，然后繼代飼養(yǎng)。

1.1.3 飼料 成蟲飼料：蔗糖90 g，酵母浸粉30 g，蜂蜜15 g，瓊脂4～5 g混合溶于1 000 mL開水煮沸配制而成[18]。幼蟲飼料：將新鮮豆渣45.0 g、玉米粉4 g、黃豆粉4 g、蔗糖14 g、酵母粉7 g、醋酸約6 mL、對羥基苯甲酸甲酯0.3 g，加適量蒸餾水配制，pH值調至5～6，現(xiàn)配現(xiàn)用[18]。

1.1.4 養(yǎng)蟲室 養(yǎng)蟲室通風透光，能避免其他昆蟲或動物的干擾。養(yǎng)蟲室裝有人工光源，室內用加濕器調節(jié)濕度，保持相對濕度為60%～70%，用海爾電熱油汀控制溫度在25～30℃，用溫濕度表監(jiān)測溫度和濕度，光周期為光∶暗=16 h∶8 h。

1.2 卵的采集和孵化

采用自行設計的產(chǎn)卵引誘器(圖1，專利號：201821272343.3，上口徑17.5 cm，下口徑13.5 cm，高7 cm，在距離底部1.5 cm以上的區(qū)域有0.6 mm的小孔，孔間距為0.5～1 cm)進行產(chǎn)卵引誘。將芒果汁飲料倒入盒子中約1 cm深，蓋上蓋子，將產(chǎn)卵引誘器放入養(yǎng)蟲箱的物料盤中，采集桔小實蠅卵，24 h后取出產(chǎn)有卵的盒子，直接把配好的幼蟲飼料加到盒子里與果汁混勻，用勺子輕輕將卵拌到飼料里，放進養(yǎng)蟲室或培養(yǎng)箱中孵化。

1.3 幼蟲飼養(yǎng)

利用新型實蠅多蟲態(tài)養(yǎng)蟲箱飼養(yǎng)桔小實蠅幼蟲，將拌有桔小實蠅蟲卵的盒子放到養(yǎng)蟲箱中間支架上物料盤中或培養(yǎng)箱中待其孵化，幼蟲在人工幼蟲飼料中孵化取食，生長，直到老熟后跳出化蛹。需在新型實蠅多蟲態(tài)養(yǎng)蟲箱的底部抽屜式托盤中放入適宜濕度的細沙，供幼蟲生長發(fā)育至老熟幼蟲時跳入細沙中化蛹。

1.4 蛹的管理

在桔小實蠅幼蟲老熟化蛹前，養(yǎng)蟲箱底部抽屜式托盤中需要放入約5 cm深的細沙供其化蛹，并保持細沙適宜濕度(細沙用手捏緊時沒有水滴下，松開手沙子自然散開為佳)。蛹可不從細沙中篩出，盡量減少人為破壞，直接把有老熟幼蟲的底部抽屜式托盤轉移到另一個新型實蠅多蟲態(tài)養(yǎng)蟲箱中待其化蛹直到羽化。為保證成蟲羽化的整齊性，化蛹過程中也可以每天更換養(yǎng)蟲箱底部托盤，收集同期的蛹待其羽化[17]。不同日齡蛹的收集方法：在老熟幼蟲化蛹期間每天定時取出并換上準備好的托盤供新跳入的老熟幼蟲化蛹，24 h后篩出和分離蛹，置于適宜濕度的細沙中管理和保存，依次循環(huán)操作，同時記錄化蛹信息[17]。

1.5 成蟲飼養(yǎng)

使用養(yǎng)蟲箱飼養(yǎng)桔小實蠅成蟲的飼養(yǎng)環(huán)境條件同養(yǎng)蟲室一致。將同一時期羽化的成蟲聚養(yǎng)在同一養(yǎng)蟲箱中，每24 h更換1次飼料，用勺子將制備好的成蟲飼料攪碎放入養(yǎng)蟲箱的物料盤上供其取食，同時在喂料管中的海綿上添加飲用水供其飲用[18]。另外，定期消毒和清洗養(yǎng)蟲箱。

冬季養(yǎng)蟲室溫度和光照需要嚴格調控，使用專門配置的全光譜昆蟲飼養(yǎng)增溫燈對養(yǎng)蟲箱的部分區(qū)域進行增溫和補光。晴天分別在6:00—10:00、18:00—22:00時段進行補光；陰雨天及冬季則需要在6:00—22:00時段補光，以增加養(yǎng)蟲箱內的光照時間和光照強度[18]。

