楊通蓮， 潘文章， 楊 魯， 梁美英， 汪忠榮

(1. 貴州省從江縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 從江 557400； 2. 黔東南苗族侗族自治州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 凱里 556000)

布魯氏菌病是由布魯氏菌(Brucella)引起的人畜共患傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為二類(lèi)動(dòng)物疫病，國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)列為乙類(lèi)傳染病[1]。從江縣是貴州省南大門(mén)，隸屬黔東南苗族侗族自治州，與廣西三江、融水、環(huán)江接壤，從江香豬是當(dāng)?shù)靥厣珒?yōu)質(zhì)畜品種資源。近年來(lái)，因肉羊市場(chǎng)看好，政府加大對(duì)羊養(yǎng)殖行業(yè)的扶持力度，羊的飼養(yǎng)量日益增多，但盲目引種和無(wú)序流動(dòng)也日漸頻繁，周邊縣區(qū)相繼監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)羊布魯氏菌病感染。2017—2019年動(dòng)物疫控中心對(duì)全縣所有羊群開(kāi)展布魯氏菌病監(jiān)測(cè)，以便及時(shí)掌握疫情動(dòng)態(tài)，防止和控制該病的發(fā)生和傳播，保護(hù)人畜健康。現(xiàn)將監(jiān)測(cè)情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品2017—2019年對(duì)全縣18個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)221個(gè)養(yǎng)殖戶(hù)每戶(hù)按羊存欄數(shù)的30%抽樣采集血液，共2 769份血樣，分離血清，冰箱 -20 ℃保存待檢。

1.2 試劑布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)抗原(青島易邦生物工程有限公司，批號(hào)：20170040601、201700406013)，標(biāo)準(zhǔn)陰性、陽(yáng)性血清(青島易邦生物工程有限公司，批號(hào)：2071204、2071203)，均由黔東南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供。

1.3 方法[2]

1.3.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)(1)將檢測(cè)血清、標(biāo)準(zhǔn)血清(陰性、陽(yáng)性)和抗原從冰箱取出平衡至室溫。

(2)渦旋混勻血清和抗原，分別吸取血清和抗原25 μL 加于玻璃板4 cm2方格內(nèi)的兩側(cè)。(3)用滅菌牙簽快速混勻血清和抗原，涂成2 cm直徑的圓形，混勻后4 min在自然光下觀察。同時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰性、陽(yáng)性血清對(duì)照。結(jié)果為陽(yáng)性者再用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)核校驗(yàn)。

1.3.2 試管凝集試驗(yàn)(1)每份血清用4個(gè)連續(xù)的U型孔，在反應(yīng)板的第1孔加稀釋液184 μL，第2～4孔各加入稀釋液100 μL，用微量移液器取樣品 16 μL 加入第1孔，混勻。從第1孔吸取混合液100 μL加入第2孔充分混勻，如此倍比稀釋至第4孔，從第4孔棄去混合液100 μL。(2)按說(shuō)明書(shū)取生理鹽水1 mL稀釋抗原，充分混勻。(3)取稀釋抗原100 μL加入上述各孔稀釋血清中，震蕩混勻，用塑料薄膜封板，放置于37 ℃ 孵育18～24 h，取出觀察并記錄結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

1.4.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)(1)在標(biāo)準(zhǔn)陰性血清不出現(xiàn)凝集，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清出現(xiàn)凝集時(shí)試驗(yàn)成立，方可對(duì)檢測(cè)血清進(jìn)行判定。(2)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集現(xiàn)象者判定為陽(yáng)性(+)，無(wú)凝集現(xiàn)象且反應(yīng)混合液呈均勻粉紅色者判定為陰性(-)。

