尹德晶， 陳 靜， 楊 鵬， 謝曉東， 李喬斌， 王開功，2*， 程振濤，2， 岳 筠

(1. 貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025； 2. 貴州省動(dòng)物疫病研究室，貴州 貴陽 550025； 3. 貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550008)

2019年11月，福泉市某雞場出現(xiàn)發(fā)病死亡病例，發(fā)病率17%，病死率6%。病雞初期臨床癥狀主要表現(xiàn)為精神沉郁，食欲減退，羽毛粗亂，隨后部分病雞出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)，腿或翅膀單側(cè)或雙側(cè)半癱或全癱，呈典型的“劈叉”姿勢，排黃綠色稀糞，采食困難，脫水消瘦，突然死亡。剖檢可見單側(cè)坐骨神經(jīng)腫大。根據(jù)臨床癥狀尤其是神經(jīng)癥狀和病理變化，初步診斷為神經(jīng)型雞馬立克氏病。為了確診感染病原，特進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)診斷，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料無菌采集病雞的腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、關(guān)節(jié)囊積液作為檢測病料。

1.1.2 主要試劑禽流感病毒通用型熒光定量RT-PCR試劑盒、新城疫病毒熒光定量RT-PCR試劑盒，均購自北京世紀(jì)元亨生物科技有限公司；馬立克氏病病毒熒光定量PCR試劑盒，購自深圳真瑞生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 相關(guān)病毒核酸檢測提取病雞的肺臟、肝臟、脾臟、腦組織樣品核酸，分別應(yīng)用相應(yīng)試劑盒進(jìn)行禽流感病毒、新城疫病毒、馬立克氏病病毒核酸檢測。

1.2.2 雞滑液囊支原體檢測提取病雞關(guān)節(jié)囊積液樣品核酸，采用雞滑液囊支原體特異性引物(上游引物MS1：5’-GCCATTGCTCCTGCTGTTATA-3’；下游引物 MS2：5’-GGGTAGTCCACTCGCATT-3’)進(jìn)行滑液囊支原體PCR核酸檢測。

1.2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)無菌操作取病雞肝臟、腎臟、心臟、脾臟組織，接種于血瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)16 h觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 病毒核酸檢測結(jié)果

2.1.1 新城疫病毒核酸檢測由圖1可見：陽性對(duì)照Cq值為22，檢測樣品無特定擴(kuò)增曲線且Cq值為0，提示組織樣品中不存在新城疫病毒。

2.1.2 禽流感病毒核酸檢測由圖2可見：陽性對(duì)照Cq值為24，檢測樣品無特定擴(kuò)增曲線且Cq值為0，提示組織樣品中不存在禽流感病毒。

2.1.3 馬立克氏病病毒核酸檢測由圖3可見：陽性對(duì)照Cq值為22，檢測樣品Cq值為26且有特定擴(kuò)增曲線，提示樣品中存在馬立克氏病病毒。

2.1.4 雞滑液囊支原體核酸檢測由圖4可見：檢測樣品未擴(kuò)增出773 bp大小的目的條帶，雞滑液囊支原體核酸檢測結(jié)果為陰性，提示檢測樣品中不存在雞滑液囊支原體。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果由圖5可見：血瓊脂培養(yǎng)基上無典型菌落生長，提示樣品無細(xì)菌感染。

3 結(jié)論

經(jīng)實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢測，確診本病例為馬立克氏病病毒感染。

4 討論

4.1雞馬立克氏病是由皰疹病毒科的馬立克氏病病毒引起的1種高度接觸傳染性、淋巴組織增生性腫瘤疾病，臨床上以運(yùn)動(dòng)障礙、一腿或雙腿麻痹、下痢等為特征，不同品種、日齡的雞均可發(fā)病，以50～70日齡多見，各季節(jié)均可發(fā)生。本病表現(xiàn)型為4種類型：神經(jīng)型、內(nèi)臟型、眼型和皮膚型，內(nèi)臟型和神經(jīng)型多見[1]。馬立克氏病是危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的三大主要疫病之一，可感染雞、火雞、鵪鶉等，其中雞最易感，哺乳動(dòng)物不感染，臨床上常和其他疫病發(fā)生混合感染[2～5]。馬立克氏病病毒可通過呼吸道和消化道直接或間接傳播，病雞脫落的角化毛囊、毛屑及分泌物、排泄物等均是重要傳染源[6]。神經(jīng)型主要侵害外周神經(jīng)， 以坐骨神經(jīng)多見，病雞表現(xiàn)為難以站立，呈一腿向前、一腿向后的“劈叉”姿勢[7]。目前規(guī)范使用疫苗仍是防控馬立克氏病的主要措施，由于具有高度接觸傳染性，減小雞群的飼養(yǎng)密度和保持雞舍良好的環(huán)境衛(wèi)生對(duì)于減少該病的發(fā)生也具有重要作用。

4.2對(duì)于該病的防制，建議養(yǎng)殖場規(guī)范使用疫苗進(jìn)行免疫，在雛雞出生24 h內(nèi)進(jìn)行雞馬立克氏病疫苗皮下接種；發(fā)現(xiàn)病雞立即撲殺，并對(duì)尸體進(jìn)行無害化處理，雞舍嚴(yán)格消毒，同群雞進(jìn)行隔離；進(jìn)行種雞凈化和引種檢測；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意微量元素和維生素的補(bǔ)充以提高雞群免疫力；定期清洗和消毒雞舍，合理安排雞群飼養(yǎng)密度；注意避免人員活動(dòng)帶來的污染，外來人員進(jìn)出要有消毒措施。