寧惠明 徐燕華
非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是代謝綜合征累及肝臟的病理表現(xiàn),視黃醛結(jié)合蛋白4(Retinol-binding protein4,RBP4)促進(jìn)單純性脂肪肝向非酒精性脂肪性肝炎和肝纖維化進(jìn)展。早期研究表明[1-2]RBP4為參與IR的脂肪因子,可能促成NAFLD發(fā)病。但隨后的研究[3-4]卻得出矛盾的結(jié)果。為明確中國(guó)成年NAFLD患者體內(nèi)RBP4水平及與肝功能等生化指標(biāo)的相關(guān)性,本研究檢測(cè)了NAFLD患者和健康對(duì)照者血清RBP4的變化,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。
選取2017年7月至2018年6月在本院門(mén)診就診和住院的成年NAFLD患者80例(NAFLD組),診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南》[5]。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有長(zhǎng)期飲酒史且折合乙醇攝入量男性每周>140 g,女性每周>70 g的患者;(2)病毒性肝炎、自身免疫性肝病、肝豆?fàn)詈俗冃?、?-抗胰蛋白酶缺乏癥等其他類(lèi)型的肝病患者;(3)近期接受保肝降酶治療的患者;(4)近期輸血、使用鐵劑或感染者。另選取成年健康體檢者72例作為健康對(duì)照組。所有患者均簽知情同意書(shū)并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。
所有研究對(duì)象均詳細(xì)詢(xún)問(wèn)其病史,記錄年齡、性別、身高、體質(zhì)量等一般資料,計(jì)算BMI。抽取所有患者空腹靜脈血,室溫下自然凝固10~20 min,高速離心20 min。收集上層血清于EP管中,置-80 ℃超低溫冰箱保存待測(cè)。常規(guī)檢測(cè)生化指標(biāo):AST、ALT、TC、TG、FBG,IR。雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)RBP4水平。ALT>40U/L判定為ALT異常。檢測(cè)空腹血糖、空腹胰島素、BMI、PLT、Alb、AST、ALT。
計(jì)算NAFLDFS=-1.675+0.037×年齡(年)+0.094×BMI+1.13×空腹血糖調(diào)節(jié)受損或者糖尿病(是=1,不是=0)+0.99×AST/ALT(率)-0.013×血小板(109/L)-0.66×白蛋白(g/dl)。根據(jù)NAFLDFS低診斷閾值-1.455,將NAFLD患者分成無(wú)肝纖維化組(NAFLDFS<-1.455)和肝纖維化危險(xiǎn)組(NAFLDFS≥-1.455)。計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型IR指數(shù)(Homeostosis model assessment of insu-lin resistance index,HOMA-IR) (HOMA-IR=空腹血糖×空腹胰島素/22.5)。
NAFLD組患者的AST、ALT、TC、TG、FBG和HOMA-IR水平均顯著高于健康對(duì)照組(P值均<0.05); RBP4水平高于健康對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05) (表1)。
肝纖維化危險(xiǎn)組和無(wú)肝纖維化組AST、ALT、TC、TG差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05) ;而肝纖維化危險(xiǎn)組RBP4、FBG、HOMA-IR水平明顯高于無(wú)肝纖維化NAFLD患者組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.01)(表2)。
伴ALT異常的NAFLD患者AST、ALT水平顯著高于單純NAFLD患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05);NAFLDFS高于單純NAFLD患者(t=2.147,P值=0.035);TC和TG FBG和HOMA-IR、RBP4差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05) (表3)。
表1 NAFLD患者和健康對(duì)照者生化指標(biāo)及RBP4的比較(±s)