1.4.2 試管凝集試驗(yàn)(1)當(dāng)陽(yáng)性血清出現(xiàn)完全凝集(++++)，而陰性血清無(wú)凝集(-)，抗原對(duì)照無(wú)自凝(-)現(xiàn)象時(shí)試驗(yàn)成立。(2)檢測(cè)血清出現(xiàn)“++”及以上的凝集現(xiàn)象判定為陽(yáng)性；出現(xiàn)“+”凝集現(xiàn)象判定為可疑；出現(xiàn)“-”判定為陰性。(3)試驗(yàn)可疑羊經(jīng)30 d采血重檢，如果仍為可疑則判定為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)，2017年218份血清樣品和2019年1 454份血清樣品均為陰性。2018年1 097份血清樣品有7份為陽(yáng)性，陽(yáng)性率0.64%(7/1 097)，見(jiàn)表1。

3 討論

3.12018年以前從江縣養(yǎng)殖業(yè)一直以從江香豬為主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)，農(nóng)戶(hù)主要以養(yǎng)豬為主，牛羊飼養(yǎng)量較少，且大多為自繁自養(yǎng)，因此在2018年以前未檢測(cè)出布魯氏菌病陽(yáng)性羊。自2018年以來(lái)，政府大力支持產(chǎn)業(yè)扶貧，牛羊飼養(yǎng)量大幅度增加，不少老百姓把養(yǎng)羊作為致富門(mén)路，但對(duì)《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》等相關(guān)法律法規(guī)缺乏了解，沒(méi)有遵照《種畜禽調(diào)運(yùn)檢疫技術(shù)規(guī)范》，未經(jīng)申報(bào)批準(zhǔn)就盲目私自從外縣或外省購(gòu)買(mǎi)羊群，未進(jìn)行相關(guān)疫病特別是布魯氏菌病的檢疫。2018年檢測(cè)發(fā)現(xiàn)7例布魯氏菌病抗體陽(yáng)性羊來(lái)自2個(gè)養(yǎng)殖戶(hù)，據(jù)調(diào)查了解畜主均未經(jīng)畜牧獸醫(yī)行政主管部門(mén)許可，私自從外地引進(jìn)羊。在監(jiān)測(cè)中還發(fā)現(xiàn)農(nóng)戶(hù)引種渠道混亂，從多個(gè)地方引種混群現(xiàn)象非常普遍，造成病源追溯困難。因此，今后要加強(qiáng)對(duì)家畜布魯氏菌病防控知識(shí)的宣傳，增強(qiáng)疫病風(fēng)險(xiǎn)防范意識(shí)，加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物引種的管理和流通環(huán)節(jié)的檢疫，指導(dǎo)農(nóng)戶(hù)從非疫區(qū)引種。

3.2檢出陽(yáng)性羊的2個(gè)養(yǎng)殖戶(hù)分別來(lái)自2個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，說(shuō)明一些鄉(xiāng)鎮(zhèn)或村級(jí)獸醫(yī)防疫員對(duì)家畜布魯氏菌病防控認(rèn)識(shí)不足，個(gè)別人員沒(méi)有如實(shí)匯報(bào)種用羊群來(lái)源和養(yǎng)殖信息，或?qū)Ξ?dāng)?shù)仞B(yǎng)殖信息掌握不準(zhǔn)確等，疫病防治工作存在應(yīng)付和被動(dòng)現(xiàn)象。因此，應(yīng)定期對(duì)基層獸醫(yī)防疫員進(jìn)行業(yè)務(wù)培訓(xùn)，提高防疫水平。

3.32018年檢測(cè)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性羊后，從江縣政府將布魯氏菌病防控工作納入日常工作范圍，對(duì)羊布魯氏菌的防控措施層層落實(shí)，從上到下進(jìn)行專(zhuān)人抓管，嚴(yán)格引種制度，定期檢疫，對(duì)全縣所有羊群全面普查，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性羊全群撲殺，并無(wú)害化處理，嚴(yán)禁病畜流入市場(chǎng)，對(duì)環(huán)境進(jìn)行全面消毒，2019年監(jiān)測(cè)均為陰性，保證了全縣養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。