楊通蓮， 潘文章， 楊 魯， 梁美英， 汪忠榮

(1. 貴州省從江縣動物疫病預防控制中心，貴州 從江 557400； 2. 黔東南苗族侗族自治州動物疫病預防控制中心，貴州 凱里 556000)

布魯氏菌病是由布魯氏菌(Brucella)引起的人畜共患傳染病，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為二類動物疫病，國家衛(wèi)生健康委員會列為乙類傳染病[1]。從江縣是貴州省南大門，隸屬黔東南苗族侗族自治州，與廣西三江、融水、環(huán)江接壤，從江香豬是當?shù)靥厣珒?yōu)質(zhì)畜品種資源。近年來，因肉羊市場看好，政府加大對羊養(yǎng)殖行業(yè)的扶持力度，羊的飼養(yǎng)量日益增多，但盲目引種和無序流動也日漸頻繁，周邊縣區(qū)相繼監(jiān)測發(fā)現(xiàn)羊布魯氏菌病感染。2017—2019年動物疫控中心對全縣所有羊群開展布魯氏菌病監(jiān)測，以便及時掌握疫情動態(tài)，防止和控制該病的發(fā)生和傳播，保護人畜健康?，F(xiàn)將監(jiān)測情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品2017—2019年對全縣18個鄉(xiāng)鎮(zhèn)221個養(yǎng)殖戶每戶按羊存欄數(shù)的30%抽樣采集血液，共2 769份血樣，分離血清，冰箱 -20 ℃保存待檢。

1.2 試劑布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗抗原(青島易邦生物工程有限公司，批號：20170040601、201700406013)，標準陰性、陽性血清(青島易邦生物工程有限公司，批號：2071204、2071203)，均由黔東南州動物疫病預防控制中心提供。

1.3 方法[2]

1.3.1 虎紅平板凝集試驗(1)將檢測血清、標準血清(陰性、陽性)和抗原從冰箱取出平衡至室溫。

(2)渦旋混勻血清和抗原，分別吸取血清和抗原25 μL 加于玻璃板4 cm2方格內(nèi)的兩側(cè)。(3)用滅菌牙簽快速混勻血清和抗原，涂成2 cm直徑的圓形，混勻后4 min在自然光下觀察。同時設標準陰性、陽性血清對照。結(jié)果為陽性者再用試管凝集試驗進行復核校驗。

1.3.2 試管凝集試驗(1)每份血清用4個連續(xù)的U型孔，在反應板的第1孔加稀釋液184 μL，第2～4孔各加入稀釋液100 μL，用微量移液器取樣品 16 μL 加入第1孔，混勻。從第1孔吸取混合液100 μL加入第2孔充分混勻，如此倍比稀釋至第4孔，從第4孔棄去混合液100 μL。(2)按說明書取生理鹽水1 mL稀釋抗原，充分混勻。(3)取稀釋抗原100 μL加入上述各孔稀釋血清中，震蕩混勻，用塑料薄膜封板，放置于37 ℃ 孵育18～24 h，取出觀察并記錄結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

1.4.1 虎紅平板凝集試驗(1)在標準陰性血清不出現(xiàn)凝集，標準陽性血清出現(xiàn)凝集時試驗成立，方可對檢測血清進行判定。(2)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判定為陽性(+)，無凝集現(xiàn)象且反應混合液呈均勻粉紅色者判定為陰性(-)。

1.4.2 試管凝集試驗(1)當陽性血清出現(xiàn)完全凝集(++++)，而陰性血清無凝集(-)，抗原對照無自凝(-)現(xiàn)象時試驗成立。(2)檢測血清出現(xiàn)“++”及以上的凝集現(xiàn)象判定為陽性；出現(xiàn)“+”凝集現(xiàn)象判定為可疑；出現(xiàn)“-”判定為陰性。(3)試驗可疑羊經(jīng)30 d采血重檢，如果仍為可疑則判定為陽性。

2 結(jié)果

經(jīng)檢測，2017年218份血清樣品和2019年1 454份血清樣品均為陰性。2018年1 097份血清樣品有7份為陽性，陽性率0.64%(7/1 097)，見表1。

3 討論

3.12018年以前從江縣養(yǎng)殖業(yè)一直以從江香豬為主導產(chǎn)業(yè)，農(nóng)戶主要以養(yǎng)豬為主，牛羊飼養(yǎng)量較少，且大多為自繁自養(yǎng)，因此在2018年以前未檢測出布魯氏菌病陽性羊。自2018年以來，政府大力支持產(chǎn)業(yè)扶貧，牛羊飼養(yǎng)量大幅度增加，不少老百姓把養(yǎng)羊作為致富門路，但對《中華人民共和國動物防疫法》等相關法律法規(guī)缺乏了解，沒有遵照《種畜禽調(diào)運檢疫技術規(guī)范》，未經(jīng)申報批準就盲目私自從外縣或外省購買羊群，未進行相關疫病特別是布魯氏菌病的檢疫。2018年檢測發(fā)現(xiàn)7例布魯氏菌病抗體陽性羊來自2個養(yǎng)殖戶，據(jù)調(diào)查了解畜主均未經(jīng)畜牧獸醫(yī)行政主管部門許可，私自從外地引進羊。在監(jiān)測中還發(fā)現(xiàn)農(nóng)戶引種渠道混亂，從多個地方引種混群現(xiàn)象非常普遍，造成病源追溯困難。因此，今后要加強對家畜布魯氏菌病防控知識的宣傳，增強疫病風險防范意識，加強對動物引種的管理和流通環(huán)節(jié)的檢疫，指導農(nóng)戶從非疫區(qū)引種。

3.2檢出陽性羊的2個養(yǎng)殖戶分別來自2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，說明一些鄉(xiāng)鎮(zhèn)或村級獸醫(yī)防疫員對家畜布魯氏菌病防控認識不足，個別人員沒有如實匯報種用羊群來源和養(yǎng)殖信息，或?qū)Ξ數(shù)仞B(yǎng)殖信息掌握不準確等，疫病防治工作存在應付和被動現(xiàn)象。因此，應定期對基層獸醫(yī)防疫員進行業(yè)務培訓，提高防疫水平。

3.32018年檢測發(fā)現(xiàn)陽性羊后，從江縣政府將布魯氏菌病防控工作納入日常工作范圍，對羊布魯氏菌的防控措施層層落實，從上到下進行專人抓管，嚴格引種制度，定期檢疫，對全縣所有羊群全面普查，發(fā)現(xiàn)陽性羊全群撲殺，并無害化處理，嚴禁病畜流入市場，對環(huán)境進行全面消毒，2019年監(jiān)測均為陰性，保證了全縣養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。