倪開嶺，李紅，馮一彤，何婷婷，柴軍紅*

(1.牡丹江師范學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157012；2.牡丹江友搏藥業(yè)有限責(zé)任公司，黑龍江 牡丹江 157013)

山桃稠李(Prunusmaackii)，別名斑葉稠李、臭李子，薔薇科植物[1]。果實(shí)紫黑色，外形近球形，多汁味酸甜，富含維生素C、多酚、花色苷等，具有一定抗氧化能力[2]。由于多酚及花青素成分含量較高，其可能具有降血糖、降血脂、提高耐力，抗腫瘤作用等活性[3-4]?；ㄉ諡轭慄S酮物質(zhì)，具有顯著抗逆作用，可以提高視力[3-5]?，F(xiàn)階段研究以園藝、栽培研究為主，其工藝提取相對(duì)較少。

本文以牡丹江產(chǎn)山桃稠李(Prunusmaackii)果實(shí)為原料，以花色苷為指標(biāo)，借助超聲波輔助法，探討對(duì)其提取率影響的主要因素，并研究其抗氧化能力，希望為山桃稠李開發(fā)利用、活性成分提取純化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

氫氧化鈉(AR，上海國藥集團(tuán))，無水乙醇(AR,天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)，鹽酸(AR，天津市富宇精細(xì)化工有限公司)等。

1.2 主要儀器

SL-2010N超聲波萃取裝置(南京順流設(shè)備有限公司)，DS-1高速組織勻漿機(jī)(無錫杰瑞安儀器設(shè)備有限公司)，RE-2000E旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(河南佰澤儀器有限公司)，T6紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)，BSA224S電子天平(德國賽多利斯集團(tuán))等。

1.3 活性成分測(cè)定方法

1.3.1 最大吸收波長確定。以pH為1.0乙醇溶液為空白，對(duì)提取的花色苷溶液在400～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，確定最大吸收波長。其結(jié)果顯示，在波長為512 nm處該花色苷有明顯的特征吸收峰，所以確定其為測(cè)定波長。

1.3.2 樣品測(cè)定。依據(jù)文獻(xiàn)[6-7]，采用pH示差法，略有改動(dòng)，其計(jì)算公式如下：

C(mg/g)=(A0-A1)×V×N×M/(ε×m)

式中: A0、A1 —分別為pH1.0、pH4.5時(shí)花色苷在λmax處的吸光值

V —提取液總體積(mL )

N —稀釋倍數(shù)

M —矢車菊-3-葡萄糖苷的相對(duì)分子質(zhì)量(449.4)

ε—矢車菊-3-葡萄糖苷的消光系數(shù)(29600)

m —樣品質(zhì)量(g)

1.4 主要影響因素試驗(yàn)

選擇固液比、提取時(shí)間、乙醇濃度、超聲波功率和提取溫度等為因素[8-9]，進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。

1.4.1 固液比對(duì)得率的影響。果實(shí)在高速組織勻漿機(jī)后，精密稱取10.00 g，以75%為溶劑，調(diào)節(jié)pH為1，超聲功率450 W，提取溫度為30 ℃，超聲提取時(shí)間30 min，固液比(g/mL)1∶5～1∶35，間隔5倍。再依據(jù)1.3.2方法測(cè)定其得率。

1.4.2 提取時(shí)間對(duì)得率的影響。取樣同1.4.1，選取超聲波提取時(shí)間5、10、15、25、35、45、55 min，超聲功率450 W，固液比1∶20，以75%為溶劑，調(diào)節(jié)pH為1，提取溫度為30 ℃進(jìn)行試驗(yàn)。再依據(jù)1.3.2方法測(cè)定其得率。

1.4.3 乙醇濃度對(duì)得率的影響。取樣同1.4.1，間隔10%，選取乙醇濃度為25%～95%，超聲功率450 W，固液比1∶20，調(diào)節(jié)pH為1，提取溫度為30 ℃，提取時(shí)間35 min進(jìn)行試驗(yàn)。再依據(jù)1.3.2方法測(cè)定其得率。

1.4.4 溫度對(duì)得率的影響。取樣同1.4.1，調(diào)節(jié)pH為1，間隔10 ℃，提取溫度為20～80 ℃，固液比1∶20，乙醇濃度70%，超聲功率450 W進(jìn)行試驗(yàn)。再依據(jù)1.3.2方法測(cè)定其得率。

