嚴(yán)關(guān)所，張輝，張順新，呂念詞，張以芳

(1.瀘西縣白水鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 瀘西 652404；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650201)

偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)歸屬于皰疹病毒科，它的病毒粒子形狀呈球形或橢圓形[1]。偽狂犬病毒的血清型只有一種，但是當(dāng)毒株不一樣時(shí)，它的毒力和生物學(xué)特征也相對(duì)應(yīng)的不同[2]。偽狂犬病毒的增殖不復(fù)雜，在很多種組織細(xì)胞內(nèi)都能夠培養(yǎng)出來，其中對(duì)其最敏感的細(xì)胞是兔腎和豬腎兩種細(xì)胞，細(xì)胞的病變很明顯[3]。偽狂犬病毒感染豬，臨床可直接觀察到腎臟上會(huì)出現(xiàn)針尖大小出血點(diǎn)，當(dāng)有神經(jīng)癥狀出現(xiàn)時(shí)，腦膜會(huì)看到出血、充血癥狀，大腦中脊髓液會(huì)變多；肝、脾、扁桃體上有壞死點(diǎn)出現(xiàn)，發(fā)生肺水腫；胃黏膜出血，出現(xiàn)炎癥[4]。

偽狂犬病毒的傳染源可能是被感染或者帶病毒的豬和帶病毒的老鼠，被感染的豬、帶有病毒的豬及帶有病毒的老鼠都能夠通過體液將病毒排到體外，通過呼吸和接觸都會(huì)被傳染[5]。偽狂犬病毒能夠通過母豬直接傳染給下一代，被感染之后往往形成死胎和木乃伊胎[6]。被病毒感染之后，母豬會(huì)發(fā)生流產(chǎn)，對(duì)胎兒的影響較大，對(duì)母豬的繁育能力產(chǎn)生終身影響[6]。公豬被感染后，對(duì)其性欲產(chǎn)生極大影響，功能下降，從而失去配種的價(jià)值[7]。

目前，大多豬場(chǎng)通過免疫豬偽狂犬病毒gE基因缺失疫苗來防制豬偽狂犬病毒傳染，使用PRV-gE ELISA或PRV-gB ELISA試劑檢測(cè)豬體內(nèi)的抗體，能夠區(qū)分豬產(chǎn)生的抗體是來自于野毒感染(PRV-gE抗體)還是疫苗免疫(PRV-gB抗體)，以此來實(shí)現(xiàn)豬場(chǎng)對(duì)偽狂犬病毒的凈化目的，減少對(duì)養(yǎng)殖行業(yè)造成的損失[8]。

本文采用PRV-gE ELISA試劑盒，對(duì)4個(gè)豬場(chǎng)的PRV-gE野毒感染抗體進(jìn)行調(diào)查，可為豬偽狂犬病流行病學(xué)及防制提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2019年4月采自4個(gè)豬場(chǎng)的血清樣品217份，其中母豬153份、仔豬10份、育肥豬8份、公豬36份、保育豬10份。包括豬場(chǎng)一：公豬血清樣品22份；豬場(chǎng)二：母豬血清樣品54份；豬場(chǎng)三：公豬及母豬血清樣品30份；豬場(chǎng)四：公豬、母豬、仔豬、保育豬及育肥豬血清樣品111份。除豬場(chǎng)一的公豬外，其余均免疫過豬偽狂犬病毒gE基因缺失苗。

1.2 試驗(yàn)材料

PRV-gE ELISA診斷試劑盒(美國(guó) IDEXX 生物技術(shù)公司)、移液器、雙蒸水、烘箱、加樣槽。

1.3 方法步驟

試劑盒使用時(shí)所有試劑應(yīng)恢復(fù)至18～26℃，使用前試劑應(yīng)搖均，操作步驟參照PRV-gE ELISA診斷試劑盒使用說明書進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)束計(jì)算S/N值。計(jì)算公式：S/N=〔樣品吸光值(650)/陰性對(duì)照平均值〕。

