鄒傳宗 王紅娟 李紀(jì)綱 劉 喆 李昱婷 馬宏霞

甘肅醫(yī)學(xué)院，甘肅 平?jīng)?744000

蒲公英(TaraxacummongolicumHand.-Mazz.)為菊科蒲公英屬多年生草本植物，別名谷谷丁、黃花苗、蒲公草、地丁、婆婆丁等[1]。中國藥典(2015版)收載的蒲公英為菊科植物蒲公英(T.Hand.-Mazz.)、堿地蒲公英(T.borealisinense Kitam.)或同屬數(shù)種植物的干燥全草[2]。其具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋的功能，可用于疔瘡腫毒、乳癰、瘰疬、目赤、咽痛、肺癰、腸癰、濕熱黃疸、熱淋澀痛的治療[3]?，F(xiàn)代藥理作用研究表明，蒲公英還具有抗炎[4-5]、保肝[6]、抗腫瘤[7]等作用，而國內(nèi)并無其關(guān)于高尿酸血癥所致腎臟損傷保護作用的文獻報道。本實驗對蒲公英的腎臟保護作用進行研究。

高尿酸血癥是由嘌呤類物質(zhì)代謝紊亂和(或)尿酸排泄減少引起血尿酸增高的一組異質(zhì)性疾病[8]。近年來高尿酸血癥的發(fā)病率在全球呈上升趨勢，同時伴有低齡化趨勢[9-11]。研究表明[12-13]，高尿酸血癥不僅是痛風(fēng)的發(fā)病基礎(chǔ)，其還與慢性腎病、代謝綜合征、糖尿病、高血壓等疾病發(fā)展密切相關(guān)。中草藥在抗高尿酸領(lǐng)域的研究取得顯著效果，開發(fā)一種廉價易得、療效確切和副作用低的中草藥顯得尤為重要[14- 15]。本研究通過持續(xù)灌胃氧嗪酸鉀喂養(yǎng)5周建立大鼠高尿酸血癥腎病模型[16-17]，通過觀察大鼠腎臟色澤和硬度，計算干濕重比值考察蒲公英對高尿酸血癥大鼠腎臟的保護作用，為擴大蒲公英臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 實驗動物 Wistar大鼠，SD級30只，雌雄各半，體重(200±10)g，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：(甘)2015-0001。

1.2 藥品與試劑 蒲公英于2018年6月上旬采自甘肅省平?jīng)鍪薪?，?jīng)甘肅醫(yī)學(xué)院程亞青教授鑒定為蒲公英(T.Hand.-Mazz.)，植物標(biāo)本存放于甘肅醫(yī)學(xué)院中藥標(biāo)本館；氧嗪酸鉀(武漢遠成共創(chuàng)科技有限公司，批號：O0164)；其他試劑全為分析純。

1.3 儀器 RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，Sartorius電子天平(BS224S，京制000000249號，北京賽多利斯儀器有限公司)。

2 方法

2.1 供試品及試劑的制備 取蒲公英1 kg。以水為溶劑，按1∶10(W/V)回流提取兩次，每次3 h，得浸膏188.44 g，產(chǎn)率18.844%。取浸膏，以生理鹽水溶解，制成含生藥量10 g·mL-1的蒲公英供試液；氧氰酸鉀用8 mg·mL-1的CMC-Na溶液配制成40 mg·mL-1的氧氰酸鉀溶液；取水合氯醛加水配置成10% 水合氯醛溶液。

2.2 大鼠尿酸型腎病模型的建立、給藥及分析方法 建模與分組 取符合體重大鼠30只，每組10只，雌雄各半，隨機分為3組：空白對照組，陰性對照組、給藥組。陰性對照組和給藥組灌胃氧嗪酸鉀(400 mg·kg-1, 2 mL)構(gòu)建大鼠尿酸型腎病模型，空白對照組灌胃等體積生理鹽水(2 mL)。

給藥與分析 造模完成后，立即給大鼠灌胃給予受試物?？瞻讓φ战M和陰性對照組灌胃等體積生理鹽水(1.2 mL)，給藥組按60 g·kg-1生藥量灌胃給藥。早中晚各給藥1次，連續(xù)給藥5周。最后一次給藥結(jié)束3 h后腹腔注射10%水合氯醛(3 mL·kg)麻醉大鼠，取腎，稱量干濕重，計算干濕重比值和腎臟系數(shù)(腎臟系數(shù)為腎臟的濕重除以體重的百分?jǐn)?shù))，統(tǒng)計分析[16]。

