苗雨莉，楊維霞，付欣，石叢艷

1.通用環(huán)球西航醫(yī)院病理科，陜西 西安 710021；

2.空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院病理科，陜西 西安 710032；

3.西北工業(yè)大學醫(yī)院病理科，陜西 西安 710072

胃癌具有較高的發(fā)病率和死亡率，在癌癥導致的死亡中，胃癌居第二位，胃癌患者早期臨床癥狀多不明顯，且癥狀與胃炎等其他胃部疾病難以區(qū)別，多數(shù)確診時癌癥已進展至晚期[1]。在晚期胃癌患者，腫瘤從原發(fā)病灶發(fā)生侵襲和轉移是造成患者死亡的主要原因[2]。因此，尋找可能預測胃癌侵襲、轉移的指標對于監(jiān)測病程進展及預后判斷具有重要價值。作為一種組織特異性的核基質(zhì)結合蛋白，AT 富集序列特異結合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1，SATB1)在多數(shù)腫瘤細胞中均有異常表達，能調(diào)控涉及腫瘤發(fā)生的1 000多種基因的表達[3-4]。本研究通過檢測胃癌患者癌組織及癌旁組織中SATB1 的表達水平，探討SATB1表達與胃癌患者臨床病理特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1～7 月通用環(huán)球西航醫(yī)院收治的62 例行手術治療的胃癌患者為研究對象。入選標準：①術后經(jīng)組織病理學明確診斷為胃癌；②術前無放療和化療史；③符合手術治療的指征；④患者知情同意本研究。排除標準：①合并其他系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤的患者；②合并嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者；③不能配合完成本研究者。62 例患者中，男性38 例，女性24 例；年齡39～78 歲，平均(61.22±11.17)歲；Ⅰ期7例，Ⅱ期16例，Ⅲ期24例，Ⅳ期15例。

1.2 研究方法 收集所有患者癌組織及癌旁組織(距癌組織5 cm以上)，稱重后立刻置于-80℃液氮罐中冷凍保存。采用免疫組織化學法(IHC)檢測SATB1蛋白的表達水平，收集患者性別、年齡、腫瘤部位、臨床分期、淋巴結轉移以及分化程度等臨床資料，分析胃癌組織中SATB1表達與患者臨床病理特征的關系；所有患者術后隨訪觀察2年，術后隨訪以電話及門診方式進行，記錄患者隨訪期內(nèi)生存情況，總生存率(overall survival，OS)計算終點為各種因素導致的死亡。根據(jù)隨訪結局將患者分為生存組和死亡組，分析SATB1在此兩組間的表達差異，并進一步使用Kaplan-Meier 生存曲線分析SATB1表達與患者預后的關系。

1.3 SATB1檢測方法

1.3.1 主要試劑 兔抗人SATB1 多克隆抗體(英國BeacomBio公司)，Envision法免疫組織化學試劑盒(丹麥DAKO公司)，DAB顯色試劑盒(丹麥DAKO公司)。

1.3.2 免疫組化染色及判定標準 病變組織以石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片至過膠玻片上，56℃條件下烤片2 h，使用二甲苯連續(xù)脫蠟3次，梯度乙醇脫二甲苯，水洗。染色采用免疫組化Envision法，染色步驟嚴格按說明書要求進行。采用DAB顯色，嚴格控制顯色時間，常規(guī)脫水、封片。使用已知陽性切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)替代SATB1一抗作為陰性對照。判定標準：SATB1為核轉錄因子，定位在細胞核中，以胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達，采用二級計分法對SATB1表達情況進行判讀，計算陽性細胞百分比并賦予分值，0～5%計為0分，5%～10%為1分，10%～50%為2分，50%以上計3分；觀察染色強度并賦予分值，無色計0分，淡黃色計1分，黃色或深黃色計2分，黃褐色或棕褐色計3分。以上兩項分值乘積＜3分為陰性(-)，≥3分為陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS20.0 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較使用獨立樣本t 檢驗；計數(shù)資料采用率表示，采取χ2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier法，并使用Log-rank法進行顯著性檢驗。所有檢驗均采取雙側檢驗，檢驗水平α=0.05。

2 結果

2.1 SATB1 蛋白在胃癌組織和癌旁組織中的表達 SATB1蛋白在細胞核中呈陽性表達，顯示為棕黃色顆粒，見圖1，在胃癌患者癌組織中STAB1陽性表達率為54.84% (34/62)，在癌旁組織中STAB1 呈極弱陽性或陰性，陽性表達率為9.68%(6/62)，胃癌癌組織STAB1陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=28.933，P＜0.01)。

2.2 胃癌組織中SATB1 蛋白表達與臨床病理特征的關系 胃癌組織中SATB1陽性表達率與性別、年齡、分化程度和腫瘤部位不相關(均P＞0.05)，而與臨床分期和淋巴結轉移明顯相關(均P＜0.05)；其中Ⅲ、Ⅳ期患者癌組織SATB1 陽性表達率為69.23%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ期患者的30.43%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；有淋巴結轉移的胃癌患者癌組織SATB1 陽性表達率為70.59% (24/34)，明顯高于無淋巴結轉移者的35.71%(10/28)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 胃癌組織中SATB1蛋白表達與臨床病理特征的關系(例)

