王彬瑾，李制一，張凝，李斯，林桂芬，周利民，范志剛

1.海南醫(yī)學院基礎醫(yī)學與生命科學學院病原生物學教研室，海南 ?？?571199；

2.海南職業(yè)技術學院，海南 ?？?570100；

3.海南醫(yī)學院科學實驗中心，海南 ?？?571199

菲律賓毛細線蟲(Capillaria philippinensis)又稱腸毛細線蟲，可感染人體導致腸毛細線蟲病(intestinal capillariasis)[1]。2010年，海南省儋州市發(fā)現(xiàn)一例感染菲律賓毛細線蟲病例[2]。2015 年4 月至2016 年9 月?？谑袇^(qū)菜市場淡水魚腸的調(diào)查未發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細線蟲[3-5]。為了解海南其他市縣的相關情況，2016 年11～12 月本課題組結合本省主要河流南渡江、昌化江、萬泉河等的流經(jīng)地區(qū)和出海口情況選取采集點，對瓊海市、陵水黎族自治縣(陵水縣)、樂東黎族自治縣(樂東縣)城區(qū)菜市場的淡水魚及活禽腸道內(nèi)感染菲律賓毛細線蟲情況進行了調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣本采集 從海南省瓊海市、陵水縣、樂東縣城區(qū)菜市場采集鳙魚、羅非魚和鴨類樣本。鳙魚、羅非魚、鴨類的市面售賣價分別為25～30元/尾、4～10元/尾、60～70 元/只。新鮮樣本進行相應處理，淡水魚采集其魚腸(含腸道內(nèi)容物)，禽類采集其糞便。采集的樣本分別裝于干凈封口袋，標明種類、編號，放置冰盒中帶回實驗室當天檢查。

1.2 檢查方法

1.2.1 魚腸及腸道內(nèi)容物檢查 采集的魚腸樣本用鑷子反復刮取2～3次得到分離的腸道內(nèi)容物與魚腸，分離出的腸道內(nèi)容物、魚腸按照編號分別置于相應的培養(yǎng)皿、燒杯中。適量生理鹽水加于裝有腸道內(nèi)容物的培養(yǎng)皿中，混合均勻，直接涂片并記為“糞便”組；50 目鋼篩過濾含有生理鹽水的腸道內(nèi)容物混合液，濾液2 000 r/min離心10 min，取離心沉淀物進行生理鹽水涂片，記為“糞便離心”組。燒杯中的魚腸用外科手術剪縱向剖開，觀察并記錄剖開的腸壁有無病變或穿孔，刮取魚腸腸壁黏膜及附著物，用適量生理鹽水將刮取的物質(zhì)與魚腸一同浸泡于相應編號燒杯中放置3 h，浸泡液2 000 r/min離心10 min，取離心沉淀物進行生理鹽水涂片鏡檢，記為“腸壁”組。魚類的不同涂片組別是指“糞便”組、“糞便離心”組和“腸壁”組。

1.2.2 活禽糞便檢查 操作步驟與1.2.1 魚腸及腸道內(nèi)容物檢查的“糞便”組和“糞便離心”組操作相同，故不重復說明。鴨的不同涂片組別為“糞便”組和“糞便離心”組。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用Excel 整理數(shù)據(jù)并進行χ2檢驗，對比不同地區(qū)菜市場間淡水魚及活禽感染寄生蟲的概率，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 基本情況 瓊海、陵水、樂東城區(qū)菜市場共采集淡水魚魚腸(含腸道內(nèi)容物)177 份(包含野生羅非魚23尾：瓊海市大路鎮(zhèn)文嶺水庫收集14尾，陵水縣收集9尾)，活禽糞便82份，共計259份，未檢出菲律賓毛細線蟲，但發(fā)現(xiàn)其他寄生蟲(寄生蟲)感染。

2.2 淡水魚及禽類腸道內(nèi)寄生蟲的檢出情況 在對樣品進行檢查的過程中，寄生蟲的檢出率為10.39%。其中鳙魚、鴨、羅非魚腸道中寄生蟲的檢出率由高到低分別為21.1%、10.4%、5.94%，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.723，P＜0.05)。

2.2.1 不同涂片組別的檢出情況 同物種不同涂片組別中，鳙魚的糞便組、糞便離心組和腸壁組寄生蟲檢出率分別為3.95%、7.89%和9.21%，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.748，P＞0.05)；羅非魚的糞便組、糞便離心組和腸壁組寄生蟲檢出率分別為2.97%、2.97%和0，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.061，P＞0.05)；鴨的糞便組和糞便離心組寄生蟲檢出率分別為2.60%和7.79%，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.110，P＞0.05)。同一涂片組別不同物種中，不同物種的糞便組之間寄生蟲檢出率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.246，P＞0.05)，不同物種的糞便離心組之間寄生蟲檢出率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.600，P＞0.05)，魚腸組不同物種之間寄生蟲檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.686，P＜0.05)，見表1。