注:NAFLD:非酒精性脂肪性肝?。籄ST:天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶;ALT:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶;TC:膽固醇;TG:甘油三酯;FBG:空腹血糖;HOMA-IR:胰島素抵抗指數(shù);NAFLDFS:肝纖維化評(píng)分RBP4:視黃醇結(jié)合蛋白4
表2 不同肝纖維化NAFLD患者指標(biāo)比較(±s)
表3 單純NAFLD患者與伴ALT異?;颊咧笜?biāo)的比較(±s)
Person相關(guān)性分析結(jié)果顯示,RBP4與NAFLDFS(r=0.464,P<0.01)、HOMA-IR(r=0.430,P<0.01)呈顯著正相關(guān),ALT(r=-0.061,P=0.593)無(wú)相關(guān)。
RBP4是單一肽鏈蛋白質(zhì),相對(duì)分子質(zhì)量約為21 000,基因位于10q,mRNA全長(zhǎng)941bp,其編碼的蛋白質(zhì)由181個(gè)氨基酸組成,主要由肝臟分泌,最近發(fā)現(xiàn)[6-7],它是由脂肪細(xì)胞分泌的一種蛋白質(zhì),與胰島素抵抗密切相關(guān)的脂肪因子,與胰島素抵抗有關(guān),參與肥胖與胰島素抵抗,可導(dǎo)致糖脂代謝紊亂等。
Lees等[8]的研究發(fā)現(xiàn),RBP4可以通過(guò)激活脂肪組織中的主要炎癥效應(yīng)并刺激促炎細(xì)胞因子,如TNF-α誘導(dǎo)肝臟脂肪變性。Zhong等[9]發(fā)現(xiàn),RBP4可以影響人肝星狀細(xì)胞中維生素A棕櫚酸酯的水解,使維生素A在體內(nèi)平衡被破壞。為明確RBP4在健康人群和NAFLD患者血清中的表達(dá)情況,我們檢測(cè)了152例研究對(duì)象血清RBP4水平,結(jié)果顯示NAFLD患者血清RBP4水平均顯著高于健康對(duì)照組,與Wang等[10]報(bào)道結(jié)果一致。
由于RBP4與IR的發(fā)展有關(guān)[11],而IR又與NAFLD有著密切的聯(lián)系,RBP4是否與NAFLD的發(fā)病有關(guān)正逐漸受到人們的關(guān)注。我們研究發(fā)現(xiàn),NAFLD患者的FBG、HOMA-IR水平明顯高于健康對(duì)照組,Pearson相關(guān)系數(shù)分析進(jìn)一步顯示,HOMA-IR與RBP4顯著正相關(guān),與Graham等[6]的報(bào)道結(jié)果一致。Yang等[12]發(fā)現(xiàn)血漿RBP4水平在肥胖和患有2型糖尿病的人群中升高,應(yīng)用胰島素增敏劑可以使血漿RBP4水平正常,轉(zhuǎn)基因過(guò)表達(dá)人類(lèi)RBP4或注射重組RBP4的正常大鼠出現(xiàn)IR,相反的,RBP4傳缺失則增強(qiáng)胰島素敏感性,故可以預(yù)測(cè)RBP4將成為NAFLD治療中潛在的新的預(yù)防和治療靶點(diǎn)[10]。
脂肪細(xì)胞能分泌多種脂肪細(xì)胞因子,例如瘦素、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、抵抗素、RBP4等[13-14],這些細(xì)胞因子或直接促進(jìn)HSC活化增殖或誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)和血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)過(guò)度表達(dá),參與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。Zarzour等[15]研究發(fā)現(xiàn),在SD大鼠中,8周的hfd飲食喂養(yǎng)導(dǎo)致了NAFLD大鼠脂肪組織的顯著功能障礙,RBP4大量增加,導(dǎo)致pparγ、slc10a2和collα1基因的上調(diào),這些基因都與胰島素抵抗、肝脂肪變性和肝纖維化有關(guān)。有研究[16]發(fā)現(xiàn)在抑制RBP4的表達(dá)后可以阻止小鼠模型中的NAFLD的肝纖維化的發(fā)展。我們研究發(fā)現(xiàn)在肝纖維化危險(xiǎn)組的RBP4高于無(wú)肝纖維化組,Pearson相關(guān)系數(shù)分析進(jìn)一步顯示,RBP4越高,發(fā)生肝纖維化的風(fēng)險(xiǎn)越大。本研究結(jié)果證實(shí),NAFLD患者高RBP4水平與肝纖維化密切相關(guān),可作為NAFLD相關(guān)肝纖維化的一個(gè)新的評(píng)估指標(biāo)。