1.4 結(jié)果判定

當(dāng)S/N≤0.60時(shí)，PRV-gE抗體陽(yáng)性；當(dāng)0.600.70時(shí)，PRV-gE抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

4個(gè)豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果見表1。

豬場(chǎng)一：檢測(cè)公豬血液樣品22份，檢出陽(yáng)性13份，陽(yáng)性率為59.09%，S/N平均值為0.8681。

豬場(chǎng)二：檢測(cè)母豬血液樣品54份，檢出陽(yáng)性11份，陽(yáng)性率為20.37%，S/N平均值為0.8681。

豬場(chǎng)三：檢測(cè)公豬4頭，檢出陽(yáng)性0頭，未檢出陽(yáng)性公豬，S/N平均值為0.9379；檢測(cè)母豬26頭，檢出陽(yáng)性1頭，陽(yáng)性率3.85%，S/N平均值為0.9037。

豬場(chǎng)四：檢測(cè)樣品111份，其中檢測(cè)公豬10頭檢出陽(yáng)性1頭，陽(yáng)性率為10%，S/N平均值為0.8037；母豬73頭檢出陽(yáng)性24頭，陽(yáng)性率32.88%，S/N平均值為0.9079，仔豬10頭檢出陽(yáng)性3頭，陽(yáng)性率30%，S/N平均值為0.9066；保育豬10頭，檢出陽(yáng)性3頭，陽(yáng)性率30%，S/N平均值為0.7141；育肥豬8頭未檢出陽(yáng)性，S/N平均值為1.0194。

表1 4個(gè)豬場(chǎng)PRV-gE抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

3 討論

從樣品來源看，只有豬場(chǎng)四采樣比較全面，采集了種豬、仔豬、保育豬及育肥豬樣品，而其他3個(gè)場(chǎng)只采集了種公豬、母豬樣品。

豬場(chǎng)三情況較好，檢測(cè)公豬未感染，母豬有1頭感染，可以把感染母豬盡快隔離凈化處理，以防感染進(jìn)一步擴(kuò)大傳染。豬場(chǎng)一檢測(cè)公豬有59.09%感染，這個(gè)豬場(chǎng)的種公豬應(yīng)及時(shí)清群，精液已不能使用。豬場(chǎng)四檢出1頭公豬陽(yáng)性，這頭公豬已不可用，應(yīng)及時(shí)淘汰，母豬、仔豬及保育豬的感染率也達(dá)到了30%比例，應(yīng)在加強(qiáng)防制的基礎(chǔ)上，有計(jì)劃的凈化陽(yáng)性豬，提高豬場(chǎng)生產(chǎn)效率。

4個(gè)豬場(chǎng)的種公豬或母豬均檢出了陽(yáng)性，說明云南省中小型豬場(chǎng)應(yīng)特別加強(qiáng)種豬的管理，種豬的引種應(yīng)引起高度重視，避免從陽(yáng)性豬場(chǎng)進(jìn)行引種，引種時(shí)必須對(duì)引進(jìn)的種豬進(jìn)行采樣檢測(cè)。另外，注射過疫苗的豬場(chǎng)也應(yīng)同時(shí)監(jiān)測(cè)疫苗免疫(PRV-gB)抗體，了解疫苗免疫效果及抗體變化，制定合理的免疫程序。

以上4個(gè)豬場(chǎng)gE抗體總陽(yáng)性率為25.81%，比蘇琳琳[2]等報(bào)道2016年檢出陽(yáng)性率13.2%、2017檢測(cè)陽(yáng)性率13.8%，鄭輝[9]等報(bào)道2015年我國(guó)部分地區(qū)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查檢出16.48%的陽(yáng)性率高。說明云南省部分豬場(chǎng)gE感染有增高趨勢(shì)，應(yīng)引起云南省養(yǎng)豬行業(yè)相關(guān)人員重視。