1.6 測定項目和方法

1.6.1 成蟲產(chǎn)卵量及壽命 統(tǒng)計桔小實蠅繼代飼養(yǎng)1年內8代的成蟲產(chǎn)卵量及壽命情況，每一代蟲選取100對，將其聚集在一個養(yǎng)蟲箱中飼養(yǎng)，每代蟲觀察記錄3次重復。

1.6.2 卵孵化率、幼蟲化蛹率、成蟲羽化率 觀察記錄1年內飼養(yǎng)的8代蟲的信息，分析其孵化率、化蛹率和羽化率。每代蟲初始試驗卵數(shù)為1 000粒，每代設置3個重復，取1 000粒卵放在配置好的人工幼蟲飼料中，讓其自由孵化，記錄和統(tǒng)計孵化幼蟲數(shù)量，計算孵化率；繼續(xù)飼養(yǎng)幼蟲并觀察，待其發(fā)育至老熟幼蟲化蛹，統(tǒng)計完全化蛹后的數(shù)量，計算幼蟲化蛹率；蛹羽化后統(tǒng)計羽化后成蟲的數(shù)量，計算成蟲羽化率[18]。

孵化率=孵化幼蟲數(shù)/卵數(shù)×100%

化蛹率=化蛹數(shù)/1 000粒孵化出的幼蟲數(shù)×100%

羽化率=羽化成蟲數(shù)/1 000粒孵化發(fā)育至完全化蛹數(shù)×100%

1.6.3 各階段的發(fā)育情況 分別觀察記錄1年內繼代飼養(yǎng)的8代蟲的各階段發(fā)育歷期數(shù)據(jù)，每代3個重復，統(tǒng)計各階段的發(fā)育情況。

1.7 數(shù)據(jù)分析

每次統(tǒng)計3次重復，取平均值，數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件中的One-way ANOVA進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 桔小實蠅成蟲產(chǎn)卵量及壽命

由表1可知，桔小實蠅每雌平均產(chǎn)卵量為(880.75±58.03)粒，1 d最多平均產(chǎn)卵數(shù)為(101.50±13.92)粒；平均產(chǎn)卵天數(shù)為(40.00±1.96)d。雌蟲最長壽命平均在(51.92±7.22)d，雄蟲最長壽命平均在(53.69±5.69)d。

表1 桔小實蠅成蟲的產(chǎn)卵量及壽命

注：同列不同字母代表5%顯著水平。下同。

2.2 桔小實蠅的孵化率、化蛹率和羽化率

從表2可知，桔小實蠅蟲卵的平均孵化率為(84.33±2.67)%，幼蟲的平均化蛹率為(89.40±2.08%)，蛹的平均羽化率為(88.34±2.88)%。1 000粒桔小實蠅蟲卵，最后平均可羽化出成蟲(665.67±25.22)頭，羽化率較高。

表2 桔小實蠅飼養(yǎng)的孵化率、化蛹率、羽化率

2.3 桔小實蠅各階段發(fā)育歷期

由表3可知，通過人工調控養(yǎng)蟲室環(huán)境接近桔小實蠅適宜的生長發(fā)育環(huán)境，桔小實蠅卵期平均2～3 d，幼蟲期平均8～16 d，預蛹期+蛹期平均在9～14 d。產(chǎn)卵前期(羽化后發(fā)育至性成熟，開始產(chǎn)卵)8～12 d，而完成一個世代平均需要27～43 d。與報道的桔小實蠅生長發(fā)育周期一致，說明飼養(yǎng)的桔小實蠅生長正常，能提供符合要求的供試蟲源。

表3 桔小實蠅各發(fā)育階段各階段的發(fā)育歷期 d

3 結論與討論

研究結果表明，桔小實蠅室內飼養(yǎng)生長發(fā)育受溫度、濕度、光照、種群密度、食料等環(huán)境因素和人為管理多方面的影響[18]。在本研究條件下，桔小實蠅雌蟲平均產(chǎn)卵天數(shù)達(40.00±1.96)d，1 d最多平均產(chǎn)卵(101.50±13.92)粒，一生平均產(chǎn)卵量為(880.75±58.03)粒。雌蟲最長壽命平均為(51.92±7.22)d，雄蟲平均最長壽命為(53.69±5.69)d。孵化率、化蛹率、羽化率分別為(84.33±2.67)%、(89.40±2.08)%、(88.34±2.88)%。各階段發(fā)育歷期分別為卵期2～3 d，幼蟲期8～16 d，預蛹期+蛹期在9～14 d。產(chǎn)卵前期8～12 d，而一個世代平均需要27～43 d。