2.3 胃癌組織中SATB1 蛋白表達與預后的關系 本研究2年隨訪觀察期內(nèi)，62例胃癌患者有11例(17.74%)因癌性死亡；根據(jù)隨訪結局將其分為生存組與死亡組，死亡組患者的SATB1 陽性率為81.82%(9/11)，明顯高于生存組的49.02%(25/51)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=3.930，P＜0.05)。對胃癌患者生存資料進行Kaplan-Meier 生存分析，Log-rank 檢驗結果提示，SATB1陰性組整體生存情況優(yōu)于SATB1陽性組，差異有統(tǒng)計學意義(Log-rank χ2=0.024，P＜0.05)，見圖1。

圖1 SATB1陽性和陰性胃癌患者Kaplan-Meier生存曲線分析

3 討論

胃癌是是臨床上具有高致死率的癌癥類型，在我國，胃癌患者確診并接受手術治療后的5 年生存率僅為20%～30%[5]。從原發(fā)病灶發(fā)生侵襲和轉移是胃癌致死的主要原因，因此尋找可能預測胃癌侵襲、轉移的指標對于監(jiān)測病程進展意義重大。SATB1 作為一種細胞特異性的核基質(zhì)結合蛋白，由763 個氨基酸組成，參與組織特異性基因表達以及染色體重塑等，通過為特異性DNA序列和酶等提供停泊位點，SATB1還可以遠距離調(diào)控基因表達過程[6]。報道顯示，SATB1對與腫瘤發(fā)生相關的1 000多個基因具有調(diào)控作用[7-8]，促進腫瘤進展、轉移，因而有“基因組組織者”之稱。

在對原發(fā)性乳腺癌患者的研究中，研究者發(fā)現(xiàn)在惡性程度高的患者組織樣本中，SATB1表達均呈陽性，同時研究還發(fā)現(xiàn)SATB1高表達者具有較差的預后[9]。在前列腺癌的相關研究中，研究者指出SATB1表達與骨轉移和Gleason 評分呈明顯正相關[10]。郭志成等[11]應用免疫組織化學技術檢測了SATB1 在60 例膀胱癌患者癌組織和30例正常膀胱組織中的表達，結果顯示兩者差異有統(tǒng)計學意義。本研究中免疫組化染色結果顯示，胃癌癌組織中STAB1陽性表達率顯著高于癌旁正常組織，提示SATB1在胃癌癌組織中表達上調(diào)。胃癌具有惡性程度高，侵襲性強，易轉移等特點，其發(fā)生、發(fā)展過程受眾多基因調(diào)控，是一個復雜的多步驟、多階段過程[12]。ZHANG 等[13]在一項納入15 項研究，3 174例胃腸道癌患者的薈萃分析中指出SATB1過表達與臨床分期晚、淋巴結轉移以及遠處轉移密切相關，且SATB1過表達通常提示預后不良。本研究通過單因素分析發(fā)現(xiàn)，胃癌癌組織中SATB1陽性表達率與患者性別、年齡、分化程度以及腫瘤部位無關，而與臨床分期和淋巴結轉移具有明顯相關性，其中SATB1陽性表達率在Ⅲ、Ⅳ期患者明顯高于Ⅰ、Ⅱ期患者(69.23% vs 30.43%)，有淋巴結轉移的胃癌患者癌組織SATB1陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移者(70.59%vs 35.71%)，提示胃癌癌組織中SATB1表達上調(diào)可能與胃癌侵襲、轉移相關。事實上，在前列腺癌的相關研究中，研究者發(fā)現(xiàn)SATB1可能通過調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉化而促進前列腺癌轉移[14-15]。本研究分析了所有入選患者的隨訪生存資料，發(fā)現(xiàn)SATB1 陽性表達組整體生存情況不及SATB1陰性表達組，預后相對更差，這一結果與袁春鑾等[16]研究結論相似，其研究中SATB1陰性表達的胃癌患者預后優(yōu)于SATB1陽性表達患者，中位生存期顯著長于陽性表達患者(54.0 個月vs 24.0 個月)，進一步表明SATB1與胃癌患者預后有密切關系。

綜上所述，SATB1 蛋白在在胃癌癌組織中表達上調(diào)，其高表達與胃癌臨床分期晚、淋巴結轉移、預后不良等密切相關，表明SATB1可能在胃癌浸潤和轉移中起重要作用，在預測胃癌惡性程度以及預后判斷中具有重要意義。

本研究不足在于隨訪時間尚短，未能獲得中位生存時間，此外，本研究為小樣本研究，納入病例數(shù)量有限，研究結果可能存在一定偏差，更全面、準確的結果尚需要進行大樣本研究論證。