3 實驗結(jié)果

3.1 蒲公英水提物對大鼠腎臟干濕重比值的影響 表1和表2結(jié)果表明，與空白對照組大鼠比較，陰性對照組大鼠腎臟干濕重比有極顯著性差異(P<0.01)，給藥組大鼠腎臟干濕重比沒有明顯差異，說明持續(xù)性高尿酸血癥可以導(dǎo)致大鼠腎臟干濕重比升高，而蒲公英水提物可以起到很好的保護作用，防止干濕重比升高。

組別劑量/g·kg-1干濕重比空白對照組-0.2389±0.0051##陰性對照組-0.3306±0.0266**給藥組600.2488±0.0047##

注：與空白對照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與陰性對照組相比，#P<0.05，##P<0.01。

組別劑量/g·kg-1干濕重比空白對照組-0.2397±0.0038##陰性對照組-0.3191±0.0307**給藥組600.2495±0.0161##

注：與空白對照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與陰性對照組相比，#P<0.05，##P<0.01。

3.2 蒲公英水提物對大鼠腎臟系數(shù)的影響 通過對各組大鼠腎臟系數(shù)統(tǒng)計表明，陰性對照組大鼠與空白對照組大鼠腎臟系數(shù)相比有極顯著性差異(P<0.01)，說明本次實驗造模成功；給藥組與陰性對照組大鼠腎臟系數(shù)相比有顯著性差異(P<0.05)，與空白對照組大鼠腎臟系數(shù)相比則無差異，說明蒲公英水提物對持續(xù)性高尿酸血癥所導(dǎo)致的大鼠腎臟損傷具有保護作用。見表3。

組別劑量/g·kg-1腎臟系數(shù)空白對照組-0.0319±0.0004##陰性對照組-0.0347±0.0011**給藥組600.0328±0.0008#

注：與空白對照組大鼠相比，*P<0.05，**P<0.01；與陰性對照組相比，#P<0.05，##P<0.01。

3.3 大鼠腎臟解剖結(jié)果觀察 通過對大鼠解剖發(fā)現(xiàn)，空白對照組大鼠腎臟呈紅褐色(圖 1)，質(zhì)軟；陰性對照組大鼠腎臟呈紫黑色(圖 2)，質(zhì)硬；給藥組大鼠腎臟呈深褐色(圖 3)，相對于空白對照組大鼠而言質(zhì)稍硬。

4 討論分析

王培培[16]對大鼠高尿酸血癥腎損害模型進行了研究，通過腺嘌呤法與氧氰酸鉀法對比研究發(fā)現(xiàn)，腺嘌呤法不適合用于研究原發(fā)性高尿酸血癥，氧氰酸鉀法則類似人類原發(fā)性高尿酸血癥對腎臟的損害，結(jié)合王凱[17]對尿酸性腎損傷動物模型的研究，氧氰酸鉀400 mL·kg-1灌胃可成功誘導(dǎo)出適用于原發(fā)性高尿酸血癥和降尿酸藥物篩選的動物模型，因此本次試驗選用氧氰酸鉀法進行模型的建立。通過本次試驗對大鼠的觀察，空白對照組大鼠與給藥組大鼠表現(xiàn)基本一致，而陰性對照組大鼠則出現(xiàn)顫抖、精神狀態(tài)差等病態(tài)現(xiàn)象，對比王培培所作實驗結(jié)果，一般情況觀察所得結(jié)果基本一致。通過分析大鼠腎臟干濕重比值及腎臟系數(shù)發(fā)現(xiàn)，陰性對照組與其他兩組有極顯著性差異(P<0.01)，而給藥組和空白對照組質(zhì)地?zé)o明顯差別。結(jié)合大鼠腎臟形態(tài)及質(zhì)地觀察實驗，初步確定蒲公英水提物對持續(xù)性高尿酸血癥大鼠腎臟具有保護作用。

龐蕾蕾等[18]研究復(fù)方崩大碗灌腸劑對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟系數(shù)、電解質(zhì)和血液的影響發(fā)現(xiàn)，正常對照組和給藥組大鼠腎臟系數(shù)低于模型組。苗世環(huán)[19]用黃芩素對大鼠腎間質(zhì)纖維化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路干預(yù)作用研究時，各組腎臟系數(shù)變化也是模型組高于給藥組與空白對照組。周玉葉[20]對于RAGE在SAP大鼠胰腺和腎臟中表達及作用的研究中提出腎臟系數(shù)變化與腎臟病變程度密切相關(guān)。本文研究發(fā)現(xiàn)正常對照組大鼠腎臟系數(shù)顯著性極低于陰性對照組(P<0.01)，給藥組大鼠腎臟系數(shù)顯著低于陰性對照組大鼠(P<0.05)，而空白對照組大鼠與給藥組大鼠腎臟系數(shù)無顯著性差異。因此，可以分析確定蒲公英水提物對持續(xù)性高尿酸血癥大鼠腎臟具有保護作用。