2.2.2 不同地區(qū)的檢出情況 同地區(qū)不同物種中，瓊海市鳙魚、羅非魚和鴨腸道中寄生蟲檢出率分別為16.2%、1.52%和0，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=8.526，P＜0.05)；陵水縣鳙魚、羅非魚和鴨腸道中寄生蟲檢出率分別為22.2%、4.00%和29.2%，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=5.586，P＞0.05)；樂東縣鳙魚、羅非魚和鴨腸道中寄生蟲檢出率分別為28.6%、40.0%和2.00%，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=15.682，P＜0.05)。同物種不同地區(qū)中，鳙魚不同地區(qū)之間寄生蟲檢出率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.250，P＞0.05)，羅非魚不同地區(qū)之間寄生蟲檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=23.242，P＜0.05)，鴨不同地區(qū)之間寄生蟲檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=13.217，P＜0.05)，見表2。

表1 不同涂片組別不同物種腸道內(nèi)寄生蟲的檢出情況

表2 不同地區(qū)不同物種中寄生蟲的檢出情況

3 討論

菲律賓毛細線蟲主要流行于東南亞地區(qū)，可以影響腸道吸收功能，造成液體、蛋白質(zhì)和電解質(zhì)流失，導致低蛋白血癥和低鉀血癥等[1]。2010年海南省報道第一例菲律賓毛細線蟲病例[2]。2015 年至2016 年課題組采集?？谑袇^(qū)的大量樣本展開相應調(diào)查，以了解?？谑蟹坡少e毛細線蟲的感染情況，結果未發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細線蟲的感染[3-5]。根據(jù)海南省各市縣分布情況及河流分布特點，本次調(diào)查以東線萬泉河入?？诃偤Ｊ小⑽骶€昌化江流經(jīng)地樂東縣及兩地居中點陵水縣作為采集點，以小樣本量抽樣的方式進行調(diào)查。調(diào)查結果與李斯等[5]海口市區(qū)菜市場淡水魚菲律賓毛細線蟲感染情況的相關報道一致，未發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細線蟲。本課題組2016年9月至2018年10月在?？诶^續(xù)進行大樣本量調(diào)研也沒有發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細線蟲。這可能與調(diào)查地點菜市場的淡水魚主要來自人工養(yǎng)殖魚塘有關[3]。本調(diào)查采集對象主要為菜市場的淡水魚禽，而2010 年報道的海南儋州菲律賓毛細線蟲病病例的起因為患者生食泥鰍[2]。這可能也是調(diào)查未檢出菲律賓毛細線蟲的原因之一。因此，瓊海、陵水、樂東城區(qū)菜市場淡水魚及禽類與海口市區(qū)菜市場的淡水魚一樣不存在菲律賓毛細線蟲感染市民的風險。

本調(diào)查結果與王延等[3]、但彩虹等[4]?？谑袇^(qū)菜市場菲律賓毛細線蟲感染情況調(diào)查中檢出其他寄生蟲的結果相似，發(fā)現(xiàn)了其他寄生蟲的感染。本調(diào)查顯示瓊海、樂東地區(qū)鳙魚的寄生蟲檢出率、羅非魚的寄生蟲檢出率及鴨的寄生蟲檢出率之間的差異均具有統(tǒng)計學意義。海南島有三大主要淡水河流，分別為南渡江、昌化江、萬泉河。萬泉河的南北支流于瓊海市合口咀匯合，昌化江流經(jīng)樂東縣并且為樂東境內(nèi)兩大河流之一。不同流域的內(nèi)部環(huán)境多樣復雜，河流中所棲居的生物也不盡相同。這可能是造成其檢出率差異的原因之一。本調(diào)查還顯示鳙魚的腸壁寄生蟲檢出率高于羅非魚的檢出率。因此，不同地區(qū)居民食用不同淡水魚禽可能感染寄生蟲的風險將有所不同。文獻顯示，國內(nèi)不同地區(qū)淡水魚感染寄生蟲的概率有所不同，人們生食(或半生食)淡水魚將存在感染寄生蟲的風險[6-9]。近年來人們對食材的口感、新鮮度有了更高追求，在魚類食材的處理方面，不少當?shù)鼐用襁x擇將其制成魚類刺身、魚生粥等菜肴后食用；而對家禽類食材的常見處理，海南多數(shù)家庭偏愛于將其煮至快熟的半生狀態(tài)后斬件、斬塊食用(簡稱白斬)。這些飲食行為和習慣將增加居民感染寄生蟲的風險。因此，當?shù)鼐用駪岣叻婪兑庾R，將淡水魚禽煮熟煮透后食用，當?shù)胤酪卟块T也應當做好相應的預防宣傳、定期檢疫等工作。

為了明確瓊海、陵水和樂東是否是菲律賓毛細線蟲的自然疫源地，本課題組之后將根據(jù)實際情況前往當?shù)厮畮臁⒑恿骷皾竦氐鹊貐^(qū)對野生淡水魚、泥鰍、水禽及候鳥等進行調(diào)研。