桔小實蠅的產(chǎn)卵量制約著其種群規(guī)模的大小，黃素青等[4,19]研究表明，桔小實蠅具有很強的繁殖能力，每雌產(chǎn)卵可達1 200～1 500粒，且孵化率較高，在80%～90%，有時其產(chǎn)卵量甚至高達1 800粒以上。隨后，有學者通過解剖觀察其卵巢形態(tài)結構及發(fā)育特征研究等發(fā)現(xiàn)，桔小實蠅正常一次性產(chǎn)卵在56粒以上，一生至少可產(chǎn)卵224粒[20]。桔小實蠅是完全變態(tài)昆蟲，每個發(fā)育階段的存活率都制約著最后成蟲的種群數(shù)量，目前關于桔小實蠅卵孵化率、幼蟲化蛹率、蛹羽化率等的研究結果表明，這3個指標分別在80%、80%～95%、90%左右，與本研究結果基本一致[21-23]。利用本研究方法飼養(yǎng)桔小實蠅，產(chǎn)卵量在813～936粒，并且后期各蟲態(tài)存活率均較高，與前人報道結果基本吻合，說明該方法用于桔小實蠅的飼養(yǎng)能達到正常擴繁和繼代飼養(yǎng)的良好效果。

在自然情況下，桔小實蠅在不同季節(jié)發(fā)育存在明顯的差異。有研究顯示，桔小實蠅卵期，夏季1 d，春季2～3 d，冬季7～20 d；幼蟲期，夏季溫度27～30℃時4～7 d，冬季15～20℃時13～20 d；蛹期，夏季8～9 d，春秋季10～14 d，冬季15～20 d[4]。在夏季室內飼養(yǎng)桔小實蠅，溫度在26～29℃時，卵期1～2 d，幼蟲期8～11 d，蛹期9～11 d[12,24]。采用本飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)桔小實蠅，各階段發(fā)育歷期情況與前人報道結果基本一致，種群發(fā)育正常，研究證實該方法能在一年四季飼養(yǎng)桔小實蠅，且在不同季節(jié)時各蟲態(tài)的發(fā)育歷期均比較穩(wěn)定。

影響桔小實蠅生長因素眾多，其中有學者研究表明，溫度和光照對桔小實蠅生存、飛行活動和產(chǎn)卵前期等影響較大[7]；適宜桔小實蠅生存和飛行的溫度是20～32℃[6,8]。不同的濕度條件也明顯影響桔小實蠅的存活和發(fā)育；梁光紅等[25]研究顯示,在25℃條件下，相對濕度為75%，對桔小實蠅種群壽命影響最大，為最適相對濕度；劉建宏等[6,8]的研究結果均與其他學者報道一致，桔小實蠅適于在空氣相對濕度為60%～80%的范圍內活動，有利于其飛行。光刺激是導致桔小實蠅多種活動的基本條件，也有研究表明，人工光照對室內飼養(yǎng)昆蟲的生殖行為及發(fā)育非常重要[8,18,26]。桔小實蠅雌蟲在500～2 000 lx，雄蟲在500～1 000 lx的光照強度下飛行距離最遠，雌雄蟲在500～2 000 lx光照強度下平均飛行時間最長[8]。經(jīng)過長期飼養(yǎng)觀察發(fā)現(xiàn)，光照對桔小實蠅的活動、產(chǎn)卵行為及生長發(fā)育都有顯著影響。所以，本研究在室內飼養(yǎng)桔小實蠅時除了保證其正常生長需要的溫度、濕度等條件外，還特別對養(yǎng)蟲箱進行了光照補充，晴天分別在6:00—10:00和18:00—22:00時段進行補光；陰雨天氣及冬季則需要6:00—22:00時段進行補光，以保證該蟲生長發(fā)育所需的光照時間和光照強度。

使用本飼養(yǎng)方法實現(xiàn)了桔小實蠅通過人工飼料規(guī)?；觑曫B(yǎng)，解決了桔小實蠅一年中越冬現(xiàn)象和實驗室冬季飼養(yǎng)種群僅能保種等問題。為不同時間、不同季節(jié)的相關試驗提供充足的試驗材料，能保證試驗的順利開展。