1.4.5 超聲波功率對(duì)得率的影響。取樣同1.4.1，調(diào)節(jié)pH為1，提取溫度40 ℃，超聲時(shí)間35 min，固液比1∶20，乙醇濃度70%，間隔150 W，超聲功率150～900 W進(jìn)行試驗(yàn)。再依據(jù)1.3.2方法測(cè)定其得率。

1.5 抗氧化研究

依據(jù)以上提取因素，取其因素極值為參數(shù)，獲得花色苷提取物。依據(jù)文獻(xiàn)[10-12]方法采用鄰苯三酚自氧化法討論超氧自由基清除能力測(cè)定，總時(shí)間控制在3.5～4.0 min內(nèi)，依據(jù)以下公式計(jì)算清除率，檢測(cè)3次結(jié)果取平均值。

清除率(%)=[(S1-S2)/S1]×100

式中，S1為自氧化時(shí)吸光度，S2為加入樣品液后吸光度。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用Excel2010及origin8處理并作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 固液比對(duì)得率影響結(jié)果

圖1 固液比的影響

由圖1所示，隨著固液比增加其花色苷得率顯著提高，在1∶15左右達(dá)到極值，然后緩慢降低，在1∶35時(shí)降低約5%，綜合考慮費(fèi)效比，選取1∶15左右最佳固液比范圍。

2.2 提取時(shí)間對(duì)得率影響結(jié)果

由圖2所得，隨著提取時(shí)間延伸，花色苷得率呈總體上升趨勢(shì)，在40～55 min范圍內(nèi)存在得率拐點(diǎn)，后續(xù)增加提取時(shí)間，得率略有下降，但是趨勢(shì)較為平緩，數(shù)據(jù)相差不大，考慮工藝時(shí)間盡可能的短，提高效率，其參數(shù)在40 min左右即可。

圖2 提取時(shí)間的影響

2.3 乙醇濃度對(duì)得率影響結(jié)果

由圖3可知，隨著乙醇濃度增加花色苷得率逐步提高，在60%～75%之間達(dá)到極值，隨著濃度升高略有下降，這可能與花色較大極性有一定關(guān)系。所以選擇60%左右可以作為提取用乙醇濃度。

圖3 乙醇濃度的影響

2.4 溫度對(duì)得率的影響結(jié)果

圖4 溫度的影響

由圖4可知，在溫度40 ℃是得率最高，達(dá)到0.873 mg/g，但是隨著溫度升高其得率顯著降低，如80 ℃時(shí)，得率是最高值時(shí)35.3%，分析原因這與花色苷對(duì)熱穩(wěn)定差異有直接關(guān)系，隨著溫度升高，花色苷出現(xiàn)較大范圍氧化現(xiàn)象，所以選擇40 ℃左右為提取最佳溫度。

2.5 超聲波功率對(duì)得率的影響結(jié)果

圖5 超聲功率的影響

由圖5可知，隨著功率增加，花色苷得率趨于平衡，在400 W以上得率基本變化不大。考慮經(jīng)濟(jì)因素，在400～500 W范圍內(nèi)可以作為較好超聲提取功率范圍。

2.6 花色苷對(duì)超氧自由基的清除作用

由圖6可見，濃度在0.8 mg/mL花色苷對(duì)超氧自由基的清除率在20%以上，隨著花色苷濃度升高其清除作用逐漸加強(qiáng)。其抗氧化能力較弱，這與其純度不高有一定關(guān)系。

圖6 超氧自由基的清除

3 結(jié)論

對(duì)黑龍江山桃稠李果實(shí)花色苷提取及超氧自由基清除能力進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示超聲波提取法有利于花色苷的提取，并具有提取時(shí)間短、耗能相對(duì)較低的特點(diǎn)。其花色苷得率為0.8 mg/g，同時(shí)花色苷也顯示出一定抗氧化能力，由于實(shí)驗(yàn)中采用粗產(chǎn)品，未進(jìn)行純化，與文獻(xiàn)[13]結(jié)果存在有差異。

總之，超聲波提取法具有快速節(jié)省溶劑的優(yōu)點(diǎn)，山桃稠李果實(shí)花色苷有進(jìn)一步開發(fā)研究價(jià)